2.3. Quantitative analysis of gene

2.3. Quantitative analysis of gene expression levels in the liver of grass
carp
Total RNA was isolated from 30–50 mg liver tissue of grass carp
using SV Total RNA Isolation System (Promega, USA) by following the
manufacturer's protocol. The extracted RNA was resuspended in 50 μl
RNase-free water and quantified using Eppendorf Biophotometer
(Germany). One microgram of total RNA was used for reverse transcription
with ReverTra Ace qPCR RT Kit (ToYoBo, Japan) according to the
manufacturer's recommendations. Based on the results obtained,
beta-actin level was stable that differences of the mean Cq between
the two groups were 0.3366 at 30 days and 0.215 at 60 days, and therefore
it was used as the internal control gene for the quantitative RT-PCR
assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3 การวิเคราะห์เชิงปริมาณระดับยีนนิพจน์ในตับหญ้าปลาคาร์ฟอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกแยกต่างหากจากเนื้อเยื่อตับ 30 – 50 มิลลิกรัมของเฉาใช้ญารวมอาร์เอ็นเอแยกระบบ (Promega สหรัฐอเมริกา) โดยโพรโทคอลของผู้ผลิต อาร์เอ็นเอที่แยกได้ resuspended ใน 50 μlฟรี RNase น้ำ และ quantified ใช้ Eppendorf Biophotometer(เยอรมนี) ใช้สำหรับย้อน transcription microgram หนึ่งของอาร์เอ็นเอทั้งหมดด้วยชุด ReverTra Ace qPCR RT (ToYoBo ญี่ปุ่น) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ตามผลได้รับแอกตินเบต้าระดับมีเสถียรภาพที่ความแตกต่างของซีเฉลี่ยระหว่างกลุ่มสองได้ 0.3366 30 วันและ 0.215 ที่ 60 วัน ดังนั้นมันถูกใช้เป็นยีนควบคุมภายในสำหรับ RT-PCR เชิงปริมาณวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 การวิเคราะห์เชิงปริมาณของระดับการแสดงออกของยีนในตับหญ้า
ปลาคาร์พ
รวมอาร์เอ็นเอที่แยก 30-50 มิลลิกรัมตับเนื้อเยื่อของปลาคาร์พหญ้า
โดยใช้อาร์เอ็นเอเอสรวมระบบแยก (Promega สหรัฐอเมริกา) โดยทำตาม
โปรโตคอลของผู้ผลิต อาร์เอ็นเอที่สกัดได้ resuspended ใน 50 ไมโครลิตร
RNase ฟรีน้ำและปริมาณการใช้ Eppendorf Biophotometer
(เยอรมนี) หนึ่งไมโครกรัมของอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกนำมาใช้สำหรับการถอดความกลับ
มี ReverTra Ace qPCR RT Kit (Toyobo ญี่ปุ่น) ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต ขึ้นอยู่กับผลที่ได้รับ
ในระดับโปรตีนเบต้ามีเสถียรภาพที่ความแตกต่างของค่าเฉลี่ย Cq ระหว่าง
สองกลุ่ม 0.3366 วันที่ 30 วันและ 0.215 ที่ 60 วันและดังนั้น
มันถูกใช้เป็นยีนควบคุมภายในสำหรับปริมาณ RT-PCR
ทดสอบ .

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การวิเคราะห์เชิงปริมาณของระดับการแสดงออกของยีนในตับของปลาคาร์พหญ้า

ทั้งหมดนี้ถูกแยกจาก 30 – 50 มิลลิกรัมต่อลิตรเนื้อเยื่อตับของ
ปลาคาร์พหญ้าใช้ SV รวม RNA แยกระบบ ( promega , USA ) ตามพิธีสาร
ของผู้ผลิต สกัด RNA คือ resuspended 50 μ L
เลสฟรีน้ำและปริมาณการใช้เพนดอร์ฟ biophotometer
( เยอรมนี )1 ไมโครกรัมของอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกใช้สำหรับย้อนกลับถอดความ
กับ revertra เอซ qpcr RT ชุด ( toyobo , ญี่ปุ่น ) ตามข้อเสนอแนะ
ของผู้ผลิต จากผลที่ได้มีเสถียรภาพที่ระดับเบต้าแอคติน
ความแตกต่างของค่าเฉลี่ยระหว่างสองกลุ่มด้วยกัน
0.3366 ที่ 30 วัน และ 0.215 ที่ 60 วัน ดังนั้น
มันถูกใช้เป็นยีนควบคุมภายในสำหรับวิธี RT-PCR
เชิงปริมาณ