- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Journal of Ethnopharmacology 81 (20
Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22
Antitumour and anticarcinogenic activity of Phyllanthus amarus
extract
N.V. Rajeshkumar a, K.L. Joy a, Girija Kuttan a, R.S. Ramsewak b,
Muraleedharan G. Nair b, Ramadasan Kuttan a,*
a Amala Cancer Research Centre, Thrissur, Kerala, 680 -553, India
b Bioactie Natural Products Laboratory, Department of Horticulture and National Food Safety and Toxicology Center,
Michigan State Uniersity, East Lansing, MI 48824, USA
Accepted 10 December 2001
Abstract
Aqueous extract of Phyllanthus amarus (P. amarus) treatment exhibited potent anticarcinogenic activity against 20-methylcholanthrene
(20-MC) induced sarcoma development and increased the survival of tumour harboring mice. The extract
administration (p.o) was also found to prolong the life span of Dalton’s Lymphoma Ascites (DLA) and Ehrlich Ascites
Carcinoma (EAC) bearing mice and reduced the volume of transplanted solid tumours. The extract inhibited aniline hydroxylase,
a P-450 enzyme. The concentration required for 50% inhibition (IC50) was found to be 540 g/ml. The extract was found to inhibit
DNA topoisomerase II of Saccharomyces cereisiae mutant cell cultures and inhibited cell cycle regulatory enzyme cdc25 tyrosine
phosphatase (IC50–25 g/ml). Antitumour and anticancer activity of P. amarus may be related with the inhibition of metabolic
activation of carcinogen as well as the inhibition of cell cycle regulators and DNA repair. © 2002 Published by Elsevier Science
Ireland Ltd.
Keywords: Phyllanthus amarus; Topoisomerase II; Chemoprevention; Cell cycle regulators; Antitumour drugs; Cdc25 tyrosine phosphatase
www.elsevier.com/locate/jethpharm
1. Introduction
A variety of bioactive compounds and their derivatives
has been shown to inhibit carcinogenesis in a
number of experimental systems involving initiation,
promotion and progression (Ho et al., 1994; Huang et
al., 1994). Plants contain abundant quantities of these
substances and have consistently been shown to be
associated with a lower risk of cancers at almost every
site (Steinmetz and Potter, 1991). Efforts, therefore, are
being made to identify naturally occurring anticarcinogens
which would prevent, slow and/or reverse the
cancer induction and its subsequent development
(Chuang et al., 2000).
Phyllanthus amarus Schum and Thonn (syn. Phyllanthus
niruri ) is a small tropical herb widely used as an
anti-viral agent (Thyagarajan et al., 1988; De et al.,
1990; Jayram et al., 1997). P. amarus extract has been
shown to inhibit DNA polymerase of hepatitis B virus
and related hepatitis viruses (Venkateswaran et al.,
1987; Blumberg et al., 1990) and down regulate hepatitis
B virus mRNA transcription and translation (Lee et
al., 1996; Ott et al., 1997). The extract reversibly inhibited
cellular proliferation and suppressed HbsAg production
in cultured hepatoma cell line HepA2 (Yeh et
al., 1993) and inhibited the release of HbsAg in Alexander
cell line, a human hepatocellular carcinoma derived
cell line (Jayram and Thyagarajan, 1996). Recently, P.
amarus extract administration has been shown to inhibit
the liver tumour development induced by N-nitrosodiethylamine
in rats and increased the life span of
hepatocellular carcinoma harboring animals (Joy and
Kuttan, 1998; Rajeshkumar and Kuttan, 2000). Lignans
such as phyllanthin, hypophyllanthin, flavanoids
quercetin, astragalin, ellagitannins and hydrolysable
tannins are shown to be present in this plant. Some of
these compounds have been shown to have significant
activity against experimental carcinogenesis. The
present investigation focuses attention on the antitumour
and anticarcinogenic activity of P. amarus extract
in mice. In addition, the effect of P. amarus extract on
* Corresponding author. Fax: +91-487-211020.
E-mail address: director@amala.com (R. Kuttan).
0378-8741/02/$ - see front matter © 2002 Published by Elsevier Science Ireland Ltd.
PII: S0378-8741(01)00419-6
18 N.V. Rajeshkumar et al. / Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22
P-450 enzyme, DNA topoisomerases and cell cycle
regulators were also investigated.
2. Materials and methods
Male Swiss albino mice (10-weeks-old, 20–25 g) were
purchased from the Veterinary College, Mannuthy,
Kerala, India, and kept in our animal faculty at least 1
week before use. The animals were fed with a standard
pellet diet and drinking water ad libitum. Dalton’s
Lymphoma Ascites (DLA) and Ehrlich Ascites Carcinoma
(EAC) tumour cell lines were obtained from
Cancer Institute, Chennai, India and were propagated
as transplantable ascites tumours in female Swiss albino
mice.
20-MC was purchased from Sigma Chemical Co. St.
Louis, USA. Reduced nicotinamide adenine dinucleotide
phosphate (reduced, NADPH) was purchased
from Sisco Research Laboratories, Mumbai, India. All
other chemicals used were of analytical reagent grade.
Concentrated aqueous extract of aerial parts of authenticated
P. amarus was supplied by Dr S.S. Gandhi,
Lyka Research Laboratories, Mumbai, India. The extract
was suspended in distilled water and used as drug.
2.1. Determination of the effect P. amarus on ascites
tumours
Tumour cells (DLA/EAC) aspirated from the peritoneal
cavity of mice were washed with saline and
1×106 tumour cells were given intraperitoneally to
four group of animals (seven mice per group). Animals
in the group I were kept without P. amarus treatment.
Animals in group II-IV received P. amarus extract at a
concentration of 60, 300, 1500 mg/kg body weight
(p.o), respectively, 24 h after tumour inoculation and
continued daily for 10 days. Animals were observed for
the development of ascites tumour and deaths due to
tumour burden were recorded. The increase in life span
(percent ILS) of treated group was calculated using the
formula, percent ILS=(T−C)/C×100, where ‘T’ and
‘C’ are mean survival of treated and control mice,
respectively (Joy et al., 2000).
2.2. Determination of the effect P. amarus on solid
tumours
One million DLA/EAC cells were injected in to the
right hind limb of male Swiss albino mice (Group I–IV,
seven mice/group). Animals in group II–IV received P.
amarus extract at a concentration of 60, 300, 1500
mg/kg body weight (p.o), respectively, 24 h after tumour
inoculation and continued for 10 days. Animals
in group I were kept as control, which received the
vehicle. Diameter of the tumour was measured on every
fifth day using vernier calipers and volume was calculated
using the formula, V=4/3r1 2 ×r2, where V is
volume, r1 and r2 represent the radii of the tumour at
two different planes.
2.3. Determination of the effect of P. amarus extract
on sarcoma induced by 20 -MC
Male BALB/c mice (6–8-weeks-old, 20–25 g) were
used for the study. Hair was shaved from the dorsal
side of mice. All animals were administered with a
single dose of 20-MC (200 g/0.1ml DMSO/mouse)
subcutaneously on the dorsal side. This dosage has
been shown to produce sarcoma development in mice
by 8–12 weeks (Joy et al., 2000). Thereafter, animals
were randomly divided in to three groups (20 mice per
group). Animals in group I were kept without any drug
treatment. Animals in groups II and III were administered
orally with P. amarus 150 and 750 mg/kg body
weight, respectively, thrice weekly for 8 weeks. Sarcoma
developments as well as survival of the animals were
noticed up to 180 days.
2.4. Aniline hydroxylase inhibitory assay
Aniline hydroxylase assay was performed by the
method described by Mazel (Mazel, 1971). The enzyme
was induced in rats by the oral administration of
phenobarbital (80 mg/kg) for 5 days. The animals were
sacrificed after an overnight fasting by ether anesthesia
and the liver was excised. A 10% homogenate prepared
was used for the assay. Various concentrations of the
extract were added to the reaction mixture and incubated
for 2 h at 37 °C. P-aminophenol formed during
the enzyme action reacts with phenol in alkaline
medium to form a blue coloured product, which was
measured at 630 nm. The percentage inhibition of
aniline hydroxylase was calculated by comparing the
absorbency of control and that of drug treated samples.
2.5. Topoisomerase I and II inhibitory assays
Saccharomyces cerisiae mutant cell cultures JN 394,
JN 394t-1 and JN 394t-2-5 were used for topoisomerase
assays. The organisms were supplied by Dr. Jhon Nistiss
of St. Jude Children’s Research Hospital, Memphis,
Tennessee, USA and were cultured in petri dishes containing
YPDA medium (20 ml). The cells from a fully
grown plate of each organism were suspended in saline
solution (10 ml) and then diluted to obtain 5×106
CFU per ml. About 50 l of this suspension was then
used to inoculate petri dishes containing YPDA media
and allowed to air dry in the laminar flow hood for 20
min. The aqueous extract of P. amarus was dissolved in
DMSO and added to the inoculated plates (20 l) to
give a final concentration of 250 g/ml. These plates
N.V. Rajeshkumar et al. / Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22 19
were inoculated at 27 °C for 72–96 h. At the end of
incubation period the zones of inhibition were recorded
for each test organism. Controls were prepared by
adding DMSO (20 l) to inoculated plate (Chang et al.,
1995; Roth et al., 1998).
2.6. Determination of cdc25 tyrosine phosphatase and
cdc2 kinase inhibitory assays
About 20 l of GST-cdc25A protein was mixed with
20 l 100 mM dithiothreitol in Tris buffer A. Different
concentrations of P. amarus extract were dissolved in
Tris buffer A (140 l), in 96-well microtitration plates.
The plates were preincubated at 37 °C for 15 min in a
Denley Wellwarm 1 microplate incubator. The assay
was initiated by addition of 20 l of 500 mM p-nitrophenylphosphate
phosphatase (p-NPP). After 60 min
incubation at 37 °C absorbance at 405 nm was measured
in a BioRad microplate reader. Blank values (no
GST-cdc25A protein but 10 min incubation with substrate)
were automatically substracted (Baratte et al.,
1992). Cdc2 kinase inhibitory assay was conducted by
immunoblotting techni
Antitumour and anticarcinogenic activity of Phyllanthus amarus
extract
N.V. Rajeshkumar a, K.L. Joy a, Girija Kuttan a, R.S. Ramsewak b,
Muraleedharan G. Nair b, Ramadasan Kuttan a,*
a Amala Cancer Research Centre, Thrissur, Kerala, 680 -553, India
b Bioactie Natural Products Laboratory, Department of Horticulture and National Food Safety and Toxicology Center,
Michigan State Uniersity, East Lansing, MI 48824, USA
Accepted 10 December 2001
Abstract
Aqueous extract of Phyllanthus amarus (P. amarus) treatment exhibited potent anticarcinogenic activity against 20-methylcholanthrene
(20-MC) induced sarcoma development and increased the survival of tumour harboring mice. The extract
administration (p.o) was also found to prolong the life span of Dalton’s Lymphoma Ascites (DLA) and Ehrlich Ascites
Carcinoma (EAC) bearing mice and reduced the volume of transplanted solid tumours. The extract inhibited aniline hydroxylase,
a P-450 enzyme. The concentration required for 50% inhibition (IC50) was found to be 540 g/ml. The extract was found to inhibit
DNA topoisomerase II of Saccharomyces cereisiae mutant cell cultures and inhibited cell cycle regulatory enzyme cdc25 tyrosine
phosphatase (IC50–25 g/ml). Antitumour and anticancer activity of P. amarus may be related with the inhibition of metabolic
activation of carcinogen as well as the inhibition of cell cycle regulators and DNA repair. © 2002 Published by Elsevier Science
Ireland Ltd.
Keywords: Phyllanthus amarus; Topoisomerase II; Chemoprevention; Cell cycle regulators; Antitumour drugs; Cdc25 tyrosine phosphatase
www.elsevier.com/locate/jethpharm
1. Introduction
A variety of bioactive compounds and their derivatives
has been shown to inhibit carcinogenesis in a
number of experimental systems involving initiation,
promotion and progression (Ho et al., 1994; Huang et
al., 1994). Plants contain abundant quantities of these
substances and have consistently been shown to be
associated with a lower risk of cancers at almost every
site (Steinmetz and Potter, 1991). Efforts, therefore, are
being made to identify naturally occurring anticarcinogens
which would prevent, slow and/or reverse the
cancer induction and its subsequent development
(Chuang et al., 2000).
Phyllanthus amarus Schum and Thonn (syn. Phyllanthus
niruri ) is a small tropical herb widely used as an
anti-viral agent (Thyagarajan et al., 1988; De et al.,
1990; Jayram et al., 1997). P. amarus extract has been
shown to inhibit DNA polymerase of hepatitis B virus
and related hepatitis viruses (Venkateswaran et al.,
1987; Blumberg et al., 1990) and down regulate hepatitis
B virus mRNA transcription and translation (Lee et
al., 1996; Ott et al., 1997). The extract reversibly inhibited
cellular proliferation and suppressed HbsAg production
in cultured hepatoma cell line HepA2 (Yeh et
al., 1993) and inhibited the release of HbsAg in Alexander
cell line, a human hepatocellular carcinoma derived
cell line (Jayram and Thyagarajan, 1996). Recently, P.
amarus extract administration has been shown to inhibit
the liver tumour development induced by N-nitrosodiethylamine
in rats and increased the life span of
hepatocellular carcinoma harboring animals (Joy and
Kuttan, 1998; Rajeshkumar and Kuttan, 2000). Lignans
such as phyllanthin, hypophyllanthin, flavanoids
quercetin, astragalin, ellagitannins and hydrolysable
tannins are shown to be present in this plant. Some of
these compounds have been shown to have significant
activity against experimental carcinogenesis. The
present investigation focuses attention on the antitumour
and anticarcinogenic activity of P. amarus extract
in mice. In addition, the effect of P. amarus extract on
* Corresponding author. Fax: +91-487-211020.
