2.4. Analysis of defense-related ge

2.4. Analysis of defense-related genes expression
To further investigate whether the B. cereus AR156 induced disease
resistance against Rhizopus rot is associated with priming of
defense responses in peach fruit, RT-PCR was used to analyze the
expression patterns of the defense-related genes PpNPR1-like,
PpPR-like, chitinase (CHI), and b-1,3-glucanase (GNS) in peach fruit
only inoculated with distilled water (Mock), R. stolonifer or B. cereus
AR156, and in those both treated with B. cereus AR156 and inoculated
with R. stolonifer. Total RNA was extracted from fruit according
to the method described by Chang, Puryear, and John (1993)
with some modifications. RT-PCR was performed according to the
manufacturer’s instructions of PrimeScriptTM 16 1st Strand cDNA
Synthesis Kit (TaKaRa, Japan). Short and conserved segments of
PpNPR1-like (GenBank ID: DQ149935), PpPR-like (GenBank ID:
AF362989), PpCHI (GenBank ID: AF206635), and PpGNS (GenBank
ID: U49454) were cloned by degenerate primers. Independent
PCR with 25 cycles was performed using aliquots (1 ll) of cDNA
samples, and a constitutively expressed gene 18S-rRNA (GenBank
ID: L28749.1) was used as a quantitative control in the RT-PCR
analysis. The sequences of primers used were as follows:
PpNPR1-like_forward: 50-GACCCAAACATGCCAGCAGTG-30 , PpNPR1-
like_reverse: 50-ATCCTTCGGCCTTGTCAACCT-30; PpPR1-like_forward:
50-ATCAACTGGGACTTGCGTACT-30 , PpPR1-like_reverse: 50-
TAGTCGCCACAGTCAACAAAG-30; PpCHI_forward: 50-GTGGAAAAG
CAATAGGGGAG-30 , PpCHI_reverse: 50-TTCCAGCCCTTACCACAT-30;
PpGNS_forward: 50-ATTTCTCTTGCTGGTCTTG-30 , PpGNS_reverse:
50-CTCTGGGGTCTTTCTATTCT-30; 18S-rRNA_forward: 50-ATGGCCG
TTCTTAGTTGGTG-30 , 18S-rRNA_reverse: 50- GTACAAAGGGCAGGG
ACGTA-30 .
2.5. Assay of enzyme activity
Chitinase (EC 3.2.1.14) was extracted from 1 g of frozen tissue
sample with 5 ml of 50 mM sodium acetate buffer (pH 5.0). Chitinase
activity was measured by the release of N-acetyl-D-glucosamine
(NAG) from colloidal chitin according to the method of
Abeles, Bosshart, Forrence, and Habig (1971). A unit of chitinase
activity is defined as the amount of enzyme required to catalyse
the production of 1 lg NAG per hour at 37 C.
b-1,3-Glucanase (EC 3.2.1.58) activity was determined using the
colorimetric assay based on the hydrolysis of laminarin. Frozen tissue
sample (1 g) was ground with 5 ml of 50 mM sodium acetate
buffer (pH 5.0). Enzyme preparation (1 ml) was incubated for 1 h
at 37 C with 1 ml of 4% laminarin (Aldrich, Chemical Co., Wilwaukee,
WI, USA). The reaction was terminated by heating the sample
in boiling water for 5 min and the amount of reducing sugars was
measured spectrophotometrically at 540 nm after reaction with
250 ll 3,5-dinitrosalicyclic reagent (Aldrich). One unit is defined
as the amount of enzyme catalyzing the formation of 1 lmol glucose
equivalents in 1 h.
Superoxide dismutase (SOD, EC 1.15.1.1) activity was determined
by the method of Rao, Paliyath, and Ormrod (1996). Frozen
tissue (1 g) was ground with 5 ml of 50 mM sodium phosphate
buffer (pH 7.8). The reaction mixture contained 50 mM sodium
phosphate buffer (pH 7.8), 14 mM methionine, 3 lM EDTA, 1 lM
nitro blue tetrazolium (NBT), 60 lM riboflavin and 0.1 ml crude
enzyme extract. One unit of SOD activity is defined as the amount
of enzyme that caused a 50% inhibition of NBT.
