Fig. 1 shows the chromatographic pr

Fig. 1 shows the chromatographic profile of T. cambridgei venom separated in a semi-preparative column. More than 60 different components are partially distinguishable in this chromatogram ( Fig. 1a). In order to easily assess possible functions of these components, the binding and displacement experiments using 125I-NTX and mouse brain synaptosome preparations [10] were used as a starting assay. The first visible component, eluting at 21 min in the linear gradient from 5 to 60% acetonitrile for 90 min, corresponded to a peptide that displaced the binding of 125I-NTX to brain synaptosomal membranes. The samples corresponding to this elution time from 10 independent runs were pooled and further applied to an analytical C18 reverse-phase column, given a major component, labeled with an asterisk in the inset of Fig. 1a. This peptide was used for sequence determination and additional functional analysis. The pure component corresponds to about 0.5% of the soluble venom. The automatic amino acid sequence of the native peptide gave an unique sequence up to residue 22, with blank spaces, possibly corresponding to cysteinyl residues. A sample of the peptide was reduced and alkylated in situ with N-buthylphosphine and acrylamide, following the Beckman manufacturer instructions, and sequenced. The alkylated peptide gave unequivocal results for the first 22 amino acid residues, as indicated in Fig. 1B. The last residue Tyr23 was surmised based on molecular mass determination. The experimental value obtained for the native peptide was 2446.4, very closely to the theoretical monoisotopic mass of 2446.2 for the sequence shown in Fig. 1B. The sum of the masses of the first 22 amino acids was 2283.06, thus the missing amino acid should have a mass of 163, corresponding exactly to the mass of tyrosine. In the event that a dipeptide could be missing, instead of tyrosine, the closest approximation would be glycine plus cysteine, with a mass of 160, much farther apart from the experimental value found. Furthermore, the molecular mass of the native peptide (2446.4), as obtained from MALDI-TOF, was found to be 2791 after reduction and alkylation of the sample with iodoacetamide (mass +57 per residue), showing that the sample contains six half-cystines, already found by direct Edman degradation analysis. Thus, the peptide Tc1 (from T. cambridgei, toxin 1), is a 23 amino acid residue peptide, that contains three disulfide bridges. Comparative analysis of the amino acid sequence of this peptide, with