E-mail address: director@amala.com (R. Kuttan).
0378-8741/02/$ - see front matter © 2002 Published by Elsevier Science Ireland Ltd.
PII: S0378-8741(01)00419-6
18 N.V. Rajeshkumar et al. / Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22
P-450 enzyme, DNA topoisomerases and cell cycle
regulators were also investigated.
2. Materials and methods
Male Swiss albino mice (10-weeks-old, 20–25 g) were
purchased from the Veterinary College, Mannuthy,
Kerala, India, and kept in our animal faculty at least 1
week before use. The animals were fed with a standard
pellet diet and drinking water ad libitum. Dalton’s
Lymphoma Ascites (DLA) and Ehrlich Ascites Carcinoma
(EAC) tumour cell lines were obtained from
Cancer Institute, Chennai, India and were propagated
as transplantable ascites tumours in female Swiss albino
mice.
20-MC was purchased from Sigma Chemical Co. St.
Louis, USA. Reduced nicotinamide adenine dinucleotide
phosphate (reduced, NADPH) was purchased
from Sisco Research Laboratories, Mumbai, India. All
other chemicals used were of analytical reagent grade.
Concentrated aqueous extract of aerial parts of authenticated
P. amarus was supplied by Dr S.S. Gandhi,
Lyka Research Laboratories, Mumbai, India. The extract
was suspended in distilled water and used as drug.
2.1. Determination of the effect P. amarus on ascites
tumours
Tumour cells (DLA/EAC) aspirated from the peritoneal
cavity of mice were washed with saline and
1×106 tumour cells were given intraperitoneally to
four group of animals (seven mice per group). Animals
in the group I were kept without P. amarus treatment.
Animals in group II-IV received P. amarus extract at a
concentration of 60, 300, 1500 mg/kg body weight
(p.o), respectively, 24 h after tumour inoculation and
continued daily for 10 days. Animals were observed for
the development of ascites tumour and deaths due to
tumour burden were recorded. The increase in life span
(percent ILS) of treated group was calculated using the
formula, percent ILS=(T−C)/C×100, where ‘T’ and
‘C’ are mean survival of treated and control mice,
respectively (Joy et al., 2000).
2.2. Determination of the effect P. amarus on solid
tumours
One million DLA/EAC cells were injected in to the
right hind limb of male Swiss albino mice (Group I–IV,
seven mice/group). Animals in group II–IV received P.
amarus extract at a concentration of 60, 300, 1500
mg/kg body weight (p.o), respectively, 24 h after tumour
inoculation and continued for 10 days. Animals
in group I were kept as control, which received the
vehicle. Diameter of the tumour was measured on every
fifth day using vernier calipers and volume was calculated
using the formula, V=4/3r1 2 ×r2, where V is
volume, r1 and r2 represent the radii of the tumour at
two different planes.
2.3. Determination of the effect of P. amarus extract
on sarcoma induced by 20 -MC
Male BALB/c mice (6–8-weeks-old, 20–25 g) were
used for the study. Hair was shaved from the dorsal
side of mice. All animals were administered with a
single dose of 20-MC (200 g/0.1ml DMSO/mouse)
subcutaneously on the dorsal side. This dosage has
been shown to produce sarcoma development in mice
by 8–12 weeks (Joy et al., 2000). Thereafter, animals
were randomly divided in to three groups (20 mice per
group). Animals in group I were kept without any drug
treatment. Animals in groups II and III were administered
orally with P. amarus 150 and 750 mg/kg body
weight, respectively, thrice weekly for 8 weeks. Sarcoma
developments as well as survival of the animals were
noticed up to 180 days.
2.4. Aniline hydroxylase inhibitory assay
Aniline hydroxylase assay was performed by the
method described by Mazel (Mazel, 1971). The enzyme
was induced in rats by the oral administration of
phenobarbital (80 mg/kg) for 5 days. The animals were
sacrificed after an overnight fasting by ether anesthesia
and the liver was excised. A 10% homogenate prepared
was used for the assay. Various concentrations of the
extract were added to the reaction mixture and incubated
for 2 h at 37 °C. P-aminophenol formed during
the enzyme action reacts with phenol in alkaline
medium to form a blue coloured product, which was
measured at 630 nm. The percentage inhibition of
aniline hydroxylase was calculated by comparing the
absorbency of control and that of drug treated samples.
2.5. Topoisomerase I and II inhibitory assays
Saccharomyces cerisiae mutant cell cultures JN 394,
JN 394t-1 and JN 394t-2-5 were used for topoisomerase
assays. The organisms were supplied by Dr. Jhon Nistiss
of St. Jude Children’s Research Hospital, Memphis,
Tennessee, USA and were cultured in petri dishes containing
YPDA medium (20 ml). The cells from a fully
grown plate of each organism were suspended in saline
solution (10 ml) and then diluted to obtain 5×106
CFU per ml. About 50 l of this suspension was then
used to inoculate petri dishes containing YPDA media
and allowed to air dry in the laminar flow hood for 20
min. The aqueous extract of P. amarus was dissolved in
DMSO and added to the inoculated plates (20 l) to
give a final concentration of 250 g/ml. These plates
N.V. Rajeshkumar et al. / Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22 19
were inoculated at 27 °C for 72–96 h. At the end of
incubation period the zones of inhibition were recorded
for each test organism. Controls were prepared by
adding DMSO (20 l) to inoculated plate (Chang et al.,
1995; Roth et al., 1998).
2.6. Determination of cdc25 tyrosine phosphatase and
cdc2 kinase inhibitory assays
About 20 l of GST-cdc25A protein was mixed with
20 l 100 mM dithiothreitol in Tris buffer A. Different
concentrations of P. amarus extract were dissolved in
Tris buffer A (140 l), in 96-well microtitration plates.
The plates were preincubated at 37 °C for 15 min in a
Denley Wellwarm 1 microplate incubator. The assay
was initiated by addition of 20 l of 500 mM p-nitrophenylphosphate
phosphatase (p-NPP). After 60 min
incubation at 37 °C absorbance at 405 nm was measured
in a BioRad microplate reader. Blank values (no
GST-cdc25A protein but 10 min incubation with substrate)
were automatically substracted (Baratte et al.,
1992). Cdc2 kinase inhibitory assay was conducted by
immunoblotting techni
0/5000
สมุด Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22
Antitumour และกิจกรรม anticarcinogenic ของ Phyllanthus amarus
extract
N.V Rajeshkumar เคแอลความคีรี Kuttan a, a, b Ramsewak อาร์เอส,
Muraleedharan G. Nair b, Ramadasan Kuttan a, *
-553 680 อินเดีย Kerala ศูนย์วิจัยมะเร็งดิอมาลา ทริสเซอร์
บีอี Bioacti ห้องปฏิบัติการผลิตภัณฑ์ธรรมชาติ ภาควิชาพืชสวน และความ ปลอดภัยของอาหารแห่งชาติ และ ศูนย์พิษวิทยา,
มิชิแกนสเตทยูนิ ersity, East Lansing, MI 48824 สหรัฐอเมริกา
ยอมรับ 10 2544 ธันวาคม
นามธรรม
จัดแสดงกิจกรรม anticarcinogenic มีศักยภาพกับ 20-methylcholanthrene
(20-MC) เกิด sarcoma พัฒนาสารสกัดอควี Phyllanthus amarus (P. amarus) รักษา และเพิ่มความอยู่รอดของเนื้องอก harboring หนู การดึงข้อมูล
ยังพบจัดการ (p.o) ช่วยยืดอายุช่วงชีวิตของดาลตันคอลลาท้องมาน (DLA) และท้องมาน Ehrlich
Carcinoma (EAC) เรืองหนู และลดปริมาตรของเนื้องอกที่แข็ง transplanted การดึงข้อมูลห้าม aniline hydroxylase,
เอนไซม์ 450 P ความเข้มข้นที่ต้องใช้ในการยับยั้งการ 50% (IC50) พบเป็น 540 g/ml มีการค้นพบสารสกัดที่ยับยั้ง
DNA topoisomerase II Saccharomyces cere isiae วัฒนธรรมเซลล์กลายพันธุ์และรอบเซลล์ห้ามบังคับเอนไซม์ tyrosine cdc25
ฟอสฟาเตส (IC50–25 g/ml) Antitumour และ anticancer กิจกรรมของ P. amarus อาจเกี่ยวข้องกับการยับยั้งการเผาผลาญ
เปิดใช้งานของสารก่อมะเร็งและยับยั้งการเร็คกูเลเตอร์วงจรเซลล์และดีเอ็นเอมีการซ่อมแซมได้ © 2002 ประกาศ โดย Elsevier วิทยาศาสตร์
ไอร์แลนด์ จำกัด
คำสำคัญ: Phyllanthus amarus Topoisomerase II Chemoprevention เร็คกูเลเตอร์วงจรเซลล์ ยา antitumour ฟอสฟาเตส tyrosine Cdc25
www.elsevier.com/ ค้น หา/jethpharm
1 แนะนำ
กรรมการกสารและอนุพันธ์ของ
จะยับยั้ง carcinogenesis ในการ
จำนวนทดลองระบบที่เกี่ยวข้องกับการเริ่มต้น,
โปรโมชั่นและก้าวหน้า (โฮจิมินห์ et al., 1994 หวงร้อยเอ็ด
al., 1994) . พืชประกอบด้วยปริมาณมากเหล่านี้
สาร และมีการแสดงอย่างต่อเนื่องจะ
เกี่ยวข้องกับความเสี่ยงต่ำของโรคมะเร็งที่เกือบทุก
ไซต์ (Steinmetz และพอตเตอร์ 1991) ความพยายาม ดังนั้น มี
ทำระบุ anticarcinogens ที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ
ที่จะป้องกัน ช้า หรือกลับ
มะเร็งการเหนี่ยวนำและการพัฒนาตามมา
(ช่วง et al., 2000)
Phyllanthus amarus Schum และ Thonn (syn. Phyllanthus
niruri) เป็นสมุนไพรเขตร้อนขนาดเล็กใช้กันแพร่หลายเป็นการ
ตัวแทนต่อต้านไวรัส (Thyagarajan et al., 1988 เดอ et al.,
1990 Jayram และ al., 1997) สารสกัดจาก P. amarus มี
แสดงยับยั้งพอลิเมอเรส DNA ของไวรัสตับอักเสบ B
และไวรัสตับอักเสบ (Venkateswaran et al.,
1987 Blumberg และ al., 1990) และลงควบคุมโรค
B ไวรัส mRNA transcription และแปล (Lee et
al., 1996 Ott et al., 1997) สารสกัด reversibly ห้าม
แพร่หลายเซลและหยุดผลิต HbsAg
ในเซลล์ hepatoma อ่างเส้น HepA2 (Yeh et
al., 1993) และห้ามนำของ HbsAg ในอเล็กซานเดอร์
เซลล์รายการ เป็นมนุษย์ตับมา
เซลล์บรรทัด (Jayram และ Thyagarajan, 1996) ล่าสุด P.
amarus แยกจัดการได้รับการแสดงเพื่อยับยั้ง
การพัฒนาเนื้องอกที่ตับเกิดจาก N nitrosodiethylamine
ในหนู และเพิ่มอายุขัยของ
harboring สัตว์ตับ (จอย และ
Kuttan, 1998 Rajeshkumar และ Kuttan, 2000) Lignans
phyllanthin, hypophyllanthin, flavanoids
quercetin, astragalin, ellagitannins และ hydrolysable
tannins จะแสดงจะอยู่ในพืชนี้ บาง
สารประกอบเหล่านี้ได้ถูกแสดงให้สำคัญ
กิจกรรมกับ carcinogenesis ทดลอง ใน
สอบสวนปัจจุบันเน้นความสนใจที่ antitumour
และแยกกิจกรรม anticarcinogenic ของ P. amarus
ในหนู ผลของ P. amarus แยกบน
* Corresponding ผู้เขียน โทรสาร: 91-487-211020.
ที่อยู่อีเมล: director@amalacom (R. Kuttan).