Catalase (CAT, EC 1.11.1.6) activity was measured according to
the method of Chance and Maehly (1955). Frozen tissue (1 g)
was ground with 5 ml of 50 mM sodium phosphate buffer (pH
7.0). The reaction mixture consisted of 50 mM sodium phosphate
buffer (pH 7.0), 12.5 mM H2O2 and 20 ll of enzyme extract. One
unit of CAT activity is defined as the amount of enzyme that
decomposed 1 lmol H2O2 min1 at 30 C.
Ascorbate peroxidase (APX, EC 1.11.1.11) was extracted from
1 g frozen tissue ground with 5 ml of 50 mM sodium phosphate
buffer (pH 7.0) that contained 0.1 mM EDTA, 1 mM ascorbic acid
and 1% polyvinyl-pyrrolidone (PVP). The homogenate was centrifugated
at 10,000g for 20 min at 4 C and the supernatant was used
to determine the APX activity. One unit of APX activity is defined as
the amount of enzyme that oxidized 1 lmol ascorbate per minute
at 30 C.
Phenylalanine ammonia-lyase (PAL, EC 4.3.1.5) activity was extracted
with 0.2 M sodium borate buffer (pH 8.7) that contained

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 การวิเคราะห์ยีนที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันนิพจน์
การตรวจสอบเพิ่มเติม ว่า cereus เกิด AR156 เกิดโรค
ต้านทานกับ Rhizopus rot จะเกี่ยวข้องกับด้วยของ
ป้องกันการตอบสนองในผลไม้พีช RT-PCR ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์
นิพจน์รูปแบบของยีนที่เกี่ยวข้องกับการป้องกันเช่น PpNPR1,
เหมือน PpPR ผลไม้ที่โรงแรมพี chitinase (ชี), และบี-1,3-คัด (GNS) ใน
inoculated เท่า กับน้ำกลั่น (Mock), R. stolonifer หรือเกิด cereus
AR156 และเหล่านั้นทั้งรับ cereus เกิด AR156 และ inoculated
กับ R. stolonifer อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่สกัดจากผลไม้ตาม
วิธีโดยช้าง Puryear และจอห์น (1993)
กับปรับเปลี่ยนบางอย่าง RT-PCR ได้ดำเนินการตาม
คำแนะนำของผู้ผลิตของ cDNA สแตรนด์ 1 16 PrimeScriptTM
ชุดสังเคราะห์ (TaKaRa ญี่ปุ่น) สั้น และนำส่วนของ
เหมือน PpNPR1 (GenBank ID: DQ149935), เช่น PpPR (GenBank ID:
AF362989), PpCHI (GenBank ID: AF206635), และ PpGNS (GenBank
ID: U49454) ถูกโคลน ด้วยไพรเมอร์ degenerate อิสระ
ทำ PCR กับรอบ 25 ใช้ aliquots (1 ll) ของ cDNA
ตัวอย่าง และเป็นยีน constitutively แสดง 18S-rRNA (GenBank
ID: L287491) ถูกใช้เป็นตัวควบคุมปริมาณใน RT-PCR
วิเคราะห์ ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้มีดังนี้:
PpNPR1-like_forward: 50-GACCCAAACATGCCAGCAGTG-30, PpNPR1
like_reverse: 50-ATCCTTCGGCCTTGTCAACCT-30 PpPR1-like_forward:
50-ATCAACTGGGACTTGCGTACT-30, PpPR1-like_reverse: 50-
TAGTCGCCACAGTCAACAAAG-30 PpCHI_forward: 50-GTGGAAAAG
CAATAGGGGAG 30, PpCHI_reverse: 50-TTCCAGCCCTTACCACAT-30;
PpGNS_forward: 50-ATTTCTCTTGCTGGTCTTG-30, PpGNS_reverse:
50-CTCTGGGGTCTTTCTATTCT-30 18S rRNA_forward: 50-ATGGCCG
TTCTTAGTTGGTG 30, 18S rRNA_reverse: 50-GTACAAAGGGCAGGG
ACGTA 30.
