A protocol for regenerating and sub

A protocol for regenerating and subsequent in vitro flowering of an economical important and endangered medicinal orchid, Dendrobium huoshanense, was established mainly via indirect protocorm-like body (PLB) formation. A four-step method was developed to induce successful plant regeneration on 1/2 MS medium supplemented with suitable plant growth regulators (PGRs). Step 1 (callus induction): the root tip explants (1 cm long) were cultured at 1 mg l−1 2,4-D + 1 mg l−1 TDZ for 3 months. Step 2 (callus proliferation): the calli were subcultured with a 1-month interval at 1 mg l−1 2,4-D + 1 mg l−1 TDZ. Step 3 (PLB induction): the calli were cultured at 2 mg l−1 NAA + 1 mg l−1 BA for 2 months. Step 4 (plantlet conversion): the 2-month-old PLBs were cultured at 0.1 mg l−1 IBA for 4 months. It took at least 6 months to produce well-rooted regenerated plantlets with an average of 3.2 roots and 3.6 leaves from the initial callus. The 6-month-old rooted plantlets were transferred onto PGR-free 1/2 MS medium for 6 months, and then potted with Sphagnum moss for acclimatization. After 2 month of culture, the survival rate was 100 %. The in vitro flowers were obtained on the 8-month-old plantlets at 1 mg l−1 IBA, 5 mg l−1 IBA and 0.1 mg l−1 NAA, but the flowers showed a lack of the gynandrium. The abnormity was overcome by the aid of 5 mg l−1 TDZ, and subsequently, the capsules formed without artificial pollination. This protocol provides the basis for further investigation on cell suspension, micropropagation, in vitro flowering and breeding programs in Dendrobium huoshanense.

Keywords

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

โพรโทคอลที่สร้างใหม่และต่อมาออกดอกในหลอดทดลองของการประหยัดสำคัญ และใกล้สูญพันธุ์สมุนไพร กล้วยไม้สกุลหวาย huoshanense ก่อตั้งส่วนใหญ่ผ่านทางร่างกายทางอ้อมเหมือน protocorm (PLB) ก่อตัวขึ้น วิธีการขั้นตอนที่สี่ได้รับการพัฒนาเพื่อก่อให้เกิดการฟื้นฟูโรงงานประสบความสำเร็จบน MS 1/2 สื่อเสริม ด้วยฮอร์โมนพืชที่เหมาะสม (PGRs) ขั้นตอนที่ 1 (เหนี่ยวนำแคลลัส): เฌลปลายราก (ยาว 1 ซม.) ถูกล้างที่ 1 มก. l−1 2, 4-D + 1 มก. TDZ l−1 3 เดือน ขั้นตอนที่ 2 (แคลลัสแพร่กระจาย): เอเรียถูก subcultured กับช่วง 1-เดือนที่ 1 มก. l−1 2, 4-D + 1 มก. l−1 TDZ ขั้นตอนที่ 3 (เหนี่ยวนำ PLB): เอเรียถูกล้างที่ 2 มิลลิกรัมราดหน้า l−1 + 1 มก.บา l−1 2 เดือน ขั้นตอนที่ 4 (แปลง plantlet): PLBs อายุ 2 เดือนถูกล้างที่ 0.1 มก.อิบา l−1 4 เดือน น้อย 6 เดือนในการผลิตรากดีอาศัย plantlets โดยเฉลี่ย 3.2 ราก และ 3.6 ออกจากแคลลัสต้น ถ่ายโอนลงฟรี PGR plantlets รากอายุ 6 เดือน 1/2 MS กลาง 6 เดือน และไม้กระถางแล้ว มีฤาษีสำหรับ acclimatization หลังจาก 2 เดือนของวัฒนธรรม อัตราการอยู่รอดได้ 100% ดอกไม้ในหลอดทดลองได้รับบน plantlets อายุ 8 เดือนที่ 1 มก.อิบา l−1, l−1 5 mg IBA และ 0.1 มก. l−1 ราดหน้า แต่ดอกไม้แสดงให้เห็นว่าการขาดการ gynandrium Abnormity การแก้ไขเอาชนะ by the aid of 5 mg l−1 TDZ แล้วก็ แคปซูลที่เกิดขึ้นโดยไม่ต้องผสมเกสรเทียม โพรโทคอลนี้ให้ข้อมูลพื้นฐานสำหรับการสืบสวนเพิ่มเติมบนระงับเซลล์ micropropagation ในหลอดทดลองออกดอก และผสมพันธุ์ในดอก huoshanenseคำสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรโตคอลสำหรับการปฏิรูปและต่อมาออกดอกในหลอดทดลองที่มีความสำคัญและใกล้สูญพันธุ์กล้วยไม้สมุนไพรประหยัด Dendrobium huoshanense ก่อตั้งขึ้นส่วนใหญ่ผ่านทางอ้อม protocorm เหมือนร่างกาย (PLB) การก่อตัว วิธีการขั้นตอนที่สี่ได้รับการพัฒนาเพื่อก่อให้เกิดการฟื้นฟูโรงงานที่ประสบความสำเร็จใน 1/2 สูตร MS เสริมด้วยควบคุมการเจริญเติบโตของพืชที่เหมาะสม (PGRs) ขั้นตอนที่ 1 (แคลลัสเหนี่ยวนำ): ผู้ชิ้นส่วนปลายราก (1 ซม. ยาว) มาเลี้ยงวันที่ 1 มก. L-1 2,4-D + 1 มิลลิกรัม L-1 TDZ เป็นเวลา 3 เดือน ขั้นตอนที่ 2 (แคลลัสงอก): แคลลัสที่ถูกเลี้ยงด้วยช่วงเวลา 1 เดือน ณ วันที่ 1 มก. L-1 2,4-D + 1 มิลลิกรัม L-1 TDZ ขั้นตอนที่ 3 (PLB เหนี่ยวนำ): แคลลัสที่ถูกเพาะเลี้ยงที่ 2 มิลลิกรัม L-1 + NAA 1 มิลลิกรัม L-1 บริติชแอร์เวย์เป็นเวลา 2 เดือน ขั้นตอนที่ 4 (แปลงต้น): ผู้ PLBs 2 เดือนเก่าโดยการเพาะ 0.1 mg L-1 IBA เป็นเวลา 4 เดือน มันต้องใช้เวลาอย่างน้อย 6 เดือนในการผลิตที่ดีที่หยั่งรากต้นกล้าสร้างใหม่โดยมีค่าเฉลี่ย 3.2 และ 3.6 รากใบจากแคลลัสเริ่มต้น ต้นกล้าที่ฝังราก 6 เดือนเก่าถูกโอนไปยัง PGR ฟรี 1/2 สูตร MS เป็นเวลา 6 เดือนแล้วกระถางด้วยตะไคร่น้ำมอสสำหรับเคยชินกับสภาพ หลังจากนั้น 2 เดือนของวัฒนธรรม, อัตราการรอดตายได้ 100% ในหลอดทดลองดอกไม้ที่ได้รับในต้น 8 เดือนเก่าวันที่ 1 มก. L-1 IBA, 5 มิลลิกรัม L-1 IBA และ 0.1 mg L-1 NAA แต่ดอกไม้ที่แสดงให้เห็นถึงการขาดความ gynandrium ผิดปกติถูกครอบงำโดยความช่วยเหลือของ 5 มิลลิกรัม L-1 TDZ และต่อมาแคปซูลที่เกิดขึ้นโดยไม่ต้องผสมเกสรเทียม โปรโตคอลนี้มีพื้นฐานสำหรับการตรวจสอบเพิ่มเติมเกี่ยวกับการระงับเซลล์ขยายพันธุ์ในหลอดทดลองการออกดอกและการปรับปรุงพันธุ์โปรแกรมในกล้วยไม้สกุลหวาย huoshanense ได้.

คำสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรโตคอลสำหรับ regenerating และภายหลังการออกดอกของการประหยัดที่สำคัญและอันตรายยากล้วยไม้ สกุลหวาย huoshanense ก่อตั้งขึ้นส่วนใหญ่ผ่านทางอ้อมต่อร่างกาย ( plb ) เช่น การสร้าง วิธีการสี่ขั้นตอนคือการพัฒนาเพื่อให้เกิดการฟื้นฟูโรงงานที่ประสบความสำเร็จ ใน 1 / 2 อาหารสูตร MS ที่เติมสารควบคุมการเจริญเติบโตของพืชที่เหมาะสม ( ของ ) ขั้นตอนที่ 1 ( ชักนำ ) : ปลายรากฟัน เลี้ยง ( ยาว 1 ซม. ) เพาะเลี้ยง 1 mg L − 1 2 + 1 mg L − 1 ยอด 3 เดือน ขั้นตอนที่ 2 ( แคลลัส proliferation ) : แคลลัส subcultured ด้วย 1 เดือน ช่วงที่ 1 มิลลิกรัมต่อลิตรที่เติม 2 , 4-D − 1 + 1 mg L − 1 ยอด . ขั้นตอนที่ 3 ( plb induction ) : แคลลัสเพาะเลี้ยงที่ 2 mg L − 1 NAA 1 มิลลิกรัมต่อลิตร BA − 1 + 2 เดือน ขั้นตอนที่ 4 ( แปลงใหม่ ) : 2-month-old อาหารเพาะเลี้ยงที่ 0.1 mg L − 1 IBA เป็นเวลา 4 เดือน มันใช้เวลาอย่างน้อย 6 เดือน ผลิตได้ด้วยรากต้นเฉลี่ย 3.2 3.6 ใบรากจากแคลลัสเบื้องต้น ช่วง 6 เดือน รากต้นเป็นโอนไปยัง pgr ฟรี 1 / 2 MS เป็นเวลา 6 เดือน แล้ว หมักกับพืชมอสมอสสำหรับการ . หลังจาก 2 เดือนของวัฒนธรรม , อัตราการรอดตาย 100% ในหลอดทดลอง ดอกไม้ที่ได้รับใน 8-month-old ต้นที่ 1 mg L − 1 IBA 5 มก. L − 1 IBA และ NAA 0.1 มิลลิกรัมต่อลิตร− 1 แต่ดอกไม้แสดงการขาดของ gynandrium . ซึ่งถูกเอาชนะโดยความช่วยเหลือของพิกล 5 mg L − 1 ยอด และต่อมาแคปซูลรูปแบบโดยไม่มีการผสมเกสรดอกไม้ประดิษฐ์ โปรโตคอลนี้เป็นพื้นฐานสำหรับการสืบสวนเพิ่มเติมในเซลล์แขวนลอยการขยายพันธุ์ในหลอดทดลอง , และโปรแกรมในกล้วยไม้สกุลหวายพันธุ์ดอก huoshanense .คำสำคัญ