0378-8741/02/$ - ดูหน้าเรื่อง © 2002 เผยแพร่ โดย Elsevier วิทยาศาสตร์ไอร์แลนด์
PII: (01) S0378-8741 00419-6
18 N.V. Rajeshkumar et al. / 17–22 สมุด Ethnopharmacology 81 (2002)
เอนไซม์ 450 P, topoisomerases ดีเอ็นเอ และเซลล์รอบ
ยังถูกสอบสวนเร็คกูเลเตอร์
2 วัสดุและวิธีการ
ชายสวิสถูกหนู albino (10 สัปดาห์อายุ 20-25 กรัม)
ซื้อจากวิทยาลัยสัตว Mannuthy,
เกรละ อินเดีย และเก็บไว้ในคณะของเราสัตว์น้อย 1
สัปดาห์ก่อนใช้ สัตว์ถูกเลี้ยง ด้วยมาตรฐาน
เม็ดอาหารและน้ำดื่มที่ ad libitum ของดาลตัน
Carcinoma
(EAC) Ehrlich ท้องมานและท้องมานคอลลา (DLA) รายการเซลล์เนื้องอกได้รับมาจาก
สถาบันมะเร็ง เจนไน อินเดีย และได้เผยแพร่
เป็นเนื้องอกในท้องมาน transplantable ในสวิส albino หญิง
หนู
20 MC ร้านจากซิกเซนต์บริษัทเคมี
หลุยส์ สหรัฐอเมริกา ลด nicotinamide adenine dinucleotide
ฟอสเฟต (ลด NADPH) ถูกซื้อ
จาก Sisco วิจัย มุมไบ อินเดีย ทั้งหมด
เคมีภัณฑ์อื่น ๆ ที่ใช้ได้ของรีเอเจนต์วิเคราะห์เกรด
สารสกัดเข้มข้นอควีส่วนทางอากาศของการพิสูจน์ตัวจริง
P amarus ถูกจัดทำ โดยดร.สโมสรฟุตบอลคานธี,
Lyka วิจัย มุมไบ อินเดีย การดึงข้อมูล
ถูกหยุดชั่วคราวในน้ำกลั่น และใช้เป็นยา
2.1 กำหนดผล P. amarus ท้องมาน
เนื้องอก
เซลล์เนื้องอก (DLA EAC) aspirated จากใน peritoneal
ช่องของหนูถูกล้าง ด้วยน้ำเกลือ และ
1 × 106 เซลล์เนื้องอกที่ได้รับการ intraperitoneally
กลุ่มที่ 4 สัตว์ (เจ็ดหนูต่อกลุ่ม) สัตว์
ในกลุ่มพระราชวงศ์ โดย P. amarus รักษา.
สัตว์ในกลุ่ม II-IV ได้รับสารสกัด P. amarus ที่เป็น
เข้มข้น 60, 300, 1500 มก./กก.ร่างกาย weight
(p.o) ตามลำดับ 24 ชมหลังจากเนื้องอก inoculation และ
ต่อทุก 10 วัน สัตว์ที่พบใน
การพัฒนาเนื้องอกท้องมานและเสียชีวิตเนื่อง
บันทึกภาระเนื้องอก เพิ่มขึ้นในช่วงชีวิต
(percent ILS) ของกลุ่มบำบัดถูกคำนวณโดยใช้
เปอร์เซ็นต์สูตร ILS = (T−C) / C × 100 ที่ไม่ ' และ
'C' มีค่าเฉลี่ยความอยู่รอดของรักษา และควบคุมเมาส์,
ตามลำดับ (จอยและ al., 2000) .
2.2 ความมุ่งมั่นของ amarus ผล P. บนทึบ
เนื้องอก
หนึ่งล้านเซลล์ DLA/EAC ที่ฉีดในการการ
ขวาเดนไฮนด์ขาของหนู albino ชายสวิส (กลุ่ม I–IV,
หนู 7 กลุ่ม) สัตว์ในกลุ่ม II–IV รับ P.
amarus สารสกัดที่ความเข้มข้น 60, 300, 1500
มก./กก.ร่างกายน้ำหนัก (p.o), ตามลำดับ 24 ชมหลังจากเนื้องอก
inoculation และ 10 วัน สัตว์
ในกลุ่มพระราชวงศ์เป็นตัวควบคุม ซึ่งได้รับการ
รถ เส้นผ่าศูนย์กลางของเนื้องอกจะถูกวัดในทุก
มีคำนวณวันใช้ vernier calipers และปริมาณ
ใช้สูตร V = 4/3 r1 r2 2 × V
ปริมาตร r1 และ r2 แสดงรัศมีของเนื้องอกที่
สองต่างบิน
2.3 กำหนดผลของ P. amarus แยก
บน sarcoma ที่เหนี่ยวนำ โดย 20 - แม็ค
หนู c ชาย BALB (6–8 สัปดาห์อายุ 20-25 กรัม) ถูก
ใช้สำหรับการศึกษา ผมถูก shaved จากใน dorsal
ด้านข้างของหนู สัตว์ทั้งหมดถูกจัดการด้วยการ
ยาเดี่ยวของ 20 MC (200 g / 0.1 ml DMSO/เมาส์)
subcutaneously ทางด้าน dorsal ได้ขนาดนี้
การแสดงการผลิตพัฒนา sarcoma ในหนู
สัปดาห์ 8–12 (สุขและ al., 2000) หลังจากนั้น สัตว์
ถูกสุ่มแบ่งออกเป็น 3 กลุ่ม (หนู 20 ต่อ
กลุ่ม) สัตว์ในกลุ่มพระราชวงศ์ไม่ มียาใด ๆ
รักษา สัตว์ในกลุ่ม II และ III ถูกจัดการ
เนื้อหา ด้วย P. amarus 150 และ 750 มก./กก.ร่างกาย
น้ำหนัก ตามลำดับ สามครั้งทุกสัปดาห์ 8 สัปดาห์ Sarcoma
ถูกพัฒนาเป็นความอยู่รอดของสัตว์
สังเกตเห็นถึง 180 วัน.
2.4 Aniline hydroxylase วิเคราะห์ลิปกลอสไข
Aniline hydroxylase วิเคราะห์ทำโดยการ
วิธีโดย Mazel (Mazel, 1971) เอนไซม์นี้
เกิดในหนู โดยปากของ
phenobarbital (80 มิลลิกรัม/กิโลกรัม) 5 วัน สัตว์ถูก
เสียสละหลังการถือศีลอด โดยยาอีเทอร์แอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์
และตับถูก excised Homogenate 10% การเตรียม
ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ ความเข้มข้นต่าง ๆ ของ
สารสกัดเพิ่มส่วนผสมของปฏิกิริยา และ incubated
สำหรับ h 2 ที่ 37 องศาเซลเซียส P-aminophenol เกิดขึ้นระหว่าง
การดำเนินการที่เอนไซม์ทำปฏิกิริยากับวางในด่าง
ขนาดกลางแบบตัวสีบลู ซึ่งถูก
วัดที่ 630 nm ยับยั้งเปอร์เซ็นต์ของ
aniline hydroxylase ถูกคำนวณ โดยการเปรียบเทียบการ
absorbency ควบคุมและยาที่รักษาตัวอย่าง.
2.5 Topoisomerase ฉันและทูลิปกลอสไข assays
cer Saccharomyces isiae เซลล์กลายพันธุ์วัฒนธรรมปลูก JN 394,
JN 394t-1 และ 394t JN-2-5 ใช้สำหรับ topoisomerase
assays สิ่งมีชีวิตที่ถูกจัดทำ โดยดร. Jhon Nistiss
ของโรงพยาบาล St. Jude เด็กวิจัย เมมฟิส,
เทนเนสซี สหรัฐอเมริกาและอ่างในจาน petri ประกอบด้วย
YPDA กลาง (20 มล.) เซลล์จากตัวเต็ม
แผ่นปลูกของแต่ละสิ่งมีชีวิตถูกหยุดชั่วคราวในน้ำเกลือ
โซลูชัน (10 ml) และผสมแล้ว จะได้รับ 5 × 106
CFU ต่อมิลลิลิตร ประมาณ 50 l การระงับนี้ถูกแล้ว
ใช้ฉีดจาน petri ประกอบด้วยสื่อ YPDA
และอากาศแห้งในฮูด laminar กระแสสำหรับ 20
min สารสกัดอควีของ P. amarus ถูกละลายใน
DMSO และเพิ่มแผ่น inoculated (20 ลิตร) ให้
ให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 250 g/ml เหล่านี้ plates
N.V. Rajeshkumar และ al. / 17–22 สมุด Ethnopharmacology 81 (2002) 19
มี inoculated ที่ 27 ° C สำหรับ 72–96 h จบ
ระยะฟักตัวบันทึกโซนยับยั้ง
สำหรับแต่ละการทดสอบสิ่งมีชีวิต ตัวควบคุมถูกเตรียมโดย
เพิ่ม DMSO (20 ลิตร) inoculated แผ่น (ช้างร้อยเอ็ด al.,
1995 รอดและ al., 1998) .
2.6 กำหนด cdc25 tyrosine ฟอสฟาเตส และ
cdc2 kinase ลิปกลอสไข assays
l 20 เกี่ยวกับโปรตีน GST cdc25A ถูกผสมกับ
l 20 มม. 100 dithiothreitol ในทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ A. ต่างไปจากเดิม
ความเข้มข้นของ P. amarus สารสกัดที่ละลายใน
ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์การ (140), l ใน 96-ดี microtitration แผ่น
แผ่นถูก preincubated ที่ 37 ° C สำหรับ 15 นาทีในการ
Denley Wellwarm 1 microplate บ่มเพาะวิสาหกิจ การทดสอบ
เริ่ม โดยเพิ่ม 20 ลิตร 500 มม. p nitrophenylphosphate
ฟอสฟาเตส (p-NPP) หลังจาก 60 นาที
บ่มที่ 37 ° C absorbance ที่ 405 nm มีวัด
ใน BioRad microplate อ่าน ว่างค่า (ไม่
GST cdc25A โปรตีนแต่ 10 นาทีบ่มพื้นผิวด้วย)
ถูก substracted โดยอัตโนมัติ (Baratte et al.,
1992) Cdc2 kinase ลิปกลอสไขวิเคราะห์ได้ดำเนินการโดย
immunoblotting techni
Antitumour และกิจกรรม anticarcinogenic ของ Phyllanthus amarus
extract
N.V Rajeshkumar เคแอลความคีรี Kuttan a, a, b Ramsewak อาร์เอส,
Muraleedharan G. Nair b, Ramadasan Kuttan a, *
-553 680 อินเดีย Kerala ศูนย์วิจัยมะเร็งดิอมาลา ทริสเซอร์
บีอี Bioacti ห้องปฏิบัติการผลิตภัณฑ์ธรรมชาติ ภาควิชาพืชสวน และความ ปลอดภัยของอาหารแห่งชาติ และ ศูนย์พิษวิทยา,
มิชิแกนสเตทยูนิ ersity, East Lansing, MI 48824 สหรัฐอเมริกา
ยอมรับ 10 2544 ธันวาคม
นามธรรม
จัดแสดงกิจกรรม anticarcinogenic มีศักยภาพกับ 20-methylcholanthrene
(20-MC) เกิด sarcoma พัฒนาสารสกัดอควี Phyllanthus amarus (P. amarus) รักษา และเพิ่มความอยู่รอดของเนื้องอก harboring หนู การดึงข้อมูล
ยังพบจัดการ (p.o) ช่วยยืดอายุช่วงชีวิตของดาลตันคอลลาท้องมาน (DLA) และท้องมาน Ehrlich
Carcinoma (EAC) เรืองหนู และลดปริมาตรของเนื้องอกที่แข็ง transplanted การดึงข้อมูลห้าม aniline hydroxylase,
เอนไซม์ 450 P ความเข้มข้นที่ต้องใช้ในการยับยั้งการ 50% (IC50) พบเป็น 540 g/ml มีการค้นพบสารสกัดที่ยับยั้ง
DNA topoisomerase II Saccharomyces cere isiae วัฒนธรรมเซลล์กลายพันธุ์และรอบเซลล์ห้ามบังคับเอนไซม์ tyrosine cdc25
ฟอสฟาเตส (IC50–25 g/ml) Antitumour และ anticancer กิจกรรมของ P. amarus อาจเกี่ยวข้องกับการยับยั้งการเผาผลาญ
เปิดใช้งานของสารก่อมะเร็งและยับยั้งการเร็คกูเลเตอร์วงจรเซลล์และดีเอ็นเอมีการซ่อมแซมได้ © 2002 ประกาศ โดย Elsevier วิทยาศาสตร์
ไอร์แลนด์ จำกัด
คำสำคัญ: Phyllanthus amarus Topoisomerase II Chemoprevention เร็คกูเลเตอร์วงจรเซลล์ ยา antitumour ฟอสฟาเตส tyrosine Cdc25
www.elsevier.com/ ค้น หา/jethpharm
1 แนะนำ
กรรมการกสารและอนุพันธ์ของ
จะยับยั้ง carcinogenesis ในการ
จำนวนทดลองระบบที่เกี่ยวข้องกับการเริ่มต้น,
โปรโมชั่นและก้าวหน้า (โฮจิมินห์ et al., 1994 หวงร้อยเอ็ด
al., 1994) . พืชประกอบด้วยปริมาณมากเหล่านี้
สาร และมีการแสดงอย่างต่อเนื่องจะ
เกี่ยวข้องกับความเสี่ยงต่ำของโรคมะเร็งที่เกือบทุก
ไซต์ (Steinmetz และพอตเตอร์ 1991) ความพยายาม ดังนั้น มี
ทำระบุ anticarcinogens ที่เกิดขึ้นตามธรรมชาติ
ที่จะป้องกัน ช้า หรือกลับ
มะเร็งการเหนี่ยวนำและการพัฒนาตามมา
(ช่วง et al., 2000)
Phyllanthus amarus Schum และ Thonn (syn. Phyllanthus
niruri) เป็นสมุนไพรเขตร้อนขนาดเล็กใช้กันแพร่หลายเป็นการ
ตัวแทนต่อต้านไวรัส (Thyagarajan et al., 1988 เดอ et al.,
1990 Jayram และ al., 1997) สารสกัดจาก P. amarus มี
แสดงยับยั้งพอลิเมอเรส DNA ของไวรัสตับอักเสบ B
และไวรัสตับอักเสบ (Venkateswaran et al.,
1987 Blumberg และ al., 1990) และลงควบคุมโรค
B ไวรัส mRNA transcription และแปล (Lee et
al., 1996 Ott et al., 1997) สารสกัด reversibly ห้าม
แพร่หลายเซลและหยุดผลิต HbsAg
ในเซลล์ hepatoma อ่างเส้น HepA2 (Yeh et
al., 1993) และห้ามนำของ HbsAg ในอเล็กซานเดอร์
เซลล์รายการ เป็นมนุษย์ตับมา
เซลล์บรรทัด (Jayram และ Thyagarajan, 1996) ล่าสุด P.
amarus แยกจัดการได้รับการแสดงเพื่อยับยั้ง
การพัฒนาเนื้องอกที่ตับเกิดจาก N nitrosodiethylamine
ในหนู และเพิ่มอายุขัยของ
harboring สัตว์ตับ (จอย และ
Kuttan, 1998 Rajeshkumar และ Kuttan, 2000) Lignans
phyllanthin, hypophyllanthin, flavanoids
quercetin, astragalin, ellagitannins และ hydrolysable
tannins จะแสดงจะอยู่ในพืชนี้ บาง
สารประกอบเหล่านี้ได้ถูกแสดงให้สำคัญ
กิจกรรมกับ carcinogenesis ทดลอง ใน
สอบสวนปัจจุบันเน้นความสนใจที่ antitumour
และแยกกิจกรรม anticarcinogenic ของ P. amarus
ในหนู ผลของ P. amarus แยกบน
* Corresponding ผู้เขียน โทรสาร: 91-487-211020.
ที่อยู่อีเมล: director@amalacom (R. Kuttan).
0378-8741/02/$ - ดูหน้าเรื่อง © 2002 เผยแพร่ โดย Elsevier วิทยาศาสตร์ไอร์แลนด์
PII: (01) S0378-8741 00419-6
18 N.V. Rajeshkumar et al. / 17–22 สมุด Ethnopharmacology 81 (2002)
เอนไซม์ 450 P, topoisomerases ดีเอ็นเอ และเซลล์รอบ
ยังถูกสอบสวนเร็คกูเลเตอร์
2 วัสดุและวิธีการ
ชายสวิสถูกหนู albino (10 สัปดาห์อายุ 20-25 กรัม)
ซื้อจากวิทยาลัยสัตว Mannuthy,
เกรละ อินเดีย และเก็บไว้ในคณะของเราสัตว์น้อย 1
สัปดาห์ก่อนใช้ สัตว์ถูกเลี้ยง ด้วยมาตรฐาน
เม็ดอาหารและน้ำดื่มที่ ad libitum ของดาลตัน
Carcinoma
(EAC) Ehrlich ท้องมานและท้องมานคอลลา (DLA) รายการเซลล์เนื้องอกได้รับมาจาก
สถาบันมะเร็ง เจนไน อินเดีย และได้เผยแพร่
เป็นเนื้องอกในท้องมาน transplantable ในสวิส albino หญิง
หนู
20 MC ร้านจากซิกเซนต์บริษัทเคมี
หลุยส์ สหรัฐอเมริกา ลด nicotinamide adenine dinucleotide
ฟอสเฟต (ลด NADPH) ถูกซื้อ
จาก Sisco วิจัย มุมไบ อินเดีย ทั้งหมด
เคมีภัณฑ์อื่น ๆ ที่ใช้ได้ของรีเอเจนต์วิเคราะห์เกรด
สารสกัดเข้มข้นอควีส่วนทางอากาศของการพิสูจน์ตัวจริง
P amarus ถูกจัดทำ โดยดร.สโมสรฟุตบอลคานธี,
Lyka วิจัย มุมไบ อินเดีย การดึงข้อมูล
ถูกหยุดชั่วคราวในน้ำกลั่น และใช้เป็นยา
2.1 กำหนดผล P. amarus ท้องมาน
เนื้องอก
เซลล์เนื้องอก (DLA EAC) aspirated จากใน peritoneal
ช่องของหนูถูกล้าง ด้วยน้ำเกลือ และ
1 × 106 เซลล์เนื้องอกที่ได้รับการ intraperitoneally
กลุ่มที่ 4 สัตว์ (เจ็ดหนูต่อกลุ่ม) สัตว์
ในกลุ่มพระราชวงศ์ โดย P. amarus รักษา.
สัตว์ในกลุ่ม II-IV ได้รับสารสกัด P. amarus ที่เป็น
เข้มข้น 60, 300, 1500 มก./กก.ร่างกาย weight
(p.o) ตามลำดับ 24 ชมหลังจากเนื้องอก inoculation และ
ต่อทุก 10 วัน สัตว์ที่พบใน
การพัฒนาเนื้องอกท้องมานและเสียชีวิตเนื่อง
บันทึกภาระเนื้องอก เพิ่มขึ้นในช่วงชีวิต
(percent ILS) ของกลุ่มบำบัดถูกคำนวณโดยใช้
เปอร์เซ็นต์สูตร ILS = (T−C) / C × 100 ที่ไม่ ' และ
'C' มีค่าเฉลี่ยความอยู่รอดของรักษา และควบคุมเมาส์,
ตามลำดับ (จอยและ al., 2000) .
2.2 ความมุ่งมั่นของ amarus ผล P. บนทึบ
เนื้องอก
หนึ่งล้านเซลล์ DLA/EAC ที่ฉีดในการการ
ขวาเดนไฮนด์ขาของหนู albino ชายสวิส (กลุ่ม I–IV,
หนู 7 กลุ่ม) สัตว์ในกลุ่ม II–IV รับ P.
amarus สารสกัดที่ความเข้มข้น 60, 300, 1500
มก./กก.ร่างกายน้ำหนัก (p.o), ตามลำดับ 24 ชมหลังจากเนื้องอก
inoculation และ 10 วัน สัตว์
ในกลุ่มพระราชวงศ์เป็นตัวควบคุม ซึ่งได้รับการ
รถ เส้นผ่าศูนย์กลางของเนื้องอกจะถูกวัดในทุก
มีคำนวณวันใช้ vernier calipers และปริมาณ
ใช้สูตร V = 4/3 r1 r2 2 × V
ปริมาตร r1 และ r2 แสดงรัศมีของเนื้องอกที่
สองต่างบิน
2.3 กำหนดผลของ P. amarus แยก
บน sarcoma ที่เหนี่ยวนำ โดย 20 - แม็ค
หนู c ชาย BALB (6–8 สัปดาห์อายุ 20-25 กรัม) ถูก
ใช้สำหรับการศึกษา ผมถูก shaved จากใน dorsal
ด้านข้างของหนู สัตว์ทั้งหมดถูกจัดการด้วยการ
ยาเดี่ยวของ 20 MC (200 g / 0.1 ml DMSO/เมาส์)
subcutaneously ทางด้าน dorsal ได้ขนาดนี้
การแสดงการผลิตพัฒนา sarcoma ในหนู
สัปดาห์ 8–12 (สุขและ al., 2000) หลังจากนั้น สัตว์
ถูกสุ่มแบ่งออกเป็น 3 กลุ่ม (หนู 20 ต่อ
กลุ่ม) สัตว์ในกลุ่มพระราชวงศ์ไม่ มียาใด ๆ
รักษา สัตว์ในกลุ่ม II และ III ถูกจัดการ
เนื้อหา ด้วย P. amarus 150 และ 750 มก./กก.ร่างกาย
น้ำหนัก ตามลำดับ สามครั้งทุกสัปดาห์ 8 สัปดาห์ Sarcoma
ถูกพัฒนาเป็นความอยู่รอดของสัตว์
สังเกตเห็นถึง 180 วัน.
2.4 Aniline hydroxylase วิเคราะห์ลิปกลอสไข
Aniline hydroxylase วิเคราะห์ทำโดยการ
วิธีโดย Mazel (Mazel, 1971) เอนไซม์นี้
เกิดในหนู โดยปากของ
phenobarbital (80 มิลลิกรัม/กิโลกรัม) 5 วัน สัตว์ถูก
เสียสละหลังการถือศีลอด โดยยาอีเทอร์แอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์
และตับถูก excised Homogenate 10% การเตรียม
ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์ ความเข้มข้นต่าง ๆ ของ
สารสกัดเพิ่มส่วนผสมของปฏิกิริยา และ incubated
สำหรับ h 2 ที่ 37 องศาเซลเซียส P-aminophenol เกิดขึ้นระหว่าง
การดำเนินการที่เอนไซม์ทำปฏิกิริยากับวางในด่าง
ขนาดกลางแบบตัวสีบลู ซึ่งถูก
วัดที่ 630 nm ยับยั้งเปอร์เซ็นต์ของ
aniline hydroxylase ถูกคำนวณ โดยการเปรียบเทียบการ
absorbency ควบคุมและยาที่รักษาตัวอย่าง.
2.5 Topoisomerase ฉันและทูลิปกลอสไข assays
cer Saccharomyces isiae เซลล์กลายพันธุ์วัฒนธรรมปลูก JN 394,
JN 394t-1 และ 394t JN-2-5 ใช้สำหรับ topoisomerase
assays สิ่งมีชีวิตที่ถูกจัดทำ โดยดร. Jhon Nistiss
ของโรงพยาบาล St. Jude เด็กวิจัย เมมฟิส,
เทนเนสซี สหรัฐอเมริกาและอ่างในจาน petri ประกอบด้วย
YPDA กลาง (20 มล.) เซลล์จากตัวเต็ม
แผ่นปลูกของแต่ละสิ่งมีชีวิตถูกหยุดชั่วคราวในน้ำเกลือ
โซลูชัน (10 ml) และผสมแล้ว จะได้รับ 5 × 106
CFU ต่อมิลลิลิตร ประมาณ 50 l การระงับนี้ถูกแล้ว
ใช้ฉีดจาน petri ประกอบด้วยสื่อ YPDA
และอากาศแห้งในฮูด laminar กระแสสำหรับ 20
min สารสกัดอควีของ P. amarus ถูกละลายใน
DMSO และเพิ่มแผ่น inoculated (20 ลิตร) ให้
ให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 250 g/ml เหล่านี้ plates
N.V. Rajeshkumar และ al. / 17–22 สมุด Ethnopharmacology 81 (2002) 19
มี inoculated ที่ 27 ° C สำหรับ 72–96 h จบ
ระยะฟักตัวบันทึกโซนยับยั้ง
สำหรับแต่ละการทดสอบสิ่งมีชีวิต ตัวควบคุมถูกเตรียมโดย
เพิ่ม DMSO (20 ลิตร) inoculated แผ่น (ช้างร้อยเอ็ด al.,
1995 รอดและ al., 1998) .
2.6 กำหนด cdc25 tyrosine ฟอสฟาเตส และ
cdc2 kinase ลิปกลอสไข assays
l 20 เกี่ยวกับโปรตีน GST cdc25A ถูกผสมกับ
l 20 มม. 100 dithiothreitol ในทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ A. ต่างไปจากเดิม
ความเข้มข้นของ P. amarus สารสกัดที่ละลายใน
ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์การ (140), l ใน 96-ดี microtitration แผ่น
แผ่นถูก preincubated ที่ 37 ° C สำหรับ 15 นาทีในการ
Denley Wellwarm 1 microplate บ่มเพาะวิสาหกิจ การทดสอบ
เริ่ม โดยเพิ่ม 20 ลิตร 500 มม. p nitrophenylphosphate
ฟอสฟาเตส (p-NPP) หลังจาก 60 นาที
บ่มที่ 37 ° C absorbance ที่ 405 nm มีวัด
ใน BioRad microplate อ่าน ว่างค่า (ไม่
GST cdc25A โปรตีนแต่ 10 นาทีบ่มพื้นผิวด้วย)
ถูก substracted โดยอัตโนมัติ (Baratte et al.,
1992) Cdc2 kinase ลิปกลอสไขวิเคราะห์ได้ดำเนินการโดย
immunoblotting techni
การแปล กรุณารอสักครู่..
Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22
Antitumour and anticarcinogenic activity of Phyllanthus amarus
extract
N.V. Rajeshkumar a, K.L. Joy a, Girija Kuttan a, R.S. Ramsewak b,
Muraleedharan G. Nair b, Ramadasan Kuttan a,*
a Amala Cancer Research Centre, Thrissur, Kerala, 680 -553, India
b Bioactie Natural Products Laboratory, Department of Horticulture and National Food Safety and Toxicology Center,
Michigan State Uniersity, East Lansing, MI 48824, USA
Accepted 10 December 2001
Abstract
Aqueous extract of Phyllanthus amarus (P. amarus) treatment exhibited potent anticarcinogenic activity against 20-methylcholanthrene
(20-MC) induced sarcoma development and increased the survival of tumour harboring mice. The extract
administration (p.o) was also found to prolong the life span of Dalton’s Lymphoma Ascites (DLA) and Ehrlich Ascites
Carcinoma (EAC) bearing mice and reduced the volume of transplanted solid tumours. The extract inhibited aniline hydroxylase,
a P-450 enzyme. The concentration required for 50% inhibition (IC50) was found to be 540 g/ml. The extract was found to inhibit
DNA topoisomerase II of Saccharomyces cereisiae mutant cell cultures and inhibited cell cycle regulatory enzyme cdc25 tyrosine
phosphatase (IC50–25 g/ml). Antitumour and anticancer activity of P. amarus may be related with the inhibition of metabolic
activation of carcinogen as well as the inhibition of cell cycle regulators and DNA repair. © 2002 Published by Elsevier Science
Ireland Ltd.
Keywords: Phyllanthus amarus; Topoisomerase II; Chemoprevention; Cell cycle regulators; Antitumour drugs; Cdc25 tyrosine phosphatase
www.elsevier.com/locate/jethpharm
1. Introduction
A variety of bioactive compounds and their derivatives
has been shown to inhibit carcinogenesis in a
number of experimental systems involving initiation,
promotion and progression (Ho et al., 1994; Huang et
al., 1994). Plants contain abundant quantities of these
substances and have consistently been shown to be
associated with a lower risk of cancers at almost every
site (Steinmetz and Potter, 1991). Efforts, therefore, are
being made to identify naturally occurring anticarcinogens
which would prevent, slow and/or reverse the
cancer induction and its subsequent development
(Chuang et al., 2000).
Phyllanthus amarus Schum and Thonn (syn. Phyllanthus
niruri ) is a small tropical herb widely used as an
anti-viral agent (Thyagarajan et al., 1988; De et al.,
1990; Jayram et al., 1997). P. amarus extract has been
shown to inhibit DNA polymerase of hepatitis B virus
and related hepatitis viruses (Venkateswaran et al.,
1987; Blumberg et al., 1990) and down regulate hepatitis
B virus mRNA transcription and translation (Lee et
al., 1996; Ott et al., 1997). The extract reversibly inhibited
cellular proliferation and suppressed HbsAg production
in cultured hepatoma cell line HepA2 (Yeh et
al., 1993) and inhibited the release of HbsAg in Alexander
cell line, a human hepatocellular carcinoma derived
cell line (Jayram and Thyagarajan, 1996). Recently, P.
amarus extract administration has been shown to inhibit
the liver tumour development induced by N-nitrosodiethylamine
in rats and increased the life span of
hepatocellular carcinoma harboring animals (Joy and
Kuttan, 1998; Rajeshkumar and Kuttan, 2000). Lignans
such as phyllanthin, hypophyllanthin, flavanoids
quercetin, astragalin, ellagitannins and hydrolysable
tannins are shown to be present in this plant. Some of
these compounds have been shown to have significant
activity against experimental carcinogenesis. The
present investigation focuses attention on the antitumour
and anticarcinogenic activity of P. amarus extract
in mice. In addition, the effect of P. amarus extract on
* Corresponding author. Fax: +91-487-211020.
E-mail address: director@amala.com (R. Kuttan).
0378-8741/02/$ - see front matter © 2002 Published by Elsevier Science Ireland Ltd.
PII: S0378-8741(01)00419-6
18 N.V. Rajeshkumar et al. / Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22
P-450 enzyme, DNA topoisomerases and cell cycle
regulators were also investigated.
2. Materials and methods
Male Swiss albino mice (10-weeks-old, 20–25 g) were
purchased from the Veterinary College, Mannuthy,
Kerala, India, and kept in our animal faculty at least 1
week before use. The animals were fed with a standard
pellet diet and drinking water ad libitum. Dalton’s
Lymphoma Ascites (DLA) and Ehrlich Ascites Carcinoma
(EAC) tumour cell lines were obtained from
Cancer Institute, Chennai, India and were propagated
as transplantable ascites tumours in female Swiss albino
mice.
20-MC was purchased from Sigma Chemical Co. St.
Louis, USA. Reduced nicotinamide adenine dinucleotide
phosphate (reduced, NADPH) was purchased
from Sisco Research Laboratories, Mumbai, India. All
other chemicals used were of analytical reagent grade.
Concentrated aqueous extract of aerial parts of authenticated
P. amarus was supplied by Dr S.S. Gandhi,
Lyka Research Laboratories, Mumbai, India. The extract
was suspended in distilled water and used as drug.
2.1. Determination of the effect P. amarus on ascites
tumours
Tumour cells (DLA/EAC) aspirated from the peritoneal
cavity of mice were washed with saline and
1×106 tumour cells were given intraperitoneally to
four group of animals (seven mice per group). Animals
in the group I were kept without P. amarus treatment.
Animals in group II-IV received P. amarus extract at a
concentration of 60, 300, 1500 mg/kg body weight
(p.o), respectively, 24 h after tumour inoculation and
continued daily for 10 days. Animals were observed for
the development of ascites tumour and deaths due to
tumour burden were recorded. The increase in life span
(percent ILS) of treated group was calculated using the
formula, percent ILS=(T−C)/C×100, where ‘T’ and
‘C’ are mean survival of treated and control mice,
respectively (Joy et al., 2000).
2.2. Determination of the effect P. amarus on solid
tumours
One million DLA/EAC cells were injected in to the
right hind limb of male Swiss albino mice (Group I–IV,
seven mice/group). Animals in group II–IV received P.
amarus extract at a concentration of 60, 300, 1500
mg/kg body weight (p.o), respectively, 24 h after tumour
inoculation and continued for 10 days. Animals
in group I were kept as control, which received the
vehicle. Diameter of the tumour was measured on every
fifth day using vernier calipers and volume was calculated
using the formula, V=4/3r1 2 ×r2, where V is
volume, r1 and r2 represent the radii of the tumour at
two different planes.
2.3. Determination of the effect of P. amarus extract
on sarcoma induced by 20 -MC
Male BALB/c mice (6–8-weeks-old, 20–25 g) were
used for the study. Hair was shaved from the dorsal
side of mice. All animals were administered with a
single dose of 20-MC (200 g/0.1ml DMSO/mouse)
subcutaneously on the dorsal side. This dosage has
been shown to produce sarcoma development in mice
by 8–12 weeks (Joy et al., 2000). Thereafter, animals
were randomly divided in to three groups (20 mice per
group). Animals in group I were kept without any drug
treatment. Animals in groups II and III were administered
orally with P. amarus 150 and 750 mg/kg body
weight, respectively, thrice weekly for 8 weeks. Sarcoma
developments as well as survival of the animals were
noticed up to 180 days.
2.4. Aniline hydroxylase inhibitory assay
Aniline hydroxylase assay was performed by the
method described by Mazel (Mazel, 1971). The enzyme
was induced in rats by the oral administration of
phenobarbital (80 mg/kg) for 5 days. The animals were
sacrificed after an overnight fasting by ether anesthesia
and the liver was excised. A 10% homogenate prepared
was used for the assay. Various concentrations of the
extract were added to the reaction mixture and incubated
for 2 h at 37 °C. P-aminophenol formed during
the enzyme action reacts with phenol in alkaline
medium to form a blue coloured product, which was
measured at 630 nm. The percentage inhibition of
aniline hydroxylase was calculated by comparing the
absorbency of control and that of drug treated samples.
2.5. Topoisomerase I and II inhibitory assays
Saccharomyces cerisiae mutant cell cultures JN 394,
JN 394t-1 and JN 394t-2-5 were used for topoisomerase
assays. The organisms were supplied by Dr. Jhon Nistiss
of St. Jude Children’s Research Hospital, Memphis,
Tennessee, USA and were cultured in petri dishes containing
YPDA medium (20 ml). The cells from a fully
grown plate of each organism were suspended in saline
solution (10 ml) and then diluted to obtain 5×106
CFU per ml. About 50 l of this suspension was then
used to inoculate petri dishes containing YPDA media
and allowed to air dry in the laminar flow hood for 20
min. The aqueous extract of P. amarus was dissolved in
DMSO and added to the inoculated plates (20 l) to
give a final concentration of 250 g/ml. These plates
N.V. Rajeshkumar et al. / Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22 19
were inoculated at 27 °C for 72–96 h. At the end of
incubation period the zones of inhibition were recorded
for each test organism. Controls were prepared by
adding DMSO (20 l) to inoculated plate (Chang et al.,
1995; Roth et al., 1998).
2.6. Determination of cdc25 tyrosine phosphatase and
cdc2 kinase inhibitory assays
About 20 l of GST-cdc25A protein was mixed with
20 l 100 mM dithiothreitol in Tris buffer A. Different
concentrations of P. amarus extract were dissolved in
Tris buffer A (140 l), in 96-well microtitration plates.
The plates were preincubated at 37 °C for 15 min in a
Denley Wellwarm 1 microplate incubator. The assay
was initiated by addition of 20 l of 500 mM p-nitrophenylphosphate
phosphatase (p-NPP). After 60 min
incubation at 37 °C absorbance at 405 nm was measured
in a BioRad microplate reader. Blank values (no
GST-cdc25A protein but 10 min incubation with substrate)
were automatically substracted (Baratte et al.,
1992). Cdc2 kinase inhibitory assay was conducted by
immunoblotting techni
Antitumour and anticarcinogenic activity of Phyllanthus amarus
extract
N.V. Rajeshkumar a, K.L. Joy a, Girija Kuttan a, R.S. Ramsewak b,
Muraleedharan G. Nair b, Ramadasan Kuttan a,*
a Amala Cancer Research Centre, Thrissur, Kerala, 680 -553, India
b Bioactie Natural Products Laboratory, Department of Horticulture and National Food Safety and Toxicology Center,
Michigan State Uniersity, East Lansing, MI 48824, USA
Accepted 10 December 2001
Abstract
Aqueous extract of Phyllanthus amarus (P. amarus) treatment exhibited potent anticarcinogenic activity against 20-methylcholanthrene
(20-MC) induced sarcoma development and increased the survival of tumour harboring mice. The extract
administration (p.o) was also found to prolong the life span of Dalton’s Lymphoma Ascites (DLA) and Ehrlich Ascites
Carcinoma (EAC) bearing mice and reduced the volume of transplanted solid tumours. The extract inhibited aniline hydroxylase,
a P-450 enzyme. The concentration required for 50% inhibition (IC50) was found to be 540 g/ml. The extract was found to inhibit
DNA topoisomerase II of Saccharomyces cereisiae mutant cell cultures and inhibited cell cycle regulatory enzyme cdc25 tyrosine
phosphatase (IC50–25 g/ml). Antitumour and anticancer activity of P. amarus may be related with the inhibition of metabolic
activation of carcinogen as well as the inhibition of cell cycle regulators and DNA repair. © 2002 Published by Elsevier Science
Ireland Ltd.
Keywords: Phyllanthus amarus; Topoisomerase II; Chemoprevention; Cell cycle regulators; Antitumour drugs; Cdc25 tyrosine phosphatase
www.elsevier.com/locate/jethpharm
1. Introduction
A variety of bioactive compounds and their derivatives
has been shown to inhibit carcinogenesis in a
number of experimental systems involving initiation,
promotion and progression (Ho et al., 1994; Huang et
al., 1994). Plants contain abundant quantities of these
substances and have consistently been shown to be
associated with a lower risk of cancers at almost every
site (Steinmetz and Potter, 1991). Efforts, therefore, are
being made to identify naturally occurring anticarcinogens
which would prevent, slow and/or reverse the
cancer induction and its subsequent development
(Chuang et al., 2000).
Phyllanthus amarus Schum and Thonn (syn. Phyllanthus
niruri ) is a small tropical herb widely used as an
anti-viral agent (Thyagarajan et al., 1988; De et al.,
1990; Jayram et al., 1997). P. amarus extract has been
shown to inhibit DNA polymerase of hepatitis B virus
and related hepatitis viruses (Venkateswaran et al.,
1987; Blumberg et al., 1990) and down regulate hepatitis
B virus mRNA transcription and translation (Lee et
al., 1996; Ott et al., 1997). The extract reversibly inhibited
cellular proliferation and suppressed HbsAg production
in cultured hepatoma cell line HepA2 (Yeh et
al., 1993) and inhibited the release of HbsAg in Alexander
cell line, a human hepatocellular carcinoma derived
cell line (Jayram and Thyagarajan, 1996). Recently, P.
amarus extract administration has been shown to inhibit
the liver tumour development induced by N-nitrosodiethylamine
in rats and increased the life span of
hepatocellular carcinoma harboring animals (Joy and
Kuttan, 1998; Rajeshkumar and Kuttan, 2000). Lignans
such as phyllanthin, hypophyllanthin, flavanoids
quercetin, astragalin, ellagitannins and hydrolysable
tannins are shown to be present in this plant. Some of
these compounds have been shown to have significant
activity against experimental carcinogenesis. The
present investigation focuses attention on the antitumour
and anticarcinogenic activity of P. amarus extract
in mice. In addition, the effect of P. amarus extract on
* Corresponding author. Fax: +91-487-211020.
E-mail address: director@amala.com (R. Kuttan).
0378-8741/02/$ - see front matter © 2002 Published by Elsevier Science Ireland Ltd.
PII: S0378-8741(01)00419-6
18 N.V. Rajeshkumar et al. / Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22
P-450 enzyme, DNA topoisomerases and cell cycle
regulators were also investigated.