2.5 วิเคราะห์ของเอนไซม์
Chitinase (EC 3.2.1.14) ที่สกัดจาก 1 กรัมของเนื้อเยื่อแช่แข็ง
ชิ้นงานตัวอย่าง ด้วย 5 ml ของบัฟเฟอร์ acetate โซเดียม 50 มม. (pH 5.0) Chitinase
กิจกรรมที่วัด โดยการปล่อย N-acetyl-D-glucosamine
(NAG) จากไคทิน colloidal ตามวิธีของ
Abeles, Bosshart, Forrence และ Habig (1971) หน่วยของ chitinase
กิจกรรมถูกกำหนดให้เป็นจำนวนเอนไซม์ต้อง catalyse
ผลิตของ lg 1 NAG ต่อชั่วโมงที่ 37 C.
กำหนดกิจกรรม b-1,3-คัด (EC 3.2.1.58) ใช้การ
วิเคราะห์เทียบเคียงตามไฮโตรไลซ์ของ laminarin แช่แข็งเนื้อเยื่อ
ตัวอย่าง (1 g) ถูกพื้นดิน ด้วย 5 ml ของ acetate โซเดียม 50 mM
บัฟเฟอร์ (pH 5.0) เตรียมเอนไซม์ (1 ml) ที่ incubated สำหรับ 1 h
ที่ 37 C มี 1 ml ของ laminarin 4% (Aldrich เคมี Co., Wilwaukee,
WI สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิก โดยตัวอย่างความร้อน
ในน้ำ 5 นาทีและจำนวนลดน้ำตาลเดือด
วัด spectrophotometrically ที่ 540 nm หลังปฏิกิริยากับ
250 จะ 3,5 dinitrosalicyclic รีเอเจนต์ (Aldrich) กำหนดหน่วยหนึ่ง
เป็นจำนวนเอนไซม์ catalyzing การก่อตัวของกลูโคส lmol 1
อัตรา 1 h.
กำหนดกิจกรรมซูเปอร์ออกไซด์ dismutase (SOD, EC 1.15.1.1)
โดยวิธีการของเรา Paliyath และ Ormrod (1996) แช่แข็ง
เนื้อเยื่อ (1 g) ถูกพื้นดิน ด้วย 5 ml ของฟอสเฟตโซเดียม 50 mM
บัฟเฟอร์ (pH 7.8) ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วยโซเดียม 50 mM
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8), 14 มม. methionine, 3 lM EDTA, 1 lM
nitro บลู tetrazolium (เอ็นบีที), การ 60 lM ไรโบเฟลวิน และ 0.1 มล.น้ำมัน
สารสกัดเอนไซม์ หนึ่งหน่วยกิจกรรมสดถูกกำหนดเป็นยอด
ของเอนไซม์ที่ทำให้เกิดยับยั้ง 50 ของเอ็นบีที
กิจกรรม Catalase (CAT, EC 1.11.1.6) ถูกวัดตาม
วิธีการโอกาสและ Maehly (1955) แช่แข็งเนื้อเยื่อ (1 g)
ถูกพื้นดินที่ มี 5 ml 50 mM โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH
7.0) ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วยฟอสเฟตโซเดียม 50 มม.
บัฟเฟอร์ (pH 7.0), H2O2 12.5 มม.และ 20 จะของเอนไซม์ที่สกัด หนึ่ง
หน่วยกิจกรรม CAT ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่
แยก 1 lmol H2O2 นาที 1 ที่ 30 C.