those from the literature, shows that it has a very low similarity to all the other known [3], and requires the designation of a new subfamily of K+-channel blocking scorpion peptides. The introduction of many gaps in Fig. 1C is needed in order to approach Tc1 to a consensus sequence, when compared to the other 12 pre-existing subfamilies of peptides. Additional structural considerations that support our new classification ( Fig. 1C) will be discussed at the end of this section.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Fig. 1 แสดงโพรไฟล์ chromatographic ของพิษ cambridgei ต.คั่นในคอลัมน์กึ่ง preparative ส่วนประกอบต่าง ๆ มากกว่า 60 จะแตกต่างบางส่วนในนี้ chromatogram (Fig. 1a) เพื่อที่จะได้ประเมินฟังก์ชันไปต่อ รวม และทดลองย้ายใช้สมอง 125I NTX และเมาส์ synaptosome เตรียม [10] ถูกใช้เป็นวิเคราะห์เริ่มต้น แรกเห็นส่วนประกอบ eluting ที่ 21 นาทีในระดับสีเชิงเส้นจาก 5 ถึง 60% acetonitrile สำหรับ 90 นาที corresponded การเพปไทด์ที่พลัดถิ่นรวม NTX 125I ไปสมองเยื่อหุ้ม synaptosomal ตัวอย่างที่สอดคล้องกับเวลานี้ elution จากทำงานอิสระ 10 ถูกทางถูกพู และเพิ่มเติม กับการวิเคราะห์ C18 เฟสกลับคอลัมน์ กำหนดส่วนประกอบหลัก ป้ายเครื่องหมายดอกจันในแทรกของ Fig. 1a เพปไทด์นี้ถูกใช้สำหรับกำหนดลำดับและวิเคราะห์การทำงานเพิ่มเติม ส่วนประกอบบริสุทธิ์ตรงกับพิษละลายน้ำได้ประมาณ 0.5% ลำดับกรดอะมิโนอัตโนมัติของเพปไทด์ดั้งเดิมให้เป็นลำดับเฉพาะขึ้นอยู่กับสารตกค้าง 22 มีช่องว่าง อาจจะสอดคล้องกับ cysteinyl ตก ตัวอย่างของเพปไทด์ถูกลดลง และ alkylated ใน situ N buthylphosphine และอะคริลาไมด์ ตามคำแนะนำผู้ผลิต Beckman และตามลำดับ เพปไทด์ alkylated ให้ผลลัพธ์ unequivocal สำหรับกรดอะมิโน 22 ก่อนตกค้าง ตามที่ระบุใน Fig. 1B สารตกค้างล่าสุดถูก surmised Tyr23 ตามกำหนดมวลโมเลกุล ค่าทดลองได้เพปไทด์ดั้งเดิมถูก 2446.4 อย่างใกล้ชิดเพื่อมวลชน monoisotopic ทฤษฎีของ 2446.2 ในลำดับที่แสดงใน Fig. 1B ผลรวมของมวลของกรดอะมิโน 22 ก่อนถูก 2283.06 ดังนั้น กรดอะมิโนไม่ควรมีมวลของ 163 ตรงกับมวลของ tyrosine ในกรณีที่มี dipeptide อาจขาดหายไป แทนของ tyrosine ประมาณใกล้จะ glycine และ cysteine กับมวลของ 160 มากอยู่ห่างจากค่าทดลองพบ นอกจากนี้ มีมวลโมเลกุลของเพปไทด์ดั้งเดิม (2446.4), ตามที่ได้รับจาก MALDI TOF พบจะ 2791 หลังลด และ alkylation ของอย่างกับ iodoacetamide (มวล +57 ต่อสารตกค้าง), แสดงว่า ตัวอย่างประกอบด้วย 6 ครึ่ง-cystines พบแล้ว โดยการวิเคราะห์การลดประสิทธิภาพของ Edman โดยตรง ดังนั้น เพปไทด์ Tc1 (จากต. cambridgei พิษ 1), คือ เป็นกรดอะมิโน 23 ตกค้างเพปไทด์ ที่ประกอบด้วยสามสะพานไดซัลไฟด์ วิเคราะห์เปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโนของเพปไทด์นี้ กับจากวรรณคดี แสดงว่า มีความคล้ายคลึงกันมากกับทั้งหมดเรียกว่า [3], และต้องกำหนด subfamily ใหม่ของ K + -ช่องบล็อกเปปไทด์แมงป่อง แนะนำของ Fig. 1C หลายช่องต้องหา Tc1 ลำดับมติ เมื่อเทียบกับที่อื่น ๆ 12 เตรียม subfamilies ของเปปไทด์ เพิ่มเติมพิจารณาโครงสร้างที่สนับสนุนการจัดประเภทใหม่ของเรา (Fig. 1C) จะกล่าวถึงในตอนท้ายของส่วนนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