2. Materials and methods
Male Swiss albino mice (10-weeks-old, 20–25 g) were
purchased from the Veterinary College, Mannuthy,
Kerala, India, and kept in our animal faculty at least 1
week before use. The animals were fed with a standard
pellet diet and drinking water ad libitum. Dalton’s
Lymphoma Ascites (DLA) and Ehrlich Ascites Carcinoma
(EAC) tumour cell lines were obtained from
Cancer Institute, Chennai, India and were propagated
as transplantable ascites tumours in female Swiss albino
mice.
20-MC was purchased from Sigma Chemical Co. St.
Louis, USA. Reduced nicotinamide adenine dinucleotide
phosphate (reduced, NADPH) was purchased
from Sisco Research Laboratories, Mumbai, India. All
other chemicals used were of analytical reagent grade.
Concentrated aqueous extract of aerial parts of authenticated
P. amarus was supplied by Dr S.S. Gandhi,
Lyka Research Laboratories, Mumbai, India. The extract
was suspended in distilled water and used as drug.
2.1. Determination of the effect P. amarus on ascites
tumours
Tumour cells (DLA/EAC) aspirated from the peritoneal
cavity of mice were washed with saline and
1×106 tumour cells were given intraperitoneally to
four group of animals (seven mice per group). Animals
in the group I were kept without P. amarus treatment.
Animals in group II-IV received P. amarus extract at a
concentration of 60, 300, 1500 mg/kg body weight
(p.o), respectively, 24 h after tumour inoculation and
continued daily for 10 days. Animals were observed for
the development of ascites tumour and deaths due to
tumour burden were recorded. The increase in life span
(percent ILS) of treated group was calculated using the
formula, percent ILS=(T−C)/C×100, where ‘T’ and
‘C’ are mean survival of treated and control mice,
respectively (Joy et al., 2000).
2.2. Determination of the effect P. amarus on solid
tumours
One million DLA/EAC cells were injected in to the
right hind limb of male Swiss albino mice (Group I–IV,
seven mice/group). Animals in group II–IV received P.
amarus extract at a concentration of 60, 300, 1500
mg/kg body weight (p.o), respectively, 24 h after tumour
inoculation and continued for 10 days. Animals
in group I were kept as control, which received the
vehicle. Diameter of the tumour was measured on every
fifth day using vernier calipers and volume was calculated
using the formula, V=4/3r1 2 ×r2, where V is
volume, r1 and r2 represent the radii of the tumour at
two different planes.
2.3. Determination of the effect of P. amarus extract
on sarcoma induced by 20 -MC
Male BALB/c mice (6–8-weeks-old, 20–25 g) were
used for the study. Hair was shaved from the dorsal
side of mice. All animals were administered with a
single dose of 20-MC (200 g/0.1ml DMSO/mouse)
subcutaneously on the dorsal side. This dosage has
been shown to produce sarcoma development in mice
by 8–12 weeks (Joy et al., 2000). Thereafter, animals
were randomly divided in to three groups (20 mice per
group). Animals in group I were kept without any drug
treatment. Animals in groups II and III were administered
orally with P. amarus 150 and 750 mg/kg body
weight, respectively, thrice weekly for 8 weeks. Sarcoma
developments as well as survival of the animals were
noticed up to 180 days.
2.4. Aniline hydroxylase inhibitory assay
Aniline hydroxylase assay was performed by the
method described by Mazel (Mazel, 1971). The enzyme
was induced in rats by the oral administration of
phenobarbital (80 mg/kg) for 5 days. The animals were
sacrificed after an overnight fasting by ether anesthesia
and the liver was excised. A 10% homogenate prepared
was used for the assay. Various concentrations of the
extract were added to the reaction mixture and incubated
for 2 h at 37 °C. P-aminophenol formed during
the enzyme action reacts with phenol in alkaline
medium to form a blue coloured product, which was
measured at 630 nm. The percentage inhibition of
aniline hydroxylase was calculated by comparing the
absorbency of control and that of drug treated samples.
2.5. Topoisomerase I and II inhibitory assays
Saccharomyces cerisiae mutant cell cultures JN 394,
JN 394t-1 and JN 394t-2-5 were used for topoisomerase
assays. The organisms were supplied by Dr. Jhon Nistiss
of St. Jude Children’s Research Hospital, Memphis,
Tennessee, USA and were cultured in petri dishes containing
YPDA medium (20 ml). The cells from a fully
grown plate of each organism were suspended in saline
solution (10 ml) and then diluted to obtain 5×106
CFU per ml. About 50 l of this suspension was then
used to inoculate petri dishes containing YPDA media
and allowed to air dry in the laminar flow hood for 20
min. The aqueous extract of P. amarus was dissolved in
DMSO and added to the inoculated plates (20 l) to
give a final concentration of 250 g/ml. These plates
N.V. Rajeshkumar et al. / Journal of Ethnopharmacology 81 (2002) 17–22 19
were inoculated at 27 °C for 72–96 h. At the end of
incubation period the zones of inhibition were recorded
for each test organism. Controls were prepared by
adding DMSO (20 l) to inoculated plate (Chang et al.,
1995; Roth et al., 1998).
2.6. Determination of cdc25 tyrosine phosphatase and
cdc2 kinase inhibitory assays
About 20 l of GST-cdc25A protein was mixed with
20 l 100 mM dithiothreitol in Tris buffer A. Different
concentrations of P. amarus extract were dissolved in
Tris buffer A (140 l), in 96-well microtitration plates.
The plates were preincubated at 37 °C for 15 min in a
Denley Wellwarm 1 microplate incubator. The assay
was initiated by addition of 20 l of 500 mM p-nitrophenylphosphate
phosphatase (p-NPP). After 60 min
incubation at 37 °C absorbance at 405 nm was measured
in a BioRad microplate reader. Blank values (no
GST-cdc25A protein but 10 min incubation with substrate)
were automatically substracted (Baratte et al.,
1992). Cdc2 kinase inhibitory assay was conducted by
immunoblotting techni
การแปล กรุณารอสักครู่..
วารสาร ethnopharmacology 81 ( 2002 ) 17 – 22
antitumour และกิจกรรมการของสารสกัด amarus
ประกาศชื่อ rajeshkumar , ความสุข , กีริจา kuttan , ชิ้นส่วน ramsewak B ,
muraleedharan กรัมแนร์ B , ramadasan kuttan A *
มีมาลาวิจัยศูนย์มะเร็ง , Thrissur , เกรละ , 680 - 553 , อินเดีย
b bioacti E ผลิตภัณฑ์ธรรมชาติในห้องปฏิบัติการภาควิชาพืชสวน และศูนย์ความปลอดภัยและพิษวิทยาทางอาหารแห่งชาติ ,
รัฐมิชิแกนยูนิ ersity East Lansing , มิ 48824 สหรัฐอเมริกา 10 ธันวาคม 2544
ยอมรับสารสกัดน้ำนามธรรม
ของสาร amarus ( หน้า amarus ) มีกิจกรรมการรักษาที่มีศักยภาพต่อ 20 มธิลคอแลนทรีน
( 20-mc ) เกิดการพัฒนาโคมาและเพิ่มการอยู่รอดของการรับรู้หนูสารสกัดจาก
การบริหาร ( p.o ) พบการยืดอายุขัยของดอลตันต่อมน้ำเหลืองในท้อง ( สํา ) และมะเร็ง Ehrlich ascites
( EAC ) เรืองหนู และลดปริมาณของการปลูกถ่ายเนื้องอกที่เป็นของแข็ง สารยับยั้งการ hydroxylase : p-450 , เอนไซม์ ความเข้มข้นที่จำเป็นสำหรับ 50% ยับยั้ง ic50 ) พบว่าเป็น 540 g / ml พบว่าสารสกัดยับยั้ง
ชนิดของดีเอ็นเอ 2 และเซเร isiae กลายพันธุ์เซลล์วัฒนธรรมและยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนสซึ่งเซลล์รอบ cdc25
ฟอสฟาเตส ( ic50 – 25 g / ml ) และกิจกรรมของ antitumour ต้านหน้า amarus อาจเกี่ยวข้องกับการยับยั้งการสลาย
ของสารก่อมะเร็ง รวมทั้งการยับยั้งควบคุมวัฏจักรเซลล์และซ่อมแซมดีเอ็นเอ © 2545 เผยแพร่โดยไอร์แลนด์วิทยาศาสตร์
สจำกัดคำสำคัญ : สาร amarus ; ชนิด 2 จำนวนการทำงานของแคชวัตถุ ; ควบคุมวัฏจักรเซลล์ antitumour ยา cdc25 ไทโรซิเนสฟอสฟาเตส
www.elsevier . com / ค้นหา / jethpharm
1 บทนำ
ความหลากหลายของสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพและสารอนุพันธ์
ได้รับการแสดงเพื่อยับยั้งมะเร็งในระบบที่เกี่ยวข้องกับจำนวนของการทดลอง
และการส่งเสริมความก้าวหน้า ( โฮ et al . , 1994 ; Huang et
al . ,1994 ) พืชประกอบด้วยมากมายปริมาณของสารเหล่านี้
และมีเสมอถูกแสดงเป็น
ที่เกี่ยวข้องกับความเสี่ยงต่ำของโรคมะเร็งที่เกือบทุก
เว็บไซต์ ( Steinmetz และพอตเตอร์ , 1991 ) ความพยายาม ดังนั้น เพื่อให้ศึกษาธรรมชาติที่เกิดขึ้น
anticarcinogens ซึ่งจะป้องกันไม่ให้ ช้า และ / หรือย้อนกลับ
มะเร็ง induction และการพัฒนาตามมาของมัน ( ชวง et al . , 2000 ) .
สาร amarus schum และ thonn ( 1 สาร
niruri ) เป็นสมุนไพรที่ใช้กันอย่างแพร่หลายขนาดเล็กเขตร้อนเป็น
เจ้าหน้าที่ต่อต้านไวรัส ( thyagarajan et al . , 1988 ; de et al . ,
1990 ; jayram et al . , 1997 ) หน้า amarus สกัดได้
แสดงการยับยั้ง DNA polymerase ของไวรัสตับอักเสบบี และโรคตับอักเสบ ไวรัส (
venkateswaran et al . , 1987 ; Blumberg et al . , 1990 ) และลงควบคุมโรคไวรัสตับอักเสบ
การถอดความของไวรัสและการแปล ( ลี et
al . , 1996 ; โอ๊ต et al . , 1997 ) สารสกัดจากเซลล์และยับยั้งการเจริญซึ่งพลิกกลับได้
เพาะเลี้ยงเซลล์ตับสร้างการผลิตในสาย hepa2 ( Yeh et
al . , 1993 ) และยับยั้งการปล่อยของ HBsAg ใน Alexander
ไพรที มนุษย์ได้มา
เซลล์มะเร็งตับ ( jayram บรรทัด และ thyagarajan , 1996 ) P .
เมื่อเร็วๆ นี้สารสกัดจาก amarus บริหารได้ถูกแสดงเพื่อขัดขวางการพัฒนาของตับบวม
n-nitrosodiethylamine ในหนูและเพิ่มอายุขัยของสัตว์ (
มะเร็งตับที่ความสุขและ
kuttan , 1998 ; rajeshkumar และ kuttan , 2000 ) ลิกแนน
เช่น phyllanthin hypophyllanthin ฟลาโวนอยด์เควอซิติน , ,
hydrolysable ellagitannins ตรากาลิน , , และแทนนินจะแสดงเป็นปัจจุบันในโรงงานนี้ บางส่วนของ
สารเหล่านี้ได้รับการแสดงที่จะมีกิจกรรมสำคัญ
ต่อต้านการทดลองมะเร็ง
สืบสวนปัจจุบันมุ่งเน้นความสนใจใน antitumour
และกิจกรรมการของหน้า amarus สกัด
ในหนู นอกจากนี้ ผลของสารสกัดหน้า amarus
* ที่สอดคล้องกันของผู้เขียน โทรสาร : 91-487-211020 .
e - mail address : ผู้อำนวยการ @ มาลา .ดอทคอม ( R . kuttan )
0378-8741 / 02 / $ - ดูเรื่องหน้า© 2545 ตีพิมพ์โดยเอลส์จำกัดไอร์แลนด์วิทยาศาสตร์
ปี่ : s0378-8741 ( 01 ) 00419-6
18 รวม rajeshkumar et al . วารสารของ ethnopharmacology 81 ( 2002 ) 17 – 22
p-450 เอนไซม์ topoisomerases ดีเอ็นเอและควบคุมวงจร
เซลล์ได้ถูกศึกษา .
2 วัสดุและวิธีการ
ชายชาวสวิส เผือกหนู ( 10 สัปดาห์เก่า 20 – 25 g )
ซื้อจากสัตวแพทย์มหาวิทยาลัย mannuthy
, Kerala , อินเดีย , และเก็บไว้ในคณะสัตว์ของเราอย่างน้อย 1
1 สัปดาห์ก่อนใช้ สัตว์ที่ถูกเลี้ยงด้วยอาหารเม็ด และดื่มสูตรมาตรฐาน
โฆษณาน้ำ เดลตั้น
ต่อมน้ำเหลืองบวมน้ำ ( สํา ) และมะเร็ง Ehrlich ascites
( EAC ) เนื้องอกเซลล์ได้จาก
สถาบันมะเร็ง เจนไน , อินเดียและขยายพันธุ์
เป็น transplantable ท้องมานเนื้องอกในหนูเผือก หญิงชาวสวิส
.