Ascorbate peroxidase (ให้ APX, EC 1.11.111) ถูกสกัดจาก
g 1 แช่แข็งเนื้อเยื่อพื้น ด้วย 5 ml ของฟอสเฟตโซเดียม 50 mM
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) ที่อยู่ 0.1 mM EDTA กรดแอสคอร์บิค 1 mM
และโพลีไวนิล 1%-pyrrolidone (PVP) Homogenate ถูก centrifugated
ที่ 10000 g สำหรับ 20 นาทีที่ 4 C และ supernatant ที่ใช้
เพื่อกำหนดกิจกรรมให้ APX กำหนดเป็นหน่วยหนึ่งของกิจกรรมให้ APX
จำนวนเอนไซม์ที่ออกซิไดซ์ 1 lmol ascorbate ต่อนาที
ที่ 30 C.
Phenylalanine แอมโมเนีย-lyase (PAL, EC 4.3.1.5) กิจกรรมถูกสกัด
กับ 0.2 M borate โซเดียมบัฟเฟอร์ (pH 8.7) ที่อยู่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การวิเคราะห์ของการป้องกันที่เกี่ยวข้องกับการแสดงออกของยีน
ที่จะตรวจสอบเพิ่มเติมว่าโรคที่เกิดจาก B. cereus AR156
ต่อต้านเชื้อรา Rhizopus เน่ามีความเกี่ยวข้องกับรองพื้นของ
การตอบสนองการป้องกันในผลไม้ลูกพีช, RT-PCR ถูกใช้ในการวิเคราะห์
รูปแบบการแสดงออกของการป้องกันที่เกี่ยวข้องกับยีน PpNPR1 เหมือน
PpPR เหมือนไคติเนส (CHI) และ b-1 ,3-glucanase (GNS) ในผลไม้ลูกพีช
เชื้อเฉพาะกับน้ำกลั่น (จำลอง), R. stolonifer หรือ B. cereus
AR156 และในที่ทั้งสองได้รับการรักษาด้วย B. cereus AR156 และเชื้อ
ด้วยอาร์ stolonifer อาร์เอ็นเอรวมสกัดจากผลไม้ตาม
วิธีการที่อธิบายโดยช้าง, Puryear และจอห์น (1993)
มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง RT-PCR ได้ดำเนินการตาม
คำแนะนำของผู้ผลิตของ PrimeScriptTM 16 1 Strand ยีน
สังเคราะห์ Kit (Takara, ญี่ปุ่น) ส่วนระยะสั้นและอนุรักษ์ของ
PpNPR1 เหมือน (ID GenBank: DQ149935) PpPR เหมือน (ID GenBank:
AF362989) PpCHI (ID GenBank: AF206635) และ PpGNS (GenBank
ID: U49454) ถูกโคลนด้วยไพรเมอร์คนเลว อิสระ
PCR กับ 25 รอบได้รับการดำเนินการโดยใช้ aliquots (1 LL) ของยีน
ตัวอย่างและการแสดงออกของยีน 18S rRNA-(GenBank
ID: L28749.1) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมปริมาณใน RT-PCR
การวิเคราะห์ ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้มีดังนี้
PpNPR1-like_forward: 50 GACCCAAACATGCCAGCAGTG-30, PpNPR1-
like_reverse: 50 ATCCTTCGGCCTTGTCAACCT-30; PpPR1-like_forward:
50 ATCAACTGGGACTTGCGTACT-30, PpPR1-like_reverse: 50 -
TAGTCGCCACAGTCAACAAAG-30; PpCHI_forward: 50-GTGGAAAAG
CAATAGGGGAG-30, PpCHI_reverse: 50 TTCCAGCCCTTACCACAT-30;
PpGNS_forward: 50 ATTTCTCTTGCTGGTCTTG-30, PpGNS_reverse:
50 CTCTGGGGTCTTTCTATTCT-30; 18S-rRNA_forward: 50-ATGGCCG
TTCTTAGTTGGTG-30-18S rRNA_reverse: 50 - GTACAAAGGGCAGGG
ACGTA-30
2.5 Assay ของเอนไซม์
ไคติเนส (EC 3.2.1.14) ถูกสกัดจาก 1 กรัมของเนื้อเยื่อแช่แข็ง
ตัวอย่างที่มี 5 ml 50 มิลลิบัฟเฟอร์โซเดียมอะซิเตท (pH 5.0) ไคติเนส
กิจกรรมโดยวัดจากการปล่อยของ N-acetyl-D-กลู
(ม้าแกลบ) จากไคตินคอลลอยด์ตามวิธีการของ
Abeles, Bosshart, Forrence และ Habig (1971) หน่วยของไคติเนส
กิจกรรมมีการกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการกระตุ้น
การผลิตแอลจี 1 ถากถางต่อชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 C.
