In developing the methods for our s

In developing the methods for our studies we have used an enzymatic approach with application of Saccharomyces cerevisiae exopolyphosphatase X (scPPX1). ScPPX1 is an effective polyphosphatase that possesses high substrate specificity and hydrolyses orthophosphates from polyP chains of varied lengths, but not from ATP, pyrophosphate and trimetaphosphate [35]. In order to detect a possible effect of polyP on TRPM8 we conducted a number of experiments with application, or expression, of scPPX1 in HEK-293 cells. In whole-cell patch clamp experiments, dialysis of purified scPPX1 through the patch pipette into cells transiently transfected with TRPM8 significantly inhibited menthol-induced
currents in a time period of 3–5 min of treatment with scPPX1 (Fig. 1A–C). The concentration of scPPX1 in the pipette solution (2.3 μg/ml) was sufficient to observe inhibition within the tested time.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการพัฒนาวิธีการศึกษาของเรา เราได้ใช้วิธีการเอนไซม์ในระบบ ด้วยการประยุกต์ Saccharomyces cerevisiae exopolyphosphatase X (scPPX1) ScPPX1 เป็น polyphosphatase มีประสิทธิภาพที่มี specificity สูงพื้นผิว และ hydrolyses orthophosphates จากโปลิโซ่ของความยาวแตกต่างกัน แต่ไม่ได้มา จาก ATP, pyrophosphate และ trimetaphosphate [35] การตรวจได้ผลของโปลิ TRPM8 เราดำเนินจำนวนทดลองใช้ หรือค่า ของ scPPX1 ในเซลล์ HEK-293 ในการทดลองปรับปรุงทั้งเซลล์แคลมป์ หน่วยของ scPPX1 บริสุทธิ์ผ่านเปตต์แพทช์ลงในเซลล์ transiently transfected กับ TRPM8 อย่างมีนัยสำคัญห้ามอินเดียเกิดกระแสในระยะเวลา 3 – 5 นาทีการรักษาด้วย scPPX1 (Fig. 1A – C) ความเข้มข้นของ scPPX1 ในโซลูชันเปตต์ (2.3 μg/ml) ก็เพียงพอสังเกตยับยั้งภายในระยะเวลาทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการพัฒนาวิธีการสำหรับการศึกษาของเราที่เราได้ใช้วิธีเอนไซม์ด้วยการประยุกต์ใช้ Saccharomyces cerevisiae exopolyphosphatase X (scPPX1) ScPPX1 เป็น polyphosphatase ที่มีประสิทธิภาพที่มีความจำเพาะสูงและพื้นผิว hydrolyses orthophosphates จากโซ่ตรวนปะการังของความยาวที่แตกต่างกัน แต่ไม่ได้มาจากเอทีพีและ pyrophosphate trimetaphosphate [35] เพื่อที่จะตรวจสอบผลกระทบที่เป็นไปได้ของปะการังใน TRPM8 เราดำเนินการจำนวนของการทดลองกับโปรแกรมหรือการแสดงออกของ scPPX1 ใน HEK-293 เซลล์ ในแพทช์ทั้งเซลล์ทดลองยึดไตของ scPPX1 บริสุทธิ์ผ่านเปตแพทช์เข้าสู่เซลล์ transfected transiently กับ TRPM8
ยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญเมนทอลเหนี่ยวนำให้เกิดกระแสในช่วงเวลา3-5 นาทีของการรักษาด้วย scPPX1 (รูป. 1A-C) ความเข้มข้นของ scPPX1 ในการแก้ปัญหาปิเปต (2.3 g / ml) ก็เพียงพอที่จะยับยั้งการสังเกตภายในระยะเวลาทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การพัฒนาวิธีการศึกษาของเรา เราได้ใช้เป็นแนวทางในการประยุกต์ใช้เอนไซม์กับ Saccharomyces cerevisiae exopolyphosphatase X ( scppx1 ) scppx1 เป็น polyphosphatase ที่มีประสิทธิภาพที่ครบถ้วนและความจำเพาะสูงกว่า hydrolyses orthophosphates จากติ่งเนื้อโซ่ยาวที่หลากหลาย แต่ไม่ใช่จากเอทีพีไพโร Trimetaphosphate , และ [ 35 ]เพื่อตรวจสอบผลกระทบที่เป็นไปได้ของติ่งเนื้อใน trpm8 เราทำการทดลองกับ จำนวนของโปรแกรมประยุกต์ หรือการแสดงออกของ scppx1 ใน hek-293 เซลล์ ทั้งในเซลล์ไตของ Patch Clamp การทดลอง scppx1 บริสุทธิ์ผ่านแพทช์เปตเป็นเซลล์บุคคลหรือสิ่งที่อยู่ชั่วคราว transfected กับ trpm8 สามารถยับยั้งการ
เมนทอลกระแสในช่วงเวลาของ 3 – 5 นาทีของการรักษาด้วย scppx1 ( รูปที่ 1A ( C ) ความเข้มข้นของ scppx1 ในปิเปตสารละลาย ( 2.3 μ g / ml ) ก็เพียงพอที่จะสังเกตยับยั้งภายในเวลา
ทดสอบ .