The intracellular GSH concentration

The intracellular GSH concentration was measured by endpoint spectrophotometric titration on a Jasco V/550 spectrophotometer (JASCO, Cremella, Italy) using the 5,5′-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB, Ellman's reagent), as previously described [22]. Briefly, treated and untreated cells were lysed by freezing and thawing in 100 mM sodium phosphate buffer (PBS) pH 7.5, containing 5 mM EDTA, and after centrifugation at 16,000 rpm for 10 minutes, total protein concentration was determined by using Bradford method. The supernatants were de-proteinized with 5% trichloroacetic acid. For GSH measurement, acidified clear supernatants were neutralized and buffered at pH 7.4 with 200 mM K2HPO4, pH 7.5. The reaction was then started by the addition of 60 µM DTNB, and increase in absorbance at 412 nm was measured until no variation in absorbance was evident. The amount of total GSH was determined by comparison with GSH standard curve.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ความเข้มข้นของ GSH intracellular ถูกวัด ด้วยการไทเทรต spectrophotometric ปลายบน Jasco V/550 เครื่องทดสอบกรดด่าง (JASCO, Cremella อิตาลี) ใช้ 5, 5′-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB รีเอเจนต์ของ Ellman), อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [22] ถือว่าสั้น ๆ และเซลล์ที่ไม่ถูกรักษาถูก lysed โดยการแช่แข็ง และ thawing ใน 100 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS) pH 7.5 ประกอบด้วย 5 mM EDTA และหลังจาก centrifugation ที่ 16000 rpm 10 นาที กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมด โดยใช้วิธีแบรดฟอร์ด Supernatants ถูกยกเลิก proteinized กรด trichloroacetic 5% สำหรับวัด GSH, supernatants acidified ชัดเจนถูก neutralized และบัฟเฟอร์ pH 7.4 กับ 200 mM K2HPO4, pH 7.5 ในแต่ ปฏิกิริยาเริ่มต้นแล้วด้านนอก 60 µM DTNB และเพิ่มใน absorbance ที่ 412 nm ที่วัดจนกว่าจะไม่เปลี่ยนแปลงใน absorbance ไม่ชัด กำหนดจำนวนรวม GSH by comparison with GSH โค้งมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

GSH เข้มข้นภายในเซลล์โดยวัดจากจุดสิ้นสุดการไตเตรทสเปกที่ Jasco V / 550 spectrophotometer (JASCO, เครเมลลา, อิตาลี) โดยใช้ 5,5'-Dithiobis (กรด 2 nitrobenzoic) (สาร DTNB, Ellman ของ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [22 ] สั้น ๆ ได้รับการรักษาและได้รับการรักษาเซลล์ถูก lysed โดยการแช่แข็งและละลายใน 100 มิลลิบัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต (พีบีเอส) พีเอช 7.5, 5 mM EDTA และหลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 16,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 10 นาทีความเข้มข้นของโปรตีนทั้งหมดถูกกำหนดโดยใช้วิธี Bradford supernatants ถูกยกเลิก proteinized ด้วยกรดไตรคลอโร 5% สำหรับการวัด GSH, supernatants ชัดเจนกรดเป็นกลางและได้รับบัฟเฟอร์ที่ pH 7.4 กับ 200 มิลลิ K2HPO4 ค่า pH 7.5 ปฏิกิริยาจากนั้นก็เริ่มจากการเพิ่มขึ้นของ 60 ไมครอน DTNB และการเพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสงที่ 412 นาโนเมตรวัดจนการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนไม่เห็นได้ชัด จำนวนรวม GSH ถูกกำหนดโดยเปรียบเทียบกับ GSH กราฟมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ความเข้มข้นของ GSH ในเซลล์ถูกวัดโดย endpoint ) ไทเทรตใน jasco V / 550 ( jasco เครเมลลา , อิตาลี , Spectrophotometer ) ใช้ 5 , 5 ’ - dithiobis ( 2-nitrobenzoic acid ) ( dtnb เอลเมิ่นเป็นรีเอเจนต์ , ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ) [ 22 ] สั้น ๆ , การรักษาและรักษาเซลล์มี lysed โดยการแช่แข็งและละลายใน 100 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.5 ( PBS ) ประกอบด้วย 5 mM EDTA ,และหลังการปั่นเหวี่ยงที่ 8 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 10 นาที ปริมาณโปรตีนทั้งหมดถูกกำหนดโดยการใช้แบรดฟอร์ด วิธี การ supernatants เป็น de proteinized 5% กรดไตรคลอโรอะซิติก . เครื่องวัดชนิดปรับ supernatants ได้ชัดเจน , เป็นกลางและกรดที่ pH 7.4 กับ k2hpo4 200 มม. pH 7.5 . ปฏิกิริยาก็เริ่มโดยการเพิ่มของµ dtnb 60 เมตร ,และการเพิ่มค่าการดูดกลืนแสงที่ 412 นาโนเมตรวัดจนไม่มีการเปลี่ยนแปลงค่าได้ชัด . ปริมาณ GSH ทั้งหมดถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบกับกราฟมาตรฐาน 10 .