The 2-DE procedureswere performed a

The 2-DE procedureswere performed according to our previous study with several
modifications (Jiang et al., 2008; Wang et al., 2012). The liver tissue samples were
processed in sextuplicate, and a total of 24 gels were used. For the first-dimension
electrophoresis, 150-μg protein sampleswere mixed with 350 μL of rehydration buffer
comprised of 9.5 mol/L urea, 2% CHAPS, 0.28% DTT, 1% immobilized pH gradient buffer
with pH 3–10 (Bio-Rad), and 0.002% bromophenol blue (Sigma-Aldrich). The samples
were then applied to an Ettan IPGphor3 isoelectric focusing electrophoresis system
(GE Healthcare, USA). The samples were rehydrated for 10 h prior to isoelectric focusing
using the following programmes: (a) linear increase up to 500 V over 1 h;
(b) holding at 500 V for 2 h; (c) linear increase up to 1000 V over 4 h; (d) linear increase
up to 10,000 V over 3 h; and (e) final hold at 10,000 V to reach a total of
90,000 V × h. The focused immobilized pH gradient gel strips equilibrated for 15 min
in a solution comprised of 50 mmol/L Tris–HCl at pH 8.8, 6 mol/L urea, 30% glycerol,
2% sodium dodecyl sulphate (SDS) (USB Corporation), and 20 mmol/L DTT. This
process was followed by an incubation step with the identical buffer containing
20 mmol/L iodoacetamide (Sigma-Aldrich) for another 15 min. The seconddimension
separation was performed in 1-mm-thick pH 8.8 12.5% polyacrylamide
gels by SDS-PAGE. The run profile was a constant current of 30 mA for 30 min followed
by a 60-mA current for the remainder of the analysis until the bromophenol
blue line arrives at the bottom of the gels.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Procedureswere 2 DE ดำเนินการตามศึกษาก่อนหน้านี้ของเราด้วยแก้ไข (Jiang et al., 2008 วัง et al., 2012) ตัวอย่างเนื้อเยื่อตับได้ดำเนินการใน sextuplicate และใช้จำนวนเจ 24 ในมิติแรกelectrophoresis, 150-μg โปรตีน sampleswere ผสมกับ μL 350 rehydration บัฟเฟอร์ตั้งแต่ 9.5 โมล/L ยูเรีย CHAPS 2%, 0.28% DTT บัฟเฟอร์ pH 1% หาไล่ระดับมีค่า pH 3-10 (ไบ-Rad), และ 0.002% bromophenol บลู (ซิก-Aldrich) ตัวอย่างใช้แล้วจะมี Ettan IPGphor3 isoelectric electrophoresis ระบบ(GE แพทย์ สหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างถูก rehydrated สำหรับ h 10 ก่อนเน้น isoelectricใช้โปรแกรมต่อไปนี้: เพิ่มเส้น (a) ถึง 500 กว่า 1 h; V(ข) ถือที่ 500 V สำหรับ 2 h (c) เชิงเส้นเพิ่มขึ้นถึง 1000 V กว่า 4 h (d) เพิ่มขึ้นเส้นถึง 10000 กว่า 3 h; V ค้างไว้สุดท้าย (e) ที่ V 10000 ถึงจำนวน90000 V × h แผ่นเจลไล่ระดับค่า pH เอนไซม์เน้นที่ equilibrated สำหรับ 15 นาทีในโซลูชันที่ประกอบด้วย 50 mmol/L ตรี – HCl ที่ pH 8.8, 6 โมล/L ยูเรียกลีเซอร 30%2% โซเดียม dodecyl ซัลเฟต (SDS) (USB Corporation), และ 20 mmol/L DTT นี้กระบวนการได้ตามขั้นตอนการบ่มด้วยบัฟเฟอร์เหมือนประกอบด้วยiodoacetamide 20 mmol/L (ซิก-Aldrich) ในอีก 15 นาที Seconddimensionแยกทำใน pH 1 มม.หนา 8.8 polyacrylamide 12.5%เจ โดย SDS-หน้า โพรไฟล์การทำงานมีกระแสคงที่ 30 mA สำหรับ 30 นาทีตามโดยปัจจุบัน 60 mA สำหรับส่วนเหลือของการวิเคราะห์จนกระทั่ง bromophenolเส้นสีน้ำเงินมาถึงที่ด้านล่างของเจ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2-DE procedureswere ดำเนินการตามการศึกษาก่อนหน้านี้ที่มีหลาย