มะเดื่อ. 1 แสดงรายละเอียดของสารพิษที cambridgei แยกออกจากกันในคอลัมน์กึ่งเตรียม มากกว่า 60 ชิ้นส่วนที่แตกต่างกันบางส่วนที่แตกต่างใน chromatogram นี้ (รูป. 1a) ในการสั่งซื้อเพื่อให้ง่ายต่อการประเมินการทำงานเป็นไปได้ขององค์ประกอบเหล่านี้ในการทดลองมีผลผูกพันและการกำจัดโดยใช้ 125i-NTX และสมองเมาส์เตรียม synaptosome [10] ถูกนำมาใช้เป็นทดสอบเริ่มต้น องค์ประกอบแรกที่มองเห็น eluting 21 นาทีในการไล่ระดับสีเชิงเส้น 5-60% acetonitrile 90 นาทีตรงกับเปปไทด์ที่ย้ายผูกพันของ 125i-NTX ไปยังสมองเยื่อ synaptosomal กลุ่มตัวอย่างที่สอดคล้องกับเวลาชะนี้ตั้งแต่วันที่ 10 วิ่งอิสระที่ได้รวบรวมและนำไปใช้ต่อไปยังการวิเคราะห์ C18 คอลัมน์เฟสย้อนกลับได้รับเป็นองค์ประกอบหลักป้ายที่มีเครื่องหมายสิ่งที่ใส่เข้าไปในของรูป 1a เปปไทด์นี้ถูกใช้สำหรับการกำหนดลำดับและการวิเคราะห์การทำงานเพิ่มเติม องค์ประกอบบริสุทธิ์สอดคล้องกับประมาณ 0.5% ของพิษที่ละลายน้ำได้ ลำดับกรดอะมิโนเปปไทด์อัตโนมัติของพื้นเมืองให้ลำดับที่ไม่ซ้ำกันถึง 22 สารตกค้างที่มีช่องว่างอาจจะสอดคล้องกับ cysteinyl ตกค้าง ตัวอย่างของเปปไทด์ที่ถูกลดลงและ alkylated ในแหล่งกำเนิดกับ N-buthylphosphine และริลาไมด์ตามคำแนะนำของผู้ผลิตเบคค์และติดใจ เปปไทด์ alkylated ให้ผลชัดเจนเป็นครั้งแรก 22 กรดอะมิโนตามที่ระบุไว้ในรูป 1B ที่เหลือที่ผ่านมาได้รับการสันนิษฐาน Tyr23 ขึ้นอยู่กับความมุ่งมั่นของมวลโมเลกุล มูลค่าการทดลองที่ได้รับสำหรับเปปไทด์พื้นเมืองเป็น 2,446.4 มากอ​​ย่างใกล้ชิดกับมวลของทฤษฎี monoisotopic 2,446.2 ลำดับที่แสดงในรูป 1B ผลรวมของฝูงแรก 22 กรดอะมิโนเป็น 2,283.06 จึงกรดอะมิโนที่ขาดหายไปควรจะมีมวลของ 163 สอดคล้องตรงกับมวลของซายน์ ในกรณีที่ dipeptide ที่อาจจะหายไปแทนซายน์ประมาณใกล้เคียงที่สุดที่จะ glycine cysteine​​ บวกกับมวลของ 160 มากไกลออกไปนอกเหนือจากการทดลองพบว่าค่า นอกจากนี้มวลโมเลกุลของเปปไทด์พื้นเมือง (2,446.4) ในฐานะที่ได้รับจาก MALDI-TOF, ถูกพบว่าเป็น 2791 หลังจากที่ลดลงและ alkylation ของกลุ่มตัวอย่างที่มี iodoacetamide (+57 มวลต่อสารตกค้าง) แสดงให้เห็นว่ากลุ่มตัวอย่างมีหกครึ่ง cystines พบแล้วโดยการวิเคราะห์การย่อยสลาย Edman โดยตรง ดังนั้น TC1 เปปไทด์ (ตั้งแต่ T. cambridgei พิษ 1) เป็นเปปไทด์กรดอะมิโนที่เหลือ 23 ที่มีสามสะพานซัลไฟด์ การวิเคราะห์เปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโนเปปไทด์ของนี้กับผู้ที่มาจากวรรณกรรมแสดงให้เห็นว่ามันมีความคล้ายคลึงกันที่ต่ำมากเพื่อคนอื่น ๆ ที่รู้จักกัน [3] และต้องกำหนดอนุวงศ์ใหม่ของ K + แชลแนลการปิดกั้นเปปไทด์แมงป่อง การแนะนำของช่องว่างจำนวนมากในรูป 1C เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อที่จะเข้าใกล้ TC1 ลำดับฉันทามติเมื่อเทียบกับอีก 12 ครอบครัวที่มีอยู่ก่อนของเปปไทด์ การพิจารณาโครงสร้างเพิ่มเติมที่สนับสนุนการจัดหมวดหมู่ใหม่ของเรา (รูป. 1C) จะมีการหารือในตอนท้ายของส่วนนี้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รูปที่ 1 แสดงประวัติ และ ต. cambridgei พิษกึ่งเบื้องต้นแยกในคอลัมน์ มากกว่า 60 ส่วนประกอบที่แตกต่างกันจะแตกต่างบางส่วนในโครมานี้ ( รูปที่ 1A ) เพื่อที่จะได้ประเมินการทำงานเป็นไปได้ของส่วนประกอบเหล่านี้ มีผลผูกพันและการทดลองใช้ 125i-ntx และเมาส์ สมอง synaptosome เตรียม [ 10 ] ถูกใช้เป็นเริ่มต้นการทดสอบองค์ประกอบที่มองเห็นก่อน hexane ที่ 21 นาทีในลาดเชิงเส้นจาก 5 ถึง 60 % ไน 90 นาที สอดคล้องกับเปปไทด์ที่ถูกจับ 125i-ntx สมอง synaptosomal เยื่อ กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในครั้งนี้ จาก 10 วิ่งอิสระคือ pooled และประยุกต์เพิ่มเติมเพื่อวิเคราะห์ c18 กลับเฟสคอลัมน์ระบุส่วนประกอบหลักชื่อที่มีเครื่องหมายดอกจันในที่ใส่ของรูปที่ 1A เปปไทด์นี้ถูกใช้เพื่อกำหนดลำดับและการวิเคราะห์การทำงานเพิ่มเติม องค์ประกอบล้วนสอดคล้องกับประมาณ 0.5% ของพิษละลายน้ำได้ โดยลำดับกรดอะมิโนของเปปไทด์พื้นเมืองให้ลำดับเฉพาะถึงกาก 22 , ช่องว่าง , อาจจะเกี่ยวข้องกับ cysteinyl ตกค้างตัวอย่างของเพปไทด์จะลดลงและ alkylated ในแหล่งกำเนิดและมี n-buthylphosphine อะคริลาไมด์ ตามคำแนะนำผู้ผลิต เบคแมน และนี้ alkylated เปปไทด์ที่ให้ผลชัดเจน ครั้งแรก 22 กรดอะมิโนตกค้างตามที่ระบุในรูปที่ 1 บี กาก tyr23 สุดท้ายเป็น surmised จากการหามวลของโมเลกุลทดลองค่าได้สำหรับเปปไทด์พื้นเมือง 2446.4 ๆเพื่อมวล monoisotopic เชิงทฤษฎีของ 2446.2 ลำดับที่แสดงในรูปที่ 1 บี ผลรวมของมวลของแรก 22 กรดอะมิโนเป็น 2283.06 จึงขาดกรดอะมิโนควรมีมวล 163 ที่ตรงกับมวลของไทโรซีน . ในกรณีที่เป็นไดเพปไทด์จะหายไป แทนไทโรซีน ,ประมาณใกล้จะเป็นกรดอะมิโนไกลซีน บวกกับมวลของ 160 , ไกลนอกเหนือจากค่าทดลองพบว่า นอกจากนี้ มวลโมเลกุลของเปปไทด์พื้นเมือง ( 2446.4 ) ที่คำนวณได้จาก maldi-tof พบว่ามี 2791 หลังจากการลดและอัลคิเลชันของตัวอย่าง ( ร้อยละ 57 iodoacetamide มวลกาก ) , แสดงให้เห็นว่ากลุ่มตัวอย่างประกอบด้วย cystines หกครึ่ง ,ได้โดยตรง งูหัวกระโหลก การวิเคราะห์ ดังนั้น , เปปไทด์ tc1 ( จาก cambridgei , สารพิษ 1 ) คือ 23 กรดอะมิโนเปปไทด์ที่ประกอบด้วยไดสะพานสาม การวิเคราะห์เปรียบเทียบลำดับกรดอะมิโนของเปปไทด์นี้มีที่มาจากวรรณกรรมที่แสดงให้เห็นว่ามันมีความคล้ายคลึงกันน้อยมากที่จะทั้งหมดอื่น ๆที่รู้จักกัน [ 3 ]และใช้ชื่อของ subfamily ใหม่ของ K - ช่องกั้นแมงป่องเปปไทด์ เปิดช่องว่างมากมายในรูป 1C เป็นสิ่งจำเป็นเพื่อที่จะเข้าหา tc1 กับฉันทามติลำดับเมื่อเทียบกับอื่น ๆที่มีอยู่ 12 วงศ์ย่อยของเปปไทด์ ข้อควรพิจารณาเพิ่มเติมโครงสร้างที่สนับสนุนหมวดหมู่ใหม่ของเรา ( ภาพที่ 1c ) จะกล่าวถึงในตอนท้ายของมาตรานี้