20-mc ซื้อมาจาก Sigma เคมี . St .
หลุยส์ , USA ลดพยุหยาตรา
ฟอสเฟต ( ลดลง nadph ) ซื้อ
จากห้องปฏิบัติการ วิจัย Sisco มุมไบ , อินเดีย ทั้งหมดอื่น ๆของสารเคมีที่ใช้วิเคราะห์
3 เกรด สกัดเข้มข้นน้ำส่วนทางอากาศรับรอง
Pamarus ถูกจัดโดย ดร. SS คานธี ,
lyka งานวิจัยห้องปฏิบัติการ , มุมไบ , อินเดีย สารสกัดจาก
ถูกระงับในน้ำกลั่นและใช้เป็นยา
2.1 . การศึกษาผลหน้า amarus ในท้อง
เซลล์มะเร็งเนื้องอก ( สําหรับ / EAC ) ลมจากช่องท้อง
โพรงของหนูล้างด้วยน้ำเกลือและ
1 × 106 เนื้องอกได้รับพบ
สี่กลุ่มของสัตว์ ( 7 ) / กลุ่ม ) สัตว์
ในกลุ่มผมได้โดยไม่ต้องหน้า amarus รักษา สัตว์ในกลุ่มที่ได้รับ ii-iv
P
amarus สารสกัดที่ความเข้มข้น 60 , 300 , 1 , 500 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมน้ำหนักตัว ( p.o
) เท่ากับ 24 ชั่วโมงหลังจากการใช้อย่างต่อเนื่องทุกวันและ
10 วัน สัตว์ที่พบในการพัฒนาท้องบวม
และเสียชีวิตเนื่องจากภาระเนื้องอกถูกบันทึกไว้ เพิ่มขึ้นในช่วงชีวิต
( ILS ) ) ของกลุ่มคือ คำนวณโดยใช้สูตรและ ILS = (
, T − C / C × 100 ที่ ' T '
' c ' หมายถึงการอยู่รอดของการรักษาและเมาส์ควบคุม
ตามลำดับ ( จอย et al . , 2000 ) .
2.2 . การศึกษาผล amarus บนหน้าแข็งหลัง
หนึ่งล้าน ดีแอลเอ / EAC เซลล์ถูกฉีดเพื่อ
ขาหลังขวาของชายชาวสวิส เผือกหนู ( กลุ่ม ) 4
7 หนู / กลุ่ม ) สัตว์ในกลุ่มที่ 2 – 4 P .
amarus ได้รับสารสกัดที่ความเข้มข้น 60 , 300 , 1 , 500
มิลลิกรัมต่อน้ำหนักตัว 1 กิโลกรัม ( p.o ) เท่ากับ 24 ชั่วโมงหลังจากการงอก
และต่อเนื่อง 10 วัน สัตว์
ในกลุ่มฉันได้เก็บรักษาควบคุมซึ่งได้รับ
ยานพาหนะ ขนาดของเนื้องอกได้ทุก
วันที่ห้า ใช้เวอร์เนียคาลิเปอร์และปริมาณคำนวณ
ใช้สูตร V = 4 / 3 R1 2 × R2 ที่ v
กําหนด R1 R2 เป็นตัวแทนและรัศมีเนื้องอกที่
2 ลำที่แตกต่างกัน .
2.3 การศึกษาผลของสารสกัดจากหน้า amarus
ในโคมาและ 20 - MC
ชายหนูสายพันธุ์ Balb / C ( 6 ) 8-weeks-old 20 – 25 g )
) เพื่อใช้ในการศึกษา ผมถูกโกนจากด้านหลัง
ของหนูสัตว์ทั้งหมดถูกทดสอบด้วย
dose เดียวของ 20-mc ( 200 กรัม / 0.1ml DMSO / เมาส์ )
subcutaneously ข้างหลัง . ปริมาณนี้มี
ถูกแสดงพัฒนาผลิตโคมาในหนู
8 – 12 สัปดาห์ ( จอย et al . , 2000 ) หลังจากนั้น สัตว์
สุ่มออกเป็น 3 กลุ่ม ( กลุ่มละ 20 (
) สัตว์ในกลุ่มฉันได้โดยไม่ต้องยาเสพติด
รักษาสัตว์ในกลุ่มที่ 2 และ 3 ศึกษา
ปากเปล่ากับหน้า amarus 150 และ 750 มก. / กก. น้ำหนักตัว
ตามลำดับ สามสัปดาห์ เป็นเวลา 8 สัปดาห์ โคมา
การพัฒนาตลอดจนความอยู่รอดของสัตว์สังเกตได้ถึง 180 วัน
.
2.4 . การใช้ hydroxylase ยับยั้งการกระทำโดย hydroxylase
3
วิธีอธิบายโดยโชคดี ( โชคดี 1971 ) เอนไซม์
นำในหนูโดยการบริหารช่องปากของ
ฟีโนบาร์บิทอล ( 80 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ) เป็นเวลา 5 วัน สัตว์ที่ถูกสังเวยวันถือศีลอดด้วย
ยาชายาสลบและตับถูกเอาออก 10 % อนเตรียม
ถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบ ความเข้มข้นต่าง ๆ ของ
สารสกัดเพิ่มปฏิกิริยาผสมบ่ม
2 H ที่ 37 องศา พาราอมิโนฟีนอลที่เกิดขึ้นในระหว่าง
เอนไซม์ในการทำปฏิกิริยากับด่างฟีนอลในสื่อในรูปแบบสีฟ้าสี
สินค้า ซึ่งเป็นวัดที่ 630 นาโนเมตร เปอร์เซ็นต์การยับยั้งการคำนวณโดยการเปรียบเทียบ hydroxylase
ของการควบคุมและดูดซึมของยารักษาตัวอย่าง
2.5 ชนิด I และ II ) และยับยั้ง isiae เซลล์กลายพันธุ์ส
วัฒนธรรม Jn 394 ,ชุมทางชุมทาง 394t-1 394t-2-5 และนำมาใช้ใหม่
. สิ่งมีชีวิตถูกจัดโดย ดร. จอน nistiss
โรงพยาบาลวิจัยเด็กเซนต์จูดเมมฟิส
เทนเนสซี ประเทศสหรัฐอเมริกา และเพาะเลี้ยงในจานเลี้ยงเชื้อที่มี
ypda ขนาดกลาง ( 20 ml . ) เซลล์จากเต็มที่
โตจานของแต่ละสิ่งมีชีวิตที่ถูกระงับในสารละลายเกลือ
( 10 มล. ) และเจือจางให้ได้ 5 × 106
CFU ต่อมิลลิลิตรประมาณ 50 ลิตรช่วงล่างนี้แล้ว
เคยฉีดวัคซีนจานเลี้ยงเชื้อที่มีสื่อ ypda และได้รับอนุญาตให้อากาศแห้งในเครื่องดูดควันสำหรับการไหลแบบราบเรียบ 20
มิน สารสกัดน้ำของ P . amarus ละลายใน
DMSO และเพิ่มไปยังที่ใส่แผ่น ( 20 L )
ให้ความเข้มข้นสุดท้าย 250 กรัม / มล. แผ่น
เหล่านี้รวม rajeshkumar et al . วารสารของ ethnopharmacology 81 ( 2002 ) 17 – 19
22เป็นเชื้อที่ 27 ° C เป็นเวลา 72 และ 96 ชั่วโมงในตอนท้ายของ
ฟักตัวโซนของการบันทึก
สำหรับแต่ละการทดสอบสิ่งมีชีวิต . การควบคุมถูกเตรียมโดย
เพิ่ม DMSO ( 20 L ) ใส่จาน ( ชาง et al . ,
1995 ; Roth et al . , 1998 ) .
2.6 การกำหนด cdc25 แต่อย่างใด และพบว่าสามารถยับยั้ง cdc2 ใบ
ประมาณ 20 l
gst-cdc25a ผสมกับโปรตีน20 L 100 มม. บัตรแข็งในบัฟเฟอร์ความเข้มข้นของบริษัท A ที่แตกต่างกัน
P amarus สารสกัดละลาย
ทริสบัฟเฟอร์ ( 140 L ) , 96 ดี microtitration แผ่น แผ่นมี preincubated
37 ° C เป็นเวลา 15 นาที ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย wellwarm
denley 1 ตู้อบ (
ถูกริเริ่มโดยนอกเหนือจาก 20 ลิตรใบ p-nitrophenylphosphate
500 มม. ( p-npp )
หลังจาก 60 นาทีบ่มที่ 37 ° C ค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 nm วัด
ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย biorad คนอ่าน ค่าว่าง ( ไม่มี
gst-cdc25a โปรตีนแต่ 10 บ่มมินกับพื้นผิวได้โดยอัตโนมัติ substracted ( )
baratte et al . , 1992 ) cdc2 kinase assay ถูกยับยั้งโดย
) ช่างเทคนิค
antitumour และกิจกรรมการของสารสกัด amarus
ประกาศชื่อ rajeshkumar , ความสุข , กีริจา kuttan , ชิ้นส่วน ramsewak B ,
muraleedharan กรัมแนร์ B , ramadasan kuttan A *
มีมาลาวิจัยศูนย์มะเร็ง , Thrissur , เกรละ , 680 - 553 , อินเดีย
b bioacti E ผลิตภัณฑ์ธรรมชาติในห้องปฏิบัติการภาควิชาพืชสวน และศูนย์ความปลอดภัยและพิษวิทยาทางอาหารแห่งชาติ ,
รัฐมิชิแกนยูนิ ersity East Lansing , มิ 48824 สหรัฐอเมริกา 10 ธันวาคม 2544
ยอมรับสารสกัดน้ำนามธรรม
ของสาร amarus ( หน้า amarus ) มีกิจกรรมการรักษาที่มีศักยภาพต่อ 20 มธิลคอแลนทรีน
( 20-mc ) เกิดการพัฒนาโคมาและเพิ่มการอยู่รอดของการรับรู้หนูสารสกัดจาก
การบริหาร ( p.o ) พบการยืดอายุขัยของดอลตันต่อมน้ำเหลืองในท้อง ( สํา ) และมะเร็ง Ehrlich ascites
( EAC ) เรืองหนู และลดปริมาณของการปลูกถ่ายเนื้องอกที่เป็นของแข็ง สารยับยั้งการ hydroxylase : p-450 , เอนไซม์ ความเข้มข้นที่จำเป็นสำหรับ 50% ยับยั้ง ic50 ) พบว่าเป็น 540 g / ml พบว่าสารสกัดยับยั้ง
ชนิดของดีเอ็นเอ 2 และเซเร isiae กลายพันธุ์เซลล์วัฒนธรรมและยับยั้งเอนไซม์ไทโรซิเนสซึ่งเซลล์รอบ cdc25
ฟอสฟาเตส ( ic50 – 25 g / ml ) และกิจกรรมของ antitumour ต้านหน้า amarus อาจเกี่ยวข้องกับการยับยั้งการสลาย
ของสารก่อมะเร็ง รวมทั้งการยับยั้งควบคุมวัฏจักรเซลล์และซ่อมแซมดีเอ็นเอ © 2545 เผยแพร่โดยไอร์แลนด์วิทยาศาสตร์
สจำกัดคำสำคัญ : สาร amarus ; ชนิด 2 จำนวนการทำงานของแคชวัตถุ ; ควบคุมวัฏจักรเซลล์ antitumour ยา cdc25 ไทโรซิเนสฟอสฟาเตส
www.elsevier . com / ค้นหา / jethpharm
1 บทนำ
ความหลากหลายของสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพและสารอนุพันธ์
ได้รับการแสดงเพื่อยับยั้งมะเร็งในระบบที่เกี่ยวข้องกับจำนวนของการทดลอง
และการส่งเสริมความก้าวหน้า ( โฮ et al . , 1994 ; Huang et
al . ,1994 ) พืชประกอบด้วยมากมายปริมาณของสารเหล่านี้
และมีเสมอถูกแสดงเป็น
ที่เกี่ยวข้องกับความเสี่ยงต่ำของโรคมะเร็งที่เกือบทุก
เว็บไซต์ ( Steinmetz และพอตเตอร์ , 1991 ) ความพยายาม ดังนั้น เพื่อให้ศึกษาธรรมชาติที่เกิดขึ้น
anticarcinogens ซึ่งจะป้องกันไม่ให้ ช้า และ / หรือย้อนกลับ
มะเร็ง induction และการพัฒนาตามมาของมัน ( ชวง et al . , 2000 ) .
สาร amarus schum และ thonn ( 1 สาร
niruri ) เป็นสมุนไพรที่ใช้กันอย่างแพร่หลายขนาดเล็กเขตร้อนเป็น
เจ้าหน้าที่ต่อต้านไวรัส ( thyagarajan et al . , 1988 ; de et al . ,
1990 ; jayram et al . , 1997 ) หน้า amarus สกัดได้
แสดงการยับยั้ง DNA polymerase ของไวรัสตับอักเสบบี และโรคตับอักเสบ ไวรัส (
venkateswaran et al . , 1987 ; Blumberg et al . , 1990 ) และลงควบคุมโรคไวรัสตับอักเสบ
การถอดความของไวรัสและการแปล ( ลี et
al . , 1996 ; โอ๊ต et al . , 1997 ) สารสกัดจากเซลล์และยับยั้งการเจริญซึ่งพลิกกลับได้
เพาะเลี้ยงเซลล์ตับสร้างการผลิตในสาย hepa2 ( Yeh et
al . , 1993 ) และยับยั้งการปล่อยของ HBsAg ใน Alexander
ไพรที มนุษย์ได้มา
เซลล์มะเร็งตับ ( jayram บรรทัด และ thyagarajan , 1996 ) P .
