The study of DNA damage holds a wid

The study of DNA damage holds a wide interest within both basic and
applied fields of research. Elucidating the mechanisms involved in the generation
of DNA damage, and the consequences of this damage, will have an enormous
impact on multiple fields of scientific research and will ultimately lead
to a better understanding of human disease. One of the most widely used methods
for detecting DNA damage in situ is TdT-mediated dUTP-biotin nick end
labeling (TUNEL) staining (1). TUNEL staining was initially described as a
method for staining cells that have undergone programmed cell death, or
apoptosis, and exhibit the biochemical hallmark of apoptosis—internucleosomal
DNA fragmentation (2–6). TUNEL staining relies on the ability of the
enzyme terminal deoxynucleotidyl transferase to incorporate labeled dUTP into
free 3'-hydroxyl termini generated by the fragmentation of genomic DNA into
low molecular weight double-stranded DNA and high molecular weight single
stranded DNA (1). While TUNEL staining has nearly universally been adopted
as the method of choice for detecting apoptosis in situ, it should be recognized
that TUNEL staining is not limited to the detection of apoptotic cells. TUNEL
staining may also be used to detect DNA damage associated with non-apoptotic
events such as necrotic cell death induced by exposure to toxic compounds and
other insults (7), and TUNEL staining has also been reported to stain cells
undergoing active DNA repair (8). Therefore TUNEL staining may be considered
generally as a method for the detection of DNA damage (DNA fragmentation),
and under the appropriate circumstances, more specifically as a method
for identifying apoptotic cells

The goal of this chapter is to provide the reader with step-by-step protocols
for in situ TUNEL staining of nuclear DNA fragmentation in both cultured
cells and tissue sections. These basic TUNEL protocols have been used on a
wide variety of cell types and tissues with success. Methods for both colorimetric
and fluorescent staining of cultured cells and tissues is presented thereby
allowing investigators to utilize the TUNEL staining procedure with a minimal
investment in laboratory reagents and equipment. In addition, methods to
modify and optimize the basic protocols, as well as troubleshooting and control
conditions, are provided in the Notes and Troubleshooting sections.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การศึกษาความเสียหายของดีเอ็นเอเก็บดอกเบี้ยทั้งภายในทั้งสองขั้นพื้นฐาน และเขตข้อมูลที่ใช้วิจัย Elucidating เกี่ยวข้องกับการสร้างกลไกของดีเอ็นเอ เสียหาย และผลกระทบของความเสียหายนี้ จะมีมหาศาลส่งผลกระทบต่อหลายเขตข้อมูลของการวิจัยทางวิทยาศาสตร์ และในที่สุดจะนำเพื่อความเข้าใจของมนุษย์โรค หนึ่งในวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการตรวจสอบดีเอ็นเอ ใน situ เสียหายที่สุดนิค TdT mediated dUTP-ไบโอตินติดฉลาก (TUNEL) ย้อมสี (1) ย้อมสี TUNEL ถูกอธิบายไว้ตอนแรกเป็นการวิธีการย้อมสีเซลล์ที่มีระดับโปรแกรมเซลล์ตาย หรือapoptosis จัดณ apoptosis ชีวเคมี — internucleosomalกระจายตัวดีเอ็นเอ (2-6) ย้อมสี TUNEL อาศัยความสามารถของการเอนไซม์ transferase deoxynucleotidyl เทอร์มินัลจะรวม dUTP ป้ายเป็นสร้างขึ้น โดยการกระจายตัวของของ genomic DNA เป็นของเทอร์มินิฟรี 3'-ไฮดรอกซิลดีเอ็นเอขนคู่น้ำหนักโมเลกุลต่ำและน้ำหนักโมเลกุลสูงเดี่ยวควั่น DNA (1) ขณะ TUNEL ย้อมสีได้แบบเกือบถูกนำเป็นวิธีการที่เลือกสำหรับการตรวจสอบใน situ apoptosis เรื่องควรรู้ย้อมสี TUNEL ที่ไม่จำกัดเฉพาะการตรวจพบเซลล์ apoptotic TUNELย้อมสียังอาจใช้การตรวจดีเอ็นเอความเสียหายที่เกี่ยวข้องกับไม่ใช่ของ apoptoticกิจกรรม necrotic เซลล์ตายเกิดจากการสัมผัสกับสารพิษ และสามหาว (7), และอื่น ๆ TUNEL ย้อมสียังได้รายงานการติดเซลล์ระหว่างการซ่อมแซมดีเอ็นเอที่ใช้งานอยู่ (8) ดังนั้น การย้อมสี TUNEL อาจพิจารณาโดยทั่วไปเป็นวิธีการตรวจสอบความเสียหายของดีเอ็นเอ (DNA กระจายตัว),และภาย ใต้ สถานการณ์ที่เหมาะสม เป็นวิธีอื่น ๆ โดยเฉพาะสำหรับการระบุเซลล์ apoptoticเป้าหมายของบทนี้คือเพื่อ ให้ผู้อ่าน มีโปรโตคอลทีสำหรับใน situ TUNEL ย้อมสีนิวเคลียร์ดีเอ็นเอเรียงทั้งอ่างเซลล์และเนื้อเยื่อส่วน โพรโทคอ TUNEL พื้นฐานเหล่านี้ได้ถูกใช้ในการหลากหลายของชนิดของเซลล์และเนื้อเยื่อที่ดี วิธีทั้งเทียบเคียงและย้อมสีฟลูออเรสอ่างเซลล์และเนื้อเยื่อเป็นการนำเสนอผลให้นักสืบใช้กระบวน staining TUNEL กับที่น้อยที่สุดการลงทุนใน reagents ห้องปฏิบัติการและอุปกรณ์ นอกจากนี้ วิธีการปรับเปลี่ยน และปรับโพรโทคอพื้นฐาน ตลอดจนแก้ไขปัญหา และควบคุมเงื่อนไข มีในบันทึกย่อ และส่วนการแก้ไขปัญหา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การศึกษาความเสียหายของดีเอ็นเอถือที่น่าสนใจมากมายภายในทั้งขั้นพื้นฐานและสาขาที่ใช้การวิจัย แจ่มชัดกลไกการมีส่วนร่วมในการสร้างความเสียหายของดีเอ็นเอและผลกระทบของความเสียหายนี้จะมีอย่างมากส่งผลกระทบต่อหลายเขตข้อมูลของการวิจัยทางวิทยาศาสตร์และในที่สุดจะนำไปสู่ความเข้าใจที่ดีขึ้นของโรคของมนุษย์ หนึ่งในวิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการตรวจสอบความเสียหายของดีเอ็นเอในแหล่งกำเนิดเป็น TDT พึ่ง dUTP-ท้ายไบโอตินนิคการติดฉลาก(TUNEL) การย้อมสี (1) การย้อมสี TUNEL ได้อธิบายไว้ในขั้นต้นเป็นวิธีการย้อมสีเซลล์ที่ได้รับการตั้งโปรแกรมการตายของเซลล์หรือการตายของเซลล์และจัดแสดงสัญลักษณ์ทางชีวเคมีของการตาย-internucleosomal การกระจายตัวของดีเอ็นเอ (2-6) การย้อมสี TUNEL ต้องอาศัยความสามารถของขั้วเอนไซม์ deoxynucleotidyl transferase ที่จะรวม dUTP ที่มีข้อความเข้ามาในฟรีปลายทาง3- ไฮดรอกที่เกิดจากการกระจายตัวของดีเอ็นเอเข้าไปในน้ำหนักโมเลกุลต่ำดีเอ็นเอเกลียวคู่และน้ำหนักโมเลกุลสูงเดียวดีเอ็นเอควั่น(1) ในขณะที่การย้อมสี TUNEL เกือบได้รับในระดับสากลที่นำมาใช้เป็นวิธีการของทางเลือกสำหรับการตรวจสอบการตายของเซลล์ในแหล่งกำเนิดก็ควรจะได้รับการยอมรับว่าการย้อมสีTUNEL ไม่ จำกัด การตรวจสอบของเซลล์ apoptotic TUNEL ย้อมสีก็อาจจะนำมาใช้ในการตรวจสอบความเสียหายของดีเอ็นเอที่เกี่ยวข้องกับการที่ไม่ apoptotic เหตุการณ์เช่นการตายของเซลล์ตายที่เกิดจากการสัมผัสกับสารพิษและด่าอื่น ๆ (7) และการย้อมสี TUNEL ยังได้รับการรายงานไปยังคราบเซลล์ระหว่างการซ่อมแซมดีเอ็นเอที่ใช้งาน(8 ) ดังนั้นการย้อมสี TUNEL อาจได้รับการพิจารณาโดยทั่วไปว่าเป็นวิธีการสำหรับการตรวจสอบความเสียหายของดีเอ็นเอ(ดีเอ็นเอ) และภายใต้สถานการณ์ที่เหมาะสมมากขึ้นโดยเฉพาะเป็นวิธีการสำหรับการระบุเซลล์ apoptotic เป้าหมายของบทนี้คือการให้ผู้อ่านที่มีขั้นตอนโดย โปรโตคอล -step สำหรับในแหล่งกำเนิดการย้อมสี TUNEL ของการกระจายนิวเคลียร์ดีเอ็นเอทั้งในการเพาะเลี้ยงเซลล์และเนื้อเยื่อส่วน เหล่านี้โปรโตคอล TUNEL พื้นฐานได้ถูกนำมาใช้ในหลากหลายประเภทของเซลล์และเนื้อเยื่อที่มีความสำเร็จ วิธีการทั้งสองสีย้อมสีและการเรืองแสงของเซลล์เพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อและจะนำเสนอจึงช่วยให้นักวิจัยที่จะใช้ขั้นตอนการย้อมสีTUNEL ที่มีน้อยที่สุดการลงทุนในสารเคมีในห้องปฏิบัติการและอุปกรณ์ นอกจากนี้ยังมีวิธีการที่จะปรับเปลี่ยนและเพิ่มประสิทธิภาพของโปรโตคอลพื้นฐานเช่นเดียวกับการแก้ไขปัญหาและการควบคุมเงื่อนไขไว้ในหมายเหตุและส่วนการแก้ไขปัญหา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การศึกษาความเสียหายของดีเอ็นเอมีความสนใจกว้างภายในทั้งพื้นฐานและประยุกต์
สาขาการวิจัย การศึกษากลไกที่เกี่ยวข้องในรุ่น
ของความเสียหายของดีเอ็นเอ และผลของความเสียหายนี้ จะมีผลกระทบใหญ่หลวง
บนเขตข้อมูลหลายเขตของการวิจัยทางวิทยาศาสตร์และในที่สุดจะนำไปสู่การเกิดโรค
ความเข้าใจที่ดีขึ้นของมนุษย์ ที่ใช้กันอย่างกว้างขวางมากที่สุดวิธีการ
สำหรับการตรวจสอบความเสียหายของดีเอ็นเอใน situ คือ TDT ) โดย biotin นิคจบ
( อุโมงค์ ) การติดฉลาก ( 1 ) อุโมงค์ staining โดยอธิบายเป็นวิธีการย้อมเซลล์
ที่ได้รับโปรแกรมการตายของเซลล์หรือ
( และแสดงสมบัติทางชีวเคมีของการตาย internucleosomal
DNA fragmentation ( 2 – 6 ) อุโมงค์การอาศัยความสามารถของ
เอนไซม์ deoxynucleotidyl เทอร์มินัลของข้อความโดยรวมใน
ฟรี 3 ' - ไฮดรอกแทร์มินี่สร้างขึ้นโดยการกระจายตัวของดีเอ็นเอใน
น้ำหนักโมเลกุลต่ำและสูงคู่เกลียวดีเอ็นเอเกลียวดีเอ็นเอโมเลกุลเดียว
( 1 ) ขณะที่อุโมงค์ย้อมสีได้เกือบทุกแห่งถูกประกาศใช้
เป็นวิธีการของทางเลือกสำหรับการตรวจจับการเกิดในประเทศไทย ก็ควรรู้จัก
ที่อุโมงค์ staining คือไม่ จำกัด การตรวจหาเนื้อเยื่อ . อุโมงค์
. นอกจากนี้ยังอาจถูกใช้เพื่อตรวจหา DNA ความเสียหายที่เกี่ยวข้องกับไม่ใช่กลุ่มที่มี
เหตุการณ์เช่นที่เซลล์ตายที่เกิดจากการสัมผัสกับสารพิษและ
ดูหมิ่น อื่นๆ ( 7 ) และยังได้รับการรายงานไปยังอุโมงค์เปื้อนคราบเซลล์
ดำเนินการซ่อมแซมดีเอ็นเอที่ใช้งาน ( 8 ) ดังนั้นอาจจะถือว่า
อุโมงค์ .โดยทั่วไปเป็นวิธีการตรวจหาความเสียหายของดีเอ็นเอ ( DNA fragmentation )
และภายใต้สถานการณ์ที่เหมาะสมมากขึ้นโดยเฉพาะเป็นวิธีการสำหรับการระบุเนื้อเยื่อ

เป้าหมายของบทนี้ คือ เพื่อให้ผู้อ่านที่มีขั้นตอนโดยขั้นตอนสำหรับโปรโตคอล
ใน situ อุโมงค์การย้อมสีของนิวเคลียสแตกกระจายทั้งในเซลล์ที่เพาะเลี้ยง
ส่วนเนื้อเยื่ออุโมงค์โปรโตคอลพื้นฐานเหล่านี้ได้รับการใช้ใน
หลากหลายชนิดของเซลล์และเนื้อเยื่อกับความสำเร็จ วิธีการทั้งสองและ 7.4
staining เพาะเลี้ยงเซลล์และเนื้อเยื่อเรืองแสงแสดงงบ
ให้พนักงานสอบสวนจะใช้อุโมงค์ 4 ขั้นตอนด้วยการลงทุนที่น้อยที่สุด
ในสารเคมีห้องปฏิบัติการและอุปกรณ์ นอกจากนี้ วิธีการแก้ไขและเพิ่มประสิทธิภาพของโปรโตคอล
พื้นฐานรวมทั้งการแก้ไขปัญหาและควบคุมเงื่อนไข
, มีไว้ในบันทึก และในส่วนการแก้ไขปัญหา