Hen’s Egg Chorioallantoic Membrane

Hen’s Egg Chorioallantoic Membrane (HET-CAM) test
Chicken embryos have been widely used as an alternative to the in vivo ocular irritation test. For this test, fresh fertile Leghorn eggs weighing 50–60 g were placed in an automatic rotation incubator and kept at 37.5 ± 0.5 ◦C with relative humidity of 62.5 ± 7.5% during 10 days. On the tenth day, the egg shell around the air chamber was removed using an odontological saw, exposing the shell membrane that was moistened with saline solution 0.9%. With the aid of tweezers the shell membrane was removed exposing the chorioallantoic membrane (CAM). Visual analysis was performed to verify if the CAM was suitable to the test then 300 l of each formulation was placed on the CAM surface. After 20 s, the formulation was removed with saline solution. The CAM was observed under a magnifying glass for 5 mintodetermine the incidence of any irritant effects in the CAM blood vessels (hyperemia, hemorrhage or coagulation) (Luepke and Kemper, 1986; Worth and Balls, 2001; Liebsch and Spielman,2002). The irritant effects were classifiedby scores (1, 3, 5, 7, or 9) according to the time they were observed:less than 30 s (hyperemia: 5; hemorrhage: 7; clotformation/opacity: 9); between 30 and 120 s (hyperemia: 3;hemorrhage: 5; clotformation/opacity:7); or between 120 and 300 s (hyperemia: 1; hemorrhage: 3; clot formation/opacity: 5). If an effect was not observed after 5 min, it was scored as zero.
Each formulation was classified according to the scores mean value of four eggs: 0–4.99 corresponding to non-irritant/slightly irritant (NOI/SLI); 5.00–8.99 corresponding to moderately irritant (MOI); and 9.00–21.00 corresponding to severely irritant (SEI). As a negative control four eggs were submitted to the same procedure, but no formulation was added.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แม่ไก่ไข่ chorioallantoic เมมเบรน ( het-cam ) ทดสอบไก่ตัวที่ใช้อย่างแพร่หลายเป็นทางเลือกให้ในร่างกายตาระคายเคือง ทดสอบ สำหรับการทดสอบนี้ สดอุดมสมบูรณ์เล็กฮอร์นไข่หนัก 50 – 60 กรัม อยู่ในตู้อบหมุนอัตโนมัติและเก็บไว้ที่ 37.5 ± 0.5 ◦องศาเซลเซียส ความชื้นสัมพัทธ์ 62.5 ± 7.5% ในช่วง 10 วัน ใน สิบวัน เปลือกไข่รอบอากาศห้องถูกลบออกโดยใช้เห็น odontological เผยเปลือกเยื่อที่ชุ่มด้วยน้ำเกลือ 0.9% ด้วยความช่วยเหลือของแหนบเปลือกเยื่อเมมเบรนถูกเปิดเผย chorioallantoic ( CAM ) การวิเคราะห์ภาพถูกดำเนินการเพื่อตรวจสอบว่าแคมเหมาะสมที่จะทดสอบแล้ว 300 ลิตรของแต่ละสูตรที่ถูกวางไว้บนพื้นผิวลูกเบี้ยว หลังจาก 20 วินาที ที่กำหนดออกด้วยน้ำเกลือ ลูกเบี้ยวพบว่าภายใต้แว่นขยาย 5 mintodetermine เกิดระคายเคืองใด ๆผลในแคมหลอดเลือด ( เอนไซม์ nNOS การตกเลือดหรือตกตะกอน , ) ( luepke และเคมเปอร์ , 1986 ; มูลค่าและลูก , 2001 ; liebsch และ spielman , 2002 ) ผลทำให้ระคายเคืองได้ classifiedby คะแนน ( 1 , 3 , 5 , 7 หรือ 9 ) ตามเวลาที่พวกเขาพบ : น้อยกว่า 30 วินาที ( เอนไซม์ nNOS : 5 ; เมื่อ 7 clotformation / ความทึบแสง : 9 ) ; ระหว่าง 30 และ 120 ( เอนไซม์ nNOS : 3 ; เลือดออก : 5 ; clotformation / ความโปร่งแสง : 7 ) ; หรือระหว่าง 120 และ 300 S ( เอนไซม์ nNOS : 1 ; 3 ; เมื่อลิ่มเลือดก่อตัว / ความทึบแสง : 5 ) ถ้าผลไม่ได้สังเกตหลังจาก 5 นาที จะได้คะแนนเป็น 0แต่ละสูตรก็แบ่งตามคะแนนค่าเฉลี่ยสี่ไข่ : 0 – 10 ที่ไม่ระคายเคือง / ระคายเคืองเล็กน้อย ( น้อย / ลดน้ำหนัก ) ; 5.00 – 8.99 ที่ระคายเคืองปานกลาง ( MOI ) ; และ 9.00 – 21.00 ที่ระคายเคืองอย่างรุนแรง ( SEI ) เป็นชุดควบคุมลบสี่ไข่ที่ถูกส่งไปยังกระบวนการเดียวกัน แต่ไม่มีสูตรเพิ่ม