Real-time polymerase chain reaction

Real-time polymerase chain reaction (PCR) allows rapid detection of Salmonella in frozen dairy products, but it might cause a false positive detection result because it might amplify DNA from dead target cells as well. In this study, Salmonella-free frozen ice cream was initially inoculated with heat-killed Salmonella Typhimurium cells and stored at −18°C. Bacterial DNA extracted from the sample was amplified using TaqMan probe-based real-time PCR targeting the invA gene. Our results indicated that DNA from the dead cells remained stable in frozen ice cream for at least 20 days, and could produce fluorescence signal for real-time PCR as well. To overcome this limitation, propidium monoazide (PMA) was combined with real-time PCR. PMA treatment can effectively prevent PCR amplification from heat-killed Salmonella cells in frozen ice cream. The PMA real-time PCR assay can selectively detect viable Salmonella at as low as 103 CFU/mL. Combining 18 hours of pre-enrichment with the assay allows for the detection of viable Salmonella at 100 CFU/mL and avoiding the false-positive result of dead cells. The PMA real-time PCR assay provides an alternative specifically for detection of viable Salmonella in ice cream. However, when the PMA real-time PCR assay was evaluated in ice cream subjected to frozen storage, it obviously underestimated the contamination situation of viable Salmonella, which might lead to a false negative result. According to this result, the use of enrichment prior to PMA real-time PCR analysis remains as the more appropriate approach.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรสแบบเรียลไทม์ (PCR) ให้ตรวจสอบอย่างรวดเร็วของระดับในนมแช่แข็ง แต่มันอาจทำให้ผลตรวจเป็นบวกเท็จเนื่องจากมันอาจขยายดีเอ็นเอจากคนตายเช่นเซลล์เป้าหมาย ในการศึกษานี้ ฟรีสายแช่ไอศกรีมเริ่ม inoculated เซลล์ Typhimurium สายฆ่าความร้อน และเก็บไว้ที่ −18 องศาเซลเซียส แบคทีเรียดีเอ็นเอที่สกัดจากตัวอย่างถูกขยายโดยใช้ TaqMan โดยโพรบแบบเรียลไทม์ PCR ยีน invA กำหนดเป้าหมาย ผลของเราระบุว่า ดีเอ็นเอจากเซลล์ตายยังคงมีเสถียรภาพในการแช่แข็งไอศกรีมน้อย 20 วัน และไม่สามารถผลิตสัญญาณ fluorescence สำหรับ PCR แบบเรียลไทม์เช่น เพื่อเอาชนะข้อจำกัดนี้ propidium monoazide (PMA) ถูกรวมกับ PCR แบบเรียลไทม์ PMA รักษาได้อย่างมีประสิทธิภาพสามารถป้องกันไม่ให้ขยาย PCR จากฆ่าความร้อนระดับเซลล์แช่แข็งไอศกรีม PMA แบบ real-time PCR assay สามารถเลือกตรวจหาซัลได้ที่ต่ำสุดที่ 103 CFU/mL รวม 18 ชั่วโมงก่อนโดดเด่นด้วยการทดสอบช่วยให้ตรวจได้ระดับ 100 CFU/mL และหลีกเลี่ยงผลบวกเท็จของเซลล์ที่ตายแล้ว PMA แบบ real-time PCR assay แสดงทางเลือกโดยเฉพาะสำหรับการตรวจหาระดับได้ในไอศกรีม อย่างไรก็ตาม เมื่อทดสอบ PMA แบบ real-time PCR ถูกประเมินในการแช่แข็งเก็บไอศกรีม มันชัด underestimated สถานการณ์การปนเปื้อนของซัลได้ ซึ่งอาจนำไปสู่ผลลบปลอม ตามนี้ ใช้เติมเต็มก่อนวิเคราะห์ PCR แบบเรียลไทม์ PMA ยังคงเป็นวิธีที่เหมาะสม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เวลาจริงวิธี polymerase chain reaction (PCR) ช่วยให้การตรวจสอบอย่างรวดเร็วของเชื้อ Salmonella ในการแช่แข็งผลิตภัณฑ์นม แต่มันอาจจะทำให้เกิดผลการตรวจสอบในเชิงบวกเท็จเพราะมันอาจขยายดีเอ็นเอจากเซลล์เป้าหมายที่ตายแล้วได้เป็นอย่างดี ในการศึกษานี้ Salmonella ฟรีไอศครีมแช่แข็งได้รับเชื้อครั้งแรกกับความร้อนฆ่าเชื้อ Salmonella Typhimurium เซลล์และเก็บไว้ที่ -18 องศาเซลเซียส ดีเอ็นเอที่สกัดจากแบคทีเรียกลุ่มตัวอย่างถูกขยายโดยใช้วิธี PCR TaqMan สอบสวนตามเวลาจริงกำหนดเป้​​าหมายยีน invA ผลของเราแสดงให้เห็นว่าดีเอ็นเอจากเซลล์ที่ตายแล้วยังคงมีเสถียรภาพในไอศครีมแช่แข็งเป็นเวลาอย่างน้อย 20 วันและสามารถผลิตสัญญาณเรืองแสงสำหรับ PCR เวลาจริงเช่นกัน เพื่อเอา​​ชนะข้อ จำกัด นี้ propidium monoazide (PMA) ได้ร่วมกับวิธี PCR ในเวลาจริง การรักษา PMA มีประสิทธิภาพสามารถป้องกันขยาย PCR จากความร้อนฆ่าเซลล์เชื้อ Salmonella ในไอศครีมแช่แข็ง PMA แบบ real-time PCR ทดสอบสามารถเลือกที่จะตรวจหาเชื้อ Salmonella ที่ทำงานที่ต่ำเป็น 103 โคโลนี / มิลลิลิตร รวม 18 ชั่วโมงของการเพิ่มปริมาณก่อนที่มีการทดสอบเพื่อช่วยให้การตรวจสอบของเชื้อ Salmonella ที่ทำงานได้ที่ 100 โคโลนี / มิลลิลิตรและหลีกเลี่ยงผลบวกเท็จของเซลล์ที่ตายแล้ว PMA แบบ real-time PCR ทดสอบให้ทางเลือกโดยเฉพาะสำหรับการตรวจหาเชื้อ Salmonella ทำงานได้ในไอศครีม แต่เมื่อ PMA แบบ real-time PCR ทดสอบได้รับการประเมินในไอศครีมภายใต้การจัดเก็บแช่แข็งก็เห็นได้ชัดว่าการประเมินสถานการณ์การปนเปื้อนของเชื้อ Salmonella ที่ทำงานได้ซึ่งอาจนำไปสู่​​ผลลบเท็จ ตามผลการใช้งานของการตกแต่งก่อนที่จะ PMA แบบ real-time PCR วิเคราะห์ยังคงเป็นวิธีการที่เหมาะสมมากขึ้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.i wish you a merry christmas today is not a cold shiver.