การปรับเปลี่ยน (เจียงและคณะ, 2008;.. วังและคณะ, 2012) ตัวอย่างเนื้อเยื่อตับถูก
ประมวลผลใน sextuplicate และรวม 24 เจลถูกนำมาใช้ สำหรับครั้งแรกมิติ
electrophoresis โปรตีน 150 ไมโครกรัม sampleswere ผสมกับ 350 ไมโครลิตรของ buffer การคืน
ประกอบด้วย 9.5 mol / L ยูเรีย CHAPS 2%, 0.28% DTT, 1% ค่า pH บัฟเฟอร์ลาดตรึง
กับค่า pH 3-10 (Bio-Rad ) และ 0.002% Bromophenol สีฟ้า (Sigma-Aldrich) ตัวอย่าง
ถูกนำไปใช้แล้วเพื่อ Ettan IPGphor3 Isoelectric ระบบโฟกัสอิเล็ก
(GE Healthcare, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ตัวอย่างถูก rehydrated 10 ชั่วโมงก่อนที่จะ Isoelectric มุ่งเน้น
การใช้โปรแกรมดังต่อไปนี้ (ก) การเพิ่มขึ้นเชิงเส้นได้ถึง 500 V กว่า 1 ชั่วโมง;
(ข) การถือครองที่ 500 V 2 ชั่วโมง; (ค) การเพิ่มขึ้นเชิงเส้นได้ถึง 1000 V กว่า 4 ชั่วโมง; (ง) การเพิ่มขึ้นเชิงเส้น
ได้ถึง 10,000 V เกิน 3 ชั่วโมง; และ (จ) ถือเป็นครั้งสุดท้ายที่ 10,000 โวลต์ในการเข้าถึงทั้งหมด
90,000 V ×สูง มุ่งเน้นไปที่การไล่ระดับค่า pH ตรึงแผ่นเจล equilibrated นาน 15 นาที
ในการแก้ปัญหาประกอบด้วย 50 mmol / L Tris-HCl ที่พีเอช 8.8, 6 mol ยูเรีย / L, กลีเซอรีน 30%,
2% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) (USB คอร์ปอเรชั่น) และ 20 mmol / L DTT นี้
กระบวนการตามด้วยขั้นตอนการบ่มด้วยบัฟเฟอร์เหมือนกันมี
20 mmol / L iodoacetamide (Sigma-Aldrich) อีก 15 นาที seconddimension
แยกถูกดำเนินการในพีเอช 1 มมหนา 8.8 12.5% ​​polyacrylamide
เจลโดยวิธี SDS-PAGE รายละเอียดการทำงานเป็นกระแสคงที่ที่ 30 มิลลิแอมป์เป็นเวลา 30 นาทีตามมา
โดยปัจจุบัน 60 mA สำหรับส่วนที่เหลือของการวิเคราะห์จนกว่า Bromophenol
เส้นสีฟ้ามาถึงที่ด้านล่างของเจล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ส่วนแผ่น procedureswere ดำเนินการตามการศึกษาของเรามีการปรับเปลี่ยนหลาย
( เจียง et al . , 2008 ; Wang et al . , 2012 ) เนื้อเยื่อตับจำนวน
ประมวลผลใน sextuplicate , และทั้งหมดของ 24 แผ่นเจลมาใช้ สำหรับตัวอย่างมิติ
แรก 150 - จำนวนμกรัมโปรตีนผสมกับ 350 μ l
ศึกษาประกอบด้วยบัฟเฟอร์ 9.5 mol / L + 2% 0.28 % ส่วนพวก1 เปอร์เซ็นต์ pH buffer pH ตรึงลาด
3 – 10 ( ไบโอ ราด ) และโบรโมฟีนอลร้อยละ 0.002 สีฟ้า ( ซิกม่า Aldrich ) ตัวอย่าง
แล้วใช้เป็น ettan ipgphor3 Isoelectric สำ
ระบบอิเล็กโตรฟอเรซีส ( GE Healthcare , USA ) ตัวอย่างที่ได้ทำการ รีไฮเดรทม 10 ชั่วโมงก่อน Isoelectric สำ
โดยใช้โปรแกรมต่อไปนี้ : ( 1 ) เพิ่มเชิงเส้นได้ถึง 500 V 1 h ;
( b ) อยู่ที่ 500 V 2 h ;( ค ) การเพิ่มเชิงเส้นได้ถึง 1000 V 4 H ; ( d ) การเพิ่มเส้นถึง 10000 V
3 h ; และ ( e ) สุดท้ายไว้ที่ 10 , 000 V ถึงทั้งหมดของ
9 v ×ชั่วโมงเน้นตรึง Ph เดียนเจลแผ่น equilibrated 15 นาที
ในโซลูชั่นที่ประกอบด้วย 50 มิลลิโมล / ลิตรอย่างไรก็ตามพีเอช 8.8 และ HCL , 6 โมล / ลิตรยูเรีย 30% กลีเซอรอล
2 % โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) ( USB Corporation ) และ 20 mmol / L ส่วน . นี้
กระบวนการตามขั้นตอนการบ่มด้วยบัฟเฟอร์ที่เหมือนกันที่มี
20 มิลลิโมล / ลิตร iodoacetamide ( ซิกม่า Aldrich ) อีก 15 นาที seconddimension
แยกเป็นการ 1-mm-thick พีเอช 8.8 12.5 %
เจลอะคริลาไมด์ถูก . เรียกข้อมูลของปัจจุบันคงที่ 30 มา 30 นาที ตาม
โดย 60 มาปัจจุบันสำหรับส่วนที่เหลือของการวิเคราะห์
จนกว่าโบรโมฟีนเส้นสีฟ้ามาถึงด้านล่างของเจล