b-1 ,3-glucanase (EC 3.2.1.58) กิจกรรมถูกกำหนดโดยใช้
การทดสอบสีตาม การย่อยสลายของ Laminarin เนื้อเยื่อแช่แข็ง
ตัวอย่าง (1 กรัม) เป็นพื้นดินที่มี 5 ml 50 มิลลิโซเดียมอะซิเตท
บัฟเฟอร์ (pH 5.0) เตรียมเอนไซม์ (1 มล. ) ได้รับการบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส 1 มล. 4% Laminarin (ดิชเคมิคอล Wilwaukee,
วิสคอนซินสหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยาถูกยกเลิกด้วยความร้อนตัวอย่าง
ในน้ำเดือดเป็นเวลา 5 นาทีและปริมาณของการลดน้ำตาลที่
วัด spectrophotometrically ที่ 540 นาโนเมตรหลังจากทำปฏิกิริยากับ
250? จะ 3,5-dinitrosalicyclic สาร (Aldrich) หนึ่งหน่วยที่ถูกกำหนดให้
เป็นจำนวนเอนไซม์เร่งการก่อตัวของกลูโคส 1 lmol
เทียบเท่าใน 1 ชั่วโมง
ซุปเปอร์ dismutase (SOD, EC 1.15.1.1) กิจกรรมถูกกำหนด
โดยวิธีการราว Paliyath และ Ormrod (1996) แช่แข็ง
เนื้อเยื่อ (1 กรัม) เป็นพื้นดินที่มี 5 ml 50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.8) ผสมปฏิกิริยาที่มี 50 มิลลิโซเดียม
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.8), 14 มิลลิ methionine, 3 LM EDTA, LM 1
tetrazolium ไนโตรฟ้า (NBT) 60 LM riboflavin และ 0.1 มล. ดิบ
สารสกัดเอนไซม์ หน่วยหนึ่งของกิจกรรม SOD หมายถึงปริมาณ
ของเอนไซม์ที่ทำให้เกิดการยับยั้ง 50% ของ NBT
คา (CAT, EC 1.11.1.6) กิจกรรมวัดตาม
วิธีการของเมฆและ Maehly (1955) เนื้อเยื่อแช่แข็ง (1 กรัม)
เป็นพื้นดินที่มี 5 ml 50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH
7.0) ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 50 มิลลิโซเดียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) 12.5 มิลลิ H2O2 และ 20? จะของสารสกัดเอนไซม์ หนึ่ง
หน่วยของกิจกรรม CAT มีการกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่
ย่อยสลาย 1 lmol H2O2 นาที? ที่ 1 วันที่ 30? C.
แอสคอร์เปอร์ (APX, EC 1.11.1.11) ถูกสกัดจาก
พื้นดิน 1 กรัมเนื้อเยื่อแช่แข็งด้วย 5 มล. 50 มิลลิโซเดียม ฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) ที่มี 0.1 mM EDTA, วิตามินซี 1 มิลลิ
และ 1% โพลีไวนิล-pyrrolidone (PVP) homogenate ถูก centrifugated
ที่ 10,000 กรัมเป็นเวลา 20 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสและสารละลายที่ใช้
ในการตรวจสอบกิจกรรม APX หน่วยหนึ่งของกิจกรรม APX ถูกกำหนดให้เป็น
ปริมาณของเอนไซม์ที่ออกซิไดซ์ 1 ascorbate lmol ต่อนาที
ที่ 30? C.