เมื่อเร็วๆ นี้สารสกัดจาก amarus บริหารได้ถูกแสดงเพื่อขัดขวางการพัฒนาของตับบวม
n-nitrosodiethylamine ในหนูและเพิ่มอายุขัยของสัตว์ (
มะเร็งตับที่ความสุขและ
kuttan , 1998 ; rajeshkumar และ kuttan , 2000 ) ลิกแนน
เช่น phyllanthin hypophyllanthin ฟลาโวนอยด์เควอซิติน , ,
hydrolysable ellagitannins ตรากาลิน , , และแทนนินจะแสดงเป็นปัจจุบันในโรงงานนี้ บางส่วนของ
สารเหล่านี้ได้รับการแสดงที่จะมีกิจกรรมสำคัญ
ต่อต้านการทดลองมะเร็ง
สืบสวนปัจจุบันมุ่งเน้นความสนใจใน antitumour
และกิจกรรมการของหน้า amarus สกัด
ในหนู นอกจากนี้ ผลของสารสกัดหน้า amarus
* ที่สอดคล้องกันของผู้เขียน โทรสาร : 91-487-211020 .
e - mail address : ผู้อำนวยการ @ มาลา .ดอทคอม ( R . kuttan )
0378-8741 / 02 / $ - ดูเรื่องหน้า© 2545 ตีพิมพ์โดยเอลส์จำกัดไอร์แลนด์วิทยาศาสตร์
ปี่ : s0378-8741 ( 01 ) 00419-6
18 รวม rajeshkumar et al . วารสารของ ethnopharmacology 81 ( 2002 ) 17 – 22
p-450 เอนไซม์ topoisomerases ดีเอ็นเอและควบคุมวงจร
เซลล์ได้ถูกศึกษา .
2 วัสดุและวิธีการ
ชายชาวสวิส เผือกหนู ( 10 สัปดาห์เก่า 20 – 25 g )
ซื้อจากสัตวแพทย์มหาวิทยาลัย mannuthy
, Kerala , อินเดีย , และเก็บไว้ในคณะสัตว์ของเราอย่างน้อย 1
1 สัปดาห์ก่อนใช้ สัตว์ที่ถูกเลี้ยงด้วยอาหารเม็ด และดื่มสูตรมาตรฐาน
โฆษณาน้ำ เดลตั้น
ต่อมน้ำเหลืองบวมน้ำ ( สํา ) และมะเร็ง Ehrlich ascites
( EAC ) เนื้องอกเซลล์ได้จาก
สถาบันมะเร็ง เจนไน , อินเดียและขยายพันธุ์
เป็น transplantable ท้องมานเนื้องอกในหนูเผือก หญิงชาวสวิส
.
20-mc ซื้อมาจาก Sigma เคมี . St .
หลุยส์ , USA ลดพยุหยาตรา
ฟอสเฟต ( ลดลง nadph ) ซื้อ
จากห้องปฏิบัติการ วิจัย Sisco มุมไบ , อินเดีย ทั้งหมดอื่น ๆของสารเคมีที่ใช้วิเคราะห์
3 เกรด สกัดเข้มข้นน้ำส่วนทางอากาศรับรอง
Pamarus ถูกจัดโดย ดร. SS คานธี ,
lyka งานวิจัยห้องปฏิบัติการ , มุมไบ , อินเดีย สารสกัดจาก
ถูกระงับในน้ำกลั่นและใช้เป็นยา
2.1 . การศึกษาผลหน้า amarus ในท้อง
เซลล์มะเร็งเนื้องอก ( สําหรับ / EAC ) ลมจากช่องท้อง
โพรงของหนูล้างด้วยน้ำเกลือและ
1 × 106 เนื้องอกได้รับพบ
สี่กลุ่มของสัตว์ ( 7 ) / กลุ่ม ) สัตว์
ในกลุ่มผมได้โดยไม่ต้องหน้า amarus รักษา สัตว์ในกลุ่มที่ได้รับ ii-iv
P
amarus สารสกัดที่ความเข้มข้น 60 , 300 , 1 , 500 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมน้ำหนักตัว ( p.o
) เท่ากับ 24 ชั่วโมงหลังจากการใช้อย่างต่อเนื่องทุกวันและ
10 วัน สัตว์ที่พบในการพัฒนาท้องบวม
และเสียชีวิตเนื่องจากภาระเนื้องอกถูกบันทึกไว้ เพิ่มขึ้นในช่วงชีวิต
( ILS ) ) ของกลุ่มคือ คำนวณโดยใช้สูตรและ ILS = (
, T − C / C × 100 ที่ ' T '
' c ' หมายถึงการอยู่รอดของการรักษาและเมาส์ควบคุม
ตามลำดับ ( จอย et al . , 2000 ) .
2.2 . การศึกษาผล amarus บนหน้าแข็งหลัง
หนึ่งล้าน ดีแอลเอ / EAC เซลล์ถูกฉีดเพื่อ
ขาหลังขวาของชายชาวสวิส เผือกหนู ( กลุ่ม ) 4
7 หนู / กลุ่ม ) สัตว์ในกลุ่มที่ 2 – 4 P .
amarus ได้รับสารสกัดที่ความเข้มข้น 60 , 300 , 1 , 500
มิลลิกรัมต่อน้ำหนักตัว 1 กิโลกรัม ( p.o ) เท่ากับ 24 ชั่วโมงหลังจากการงอก
และต่อเนื่อง 10 วัน สัตว์
ในกลุ่มฉันได้เก็บรักษาควบคุมซึ่งได้รับ
ยานพาหนะ ขนาดของเนื้องอกได้ทุก
วันที่ห้า ใช้เวอร์เนียคาลิเปอร์และปริมาณคำนวณ
ใช้สูตร V = 4 / 3 R1 2 × R2 ที่ v
กําหนด R1 R2 เป็นตัวแทนและรัศมีเนื้องอกที่
2 ลำที่แตกต่างกัน .
2.3 การศึกษาผลของสารสกัดจากหน้า amarus
ในโคมาและ 20 - MC
ชายหนูสายพันธุ์ Balb / C ( 6 ) 8-weeks-old 20 – 25 g )
) เพื่อใช้ในการศึกษา ผมถูกโกนจากด้านหลัง
ของหนูสัตว์ทั้งหมดถูกทดสอบด้วย
dose เดียวของ 20-mc ( 200 กรัม / 0.1ml DMSO / เมาส์ )
subcutaneously ข้างหลัง . ปริมาณนี้มี
ถูกแสดงพัฒนาผลิตโคมาในหนู
8 – 12 สัปดาห์ ( จอย et al . , 2000 ) หลังจากนั้น สัตว์
สุ่มออกเป็น 3 กลุ่ม ( กลุ่มละ 20 (
) สัตว์ในกลุ่มฉันได้โดยไม่ต้องยาเสพติด
รักษาสัตว์ในกลุ่มที่ 2 และ 3 ศึกษา
ปากเปล่ากับหน้า amarus 150 และ 750 มก. / กก. น้ำหนักตัว
ตามลำดับ สามสัปดาห์ เป็นเวลา 8 สัปดาห์ โคมา
การพัฒนาตลอดจนความอยู่รอดของสัตว์สังเกตได้ถึง 180 วัน
.
2.4 . การใช้ hydroxylase ยับยั้งการกระทำโดย hydroxylase
3
วิธีอธิบายโดยโชคดี ( โชคดี 1971 ) เอนไซม์
นำในหนูโดยการบริหารช่องปากของ
ฟีโนบาร์บิทอล ( 80 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ) เป็นเวลา 5 วัน สัตว์ที่ถูกสังเวยวันถือศีลอดด้วย
ยาชายาสลบและตับถูกเอาออก 10 % อนเตรียม
ถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบ ความเข้มข้นต่าง ๆ ของ
สารสกัดเพิ่มปฏิกิริยาผสมบ่ม
2 H ที่ 37 องศา พาราอมิโนฟีนอลที่เกิดขึ้นในระหว่าง
เอนไซม์ในการทำปฏิกิริยากับด่างฟีนอลในสื่อในรูปแบบสีฟ้าสี
สินค้า ซึ่งเป็นวัดที่ 630 นาโนเมตร เปอร์เซ็นต์การยับยั้งการคำนวณโดยการเปรียบเทียบ hydroxylase
ของการควบคุมและดูดซึมของยารักษาตัวอย่าง
2.5 ชนิด I และ II ) และยับยั้ง isiae เซลล์กลายพันธุ์ส
วัฒนธรรม Jn 394 ,ชุมทางชุมทาง 394t-1 394t-2-5 และนำมาใช้ใหม่
. สิ่งมีชีวิตถูกจัดโดย ดร. จอน nistiss
โรงพยาบาลวิจัยเด็กเซนต์จูดเมมฟิส
เทนเนสซี ประเทศสหรัฐอเมริกา และเพาะเลี้ยงในจานเลี้ยงเชื้อที่มี
ypda ขนาดกลาง ( 20 ml . ) เซลล์จากเต็มที่
โตจานของแต่ละสิ่งมีชีวิตที่ถูกระงับในสารละลายเกลือ
( 10 มล. ) และเจือจางให้ได้ 5 × 106
CFU ต่อมิลลิลิตรประมาณ 50 ลิตรช่วงล่างนี้แล้ว
เคยฉีดวัคซีนจานเลี้ยงเชื้อที่มีสื่อ ypda และได้รับอนุญาตให้อากาศแห้งในเครื่องดูดควันสำหรับการไหลแบบราบเรียบ 20
มิน สารสกัดน้ำของ P . amarus ละลายใน
DMSO และเพิ่มไปยังที่ใส่แผ่น ( 20 L )
ให้ความเข้มข้นสุดท้าย 250 กรัม / มล. แผ่น
เหล่านี้รวม rajeshkumar et al . วารสารของ ethnopharmacology 81 ( 2002 ) 17 – 19
22เป็นเชื้อที่ 27 ° C เป็นเวลา 72 และ 96 ชั่วโมงในตอนท้ายของ
ฟักตัวโซนของการบันทึก
สำหรับแต่ละการทดสอบสิ่งมีชีวิต . การควบคุมถูกเตรียมโดย
เพิ่ม DMSO ( 20 L ) ใส่จาน ( ชาง et al . ,
1995 ; Roth et al . , 1998 ) .
2.6 การกำหนด cdc25 แต่อย่างใด และพบว่าสามารถยับยั้ง cdc2 ใบ
ประมาณ 20 l
gst-cdc25a ผสมกับโปรตีน20 L 100 มม. บัตรแข็งในบัฟเฟอร์ความเข้มข้นของบริษัท A ที่แตกต่างกัน
P amarus สารสกัดละลาย
ทริสบัฟเฟอร์ ( 140 L ) , 96 ดี microtitration แผ่น แผ่นมี preincubated
37 ° C เป็นเวลา 15 นาที ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย wellwarm
denley 1 ตู้อบ (
ถูกริเริ่มโดยนอกเหนือจาก 20 ลิตรใบ p-nitrophenylphosphate
500 มม. ( p-npp )
หลังจาก 60 นาทีบ่มที่ 37 ° C ค่าการดูดกลืนแสงที่ 405 nm วัด
ในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย biorad คนอ่าน ค่าว่าง ( ไม่มี
gst-cdc25a โปรตีนแต่ 10 บ่มมินกับพื้นผิวได้โดยอัตโนมัติ substracted ( )
baratte et al . , 1992 ) cdc2 kinase assay ถูกยับยั้งโดย
) ช่างเทคนิค
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- I check
- เดี๋ยวจะนอน
- Handel
- 泰國國民在賣嗎？
- ผมเป็นเพื่อนที่ดี
- Sepang, 8 March 2014: The families of a
- กราบเรียน ฝ่าบาท ฉันอยากให้ท่านมาเยือนเ
- เพียงคุณลงชื่อในสัญญาฉบับนี้
- แปดร้อยเก้าสิบหกถ้วน
- สวัสดีท่านสุภาพบุรุษและสุภาพสตรี ยินดีต้
- But I made
- Mono.Zeroconf provides a unified API for
- Buenos aires: Carlos Tevez holds out no
- รบกวนแค่นี้
- แต่คุณเหมือนคนญี่ปุ่นหรือจีนเลย
- ฉันเพิ่งเจอเมื่อสองวันที่ผ่านมา
- Dear, Your Highness, I want you to come
- これはタイに新しいグループができるフラグ・・・か
- ฉันจะคุยกับคนที่เปิดเผยเท่านั้น
- ดารา
- ค่าใช้จ่ายของบริษัทโดยส่วนใหญ่จะเป็นค่าใ
- able to establish that
- ฉันใช้
- ตอนไหนก็ได้แล้วแต่คุณ