Phenylalanine แอมโมเนียอร์เมต (PAL, EC 4.3.1.5) กิจกรรมการสกัด
ด้วยบัฟเฟอร์ 0.2 M โซเดียมบอเรต (pH 8.7) ที่ มีอยู่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องกับการป้องกัน
เพิ่มเติม ตรวจสอบว่า B . cereus ar156 ชักนำความต้านทานต่อเชื้อราโรค

เน่าเกี่ยวข้องกับรองพื้นของการป้องกันการตอบสนองในผลไม้ลูกพีช , RT-PCR วิเคราะห์
การแสดงออกรูปแบบของยีนที่เกี่ยวข้องกับการป้องกัน ppnpr1 ชอบ
pppr ชอบไค ( ไค ) และ b-1,3-glucanase ( GNS )
ผลไม้ลูกพีชเพียงใส่น้ำกลั่น ( เยาะเย้ย ) , R stolonifer หรือ B . cereus ar156
และทั้งรักษาด้วย B ar156 cereus และหัวเชื้อ
กับ อาร์ stolonifer . อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากผลไม้ตาม
วิธีการบรรยายโดย ชาง เพอร์เยียร์ จอห์น ( 1993 )
ที่มีการปรับเปลี่ยน วิธีทําตามคําแนะนําของผู้ผลิตของ primescripttm

16 1 เกลียวดีเอ็นเอชุดสังเคราะห์ ( Takara , ญี่ปุ่น ) สั้น และรักษาส่วนของ
ppnpr1 ( ขนาด ID : dq149935 ) pppr ( ขนาด ID :
af362989 ) ppchi ( ขนาด ID : af206635 ) และ ppgns ( ขนาด
ID : u49454 ) ถูกโคลนด้วยการรองพื้น อิสระ
PCR กับ 25 รอบการใช้เฉยๆ ( จะ ) ตัวอย่างดีเอ็นเอ
และ constitutively แสดงออกยีน 18S rRNA ( ขนาด
ID : l28749 .1 ) ใช้เป็นตัวควบคุมปริมาณในการวิเคราะห์นี้

ลำดับของไพรเมอร์ที่ใช้มีดังนี้ ppnpr1-like_forward :
-
50-gacccaaacatgccagcagtg-30 ppnpr1 , like_reverse : 50-atccttcggccttgtcaacct-30 ; pppr1-like_forward :
50-atcaactgggacttgcgtact-30 pppr1-like_reverse , 50 -
tagtcgccacagtcaacaaag-30 ; ppchi_forward : 50-gtggaaaag
caataggggag-30 ppchi_reverse : 50-ttccagcccttaccacat-30 ;
,ppgns_forward : 50-atttctcttgctggtcttg-30 ppgns_reverse :
, 50-ctctggggtctttctattct-30 ; 18s-rrna_forward : 50-atggccg
ttcttagttggtg-30 18s-rrna_reverse , 50 - acgta-30 gtacaaagggcaggg
.
2.5 วิเคราะห์กิจกรรมของเอนไซม์ไคติเนส ( EC ของ
3.2.1.14 ) สกัดจาก 1 กรัมแช่แข็งตัวอย่างเนื้อเยื่อ
5 ml 50 มิลลิเมตรโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.0 )
ไคติเนสกิจกรรมวัดจากการปล่อย n-acetyl-d-glucosamine
( บ่น ) จาก colloidal chitin ตามวิธีการของเอบิลส์ bosshart forrence
, , , และ habig ( 1971 ) หน่วยของกิจกรรมของเอนไซม์ไคติเนส
หมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นเพื่อกระตุ้น
การผลิต 1 LG บ่นต่อชั่วโมงที่ 37  C .
b-1,3-glucanase ( EC 3.2.1.58 ) กิจกรรมที่ใช้วิเคราะห์
7.4 ) จากการย่อยสลายของลามินาริน . ตัวอย่างเนื้อเยื่อ
แช่แข็ง ( 1 กรัม ) คือพื้นดิน 5 มิลลิลิตร 50 mm
โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ pH 5.0 ) การเตรียมเอนไซม์ ( 1 มล. ) คือบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส 
1 มิลลิลิตรร้อยละลามินาริน ( อัลดริช เคมี Co . , wilwaukee
, WI , USA ) ปฏิกิริยาที่ถูกยกเลิกโดยความร้อนตัวอย่าง
ในน้ำเดือด 5 นาทีและปริมาณน้ำตาลรีดิวซ์คือ
วัดนี้ที่ 540 นาโนเมตร หลังจากปฏิกิริยากับ
250 จะ 3,5-dinitrosalicyclic Reagent ( ดิช ) หนึ่งหน่วยที่กำหนด
ตามปริมาณของเอนไซม์ และการก่อตัวของ 1 lmol กลูโคส
1 h .
> Superoxide Dismutase ( SOD , EC 1.15.1.1 ) กิจกรรมตั้งใจ
โดยวิธีการของ Rao , paliyath และ ormrod ( 1996 )
เนื้อเยื่อแช่แข็ง ( 1 กรัม ) คือพื้นดิน 5 มิลลิลิตร สารละลายโซเดียมฟอสเฟต
50 มม.บัฟเฟอร์ pH 7.8 ) ปฏิกิริยาผสมที่มีอยู่ 50 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.8 )
, methionine 14 มม. , 3 อิม EDTA , 1 กล.
Nitro สีฟ้า tetrazolium ( NBT ) 60 LM ไรโบฟลาวินและ 0.1 มิลลิลิตรเอนไซม์สกัดหยาบ
. หน่วยหนึ่งของกิจกรรมสด หมายถึง จํานวน
ของเอนไซม์ที่ทำให้ 50% inhibition NBT .
คาตาเลส ( แมว , EC 1.11.1.6 ) วัด

กิจกรรมตามวิธีของโอกาสและมา ( 1955 ) เนื้อเยื่อแช่แข็ง ( 1 G )
คือพื้นดิน 5 มิลลิลิตร 50 มิลลิโมลาร์โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH
7.0 ) ปฏิกิริยาผสมจำนวน 50 mm
โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) , 12.5 มม. และแบตเตอรี่ 20 จะของเอนไซม์สกัดเข้มข้น หนึ่งหน่วยของกิจกรรมแมว
หมายถึงปริมาณของเอนไซม์ที่ย่อยสลาย H2O2
1 lmol มิน  1 ใน 30  C .
ascorbate peroxidase ( APX , EC 1.11.1 .11 ) สกัดจาก
1 G พื้นดินแข็งเนื้อเยื่อกับ 5 ml 50 mm
โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) ที่มี 0.1 mM EDTA 1 มม. และกรดแอสคอร์บิก
1 % โพลีไวนิล pyrrolidone ( PVP ) โดยแยกเป็น centrifugated
ที่ 10000g สำหรับ 20 นาทีที่ 4  C และนำใช้
หา APX กิจกรรม หน่วยหนึ่งของกิจกรรม APX หมายถึง
ปริมาณของเอนไซม์ออกซิไดซ์ 1 lmol ascorbate ต่อนาทีที่อุณหภูมิ 30 C .

 ฟีนีแอมโมเนีย lyase ( PAL , EC 4.3.1.5 ) กิจกรรมสกัด
0.2 M โซเดียมบอเรตบัฟเฟอร์ pH 8.7 ) ที่ประกอบด้วย