A novel plasmid, pBSR2, was constru

A novel plasmid, pBSR2, was constructed by incorporating a strong lipase promoter and a terminator into the original pBD64. A
mature lipase gene from Bacillus subtilis strain IFFI10210, an existing strain for lipase expression, was cloned into the plasmid
pBSR2 and transformed into B. subtilis A.S.1.1655. Thus, an overexpression strain, BSL2, was obtained. The yield of lipase is about
8.6mg protein/g of wet weight of cell mass and 100-fold higher than that in B. subtilis strain IFFI10210. The recombinant lipase was
puriWed in a three-step procedure involving ammonium sulfate fractionation, ion exchange, and gel Wltration chromatography. Characterizations
of the puriWed enzyme revealed a molecular mass of 24 kDa in sodium dodecyl sulfate–polyacrylamide gel electrophoresis,
maximum activity at 43 °C and pH 8.5 for hydrolysis of p-nitrophenyl caprylate. The values of Km and Vm were found to be
0.37mM and 303
molmg¡1 min¡1, respectively. The substrate speciWcity study showed that p-nitrophenyl caprylate is a preference
of the enzyme. The metal ions Ca2+, K+, and Mg2+ can activate the lipase, whereas Fe2+, Cu2+, and Co2+ inhibited it. The activity of
the lipase can be increased about 48% by sodium taurocholate at the concentration of 7mM and inhibited at concentrations over
10mM.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พลาสมิดนวนิยาย pBSR2 ถูกสร้างโดยผสมผสานก่อการเอนไซม์ไลเปสที่แข็งแกร่งและเทอร์มิลง pBD64 เดิม
ยีนไลเปสจากผู้ใหญ่เชื้อ Bacillus subtilis สายพันธุ์ IFFI10210 เป็นสายพันธุ์ที่มีอยู่สำหรับการแสดงออกเอนไซม์ไลเปสที่ถูกโคลนเข้าไปในพลาสมิด
pBSR2 และกลายเป็น B. subtilis AS1.1655 ดังนั้นสายพันธุ์แสดงออก, BSL2, ได้รับ ผลผลิตของเอนไซม์ไลเปสเป็นเรื่องเกี่ยวกับโปรตีน 8.6mg / กรัมน้ำหนักเปียกมวลเซลล์และ 100 เท่าสูงกว่าในสายพันธุ์บี subtilis IFFI10210
ไลเปส recombinant ถูก
puriWed ในขั้นตอนที่สามขั้นตอนที่เกี่ยวข้องกับการแยกแอมโมเนียมซัลเฟตการแลกเปลี่ยนไอออนและเจลโค Wltration ลักษณะเฉพาะของเอนไซม์ puriWed เผยมวลโมเลกุล 24 กิโลดาลตันโซเดียมข่าวคราวซัลเฟตโดเดซิลอะคริเลต, กิจกรรมสูงสุดที่ 43 องศาเซลเซียสและ pH 8.5 สำหรับการย่อยสลายของพี Nitrophenyl caprylate ค่านิยมของ Vm กิโลเมตรและถูกพบว่ามี0.37mM และ 303? molmg¡1min¡1ตามลำดับ การศึกษาสารตั้งต้น speciWcity พบว่าพี Nitrophenyl caprylate คือการตั้งค่าของเอนไซม์ โลหะไอออน Ca2 + K + และ Mg2 + สามารถเปิดใช้เอนไซม์ไลเปสในขณะที่ Fe2 + Cu2 + และ Co2 + ยับยั้งมัน กิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่สามารถเพิ่มขึ้นประมาณ 48% โดย taurocholate โซเดียมที่ความเข้มข้น 7mm และยับยั้งที่ความเข้มข้นมากกว่า 10 mM

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นวนิยาย pbsr2 พลาสมิด , , ถูกสร้างขึ้นโดยผสมผสานการเอนไซม์ที่แข็งแรงและหุ่นสังหารเข้าไป pbd64 ต้นฉบับ a
ผู้ใหญ่ยีนเอนไซม์ไลเปสจากเชื้อบาซิลลัส ซับทิลิส iffi10210 สายพันธุ์ที่มีอยู่ในสายพันธุ์สำหรับการแสดงออกของเอนไซม์ถูกโคลนเข้าสู่พลาสมิดและแปลงเป็น pbsr2
B . subtilis a.s.1.1655 . ดังนั้น การ overexpression เมื่อย bsl2 , ได้รับ ผลผลิตของเอนไซม์ประมาณ
86mg โปรตีน / กรัมน้ำหนักเปียกของมวลเซลล์และ 100 เท่าสูงกว่าใน B . subtilis สายพันธุ์ iffi10210 . เอนไซม์รีคอมบิแนนท์
puriwed ในขั้นตอนกระบวนการที่เกี่ยวข้องกับแอมโมเนียมซัลเฟตแยก , การแลกเปลี่ยนไอออน , และโครมาโทกราฟี wltration เจล การศึกษาคุณสมบัติของเอนไซม์พบ puriwed
มวลโมเลกุลของ 24 kDa ในโซเดียมโดเดซิลซัลเฟตและ polyacrylamide gel electrophoresis
กิจกรรมที่ 43 องศา C และสูงสุดที่ pH 8.5 สำหรับการย่อยสลาย p-nitrophenyl caprylate . คุณค่าของ KM และ VM ได้
0.37mm 303
และ molmg ¡ 1 นาที¡ 1 ตามลำดับ พื้นผิว speciwcity การศึกษาพบว่า p-nitrophenyl caprylate คือความชอบ
ของเอนไซม์ ไอออนโลหะแคลเซียม โพแทสเซียม และ mg2 สามารถกระตุ้นเอนไซม์ ในขณะที่ fe2 CU2 และ CO2 , ยับยั้งมัน กิจกรรมของ
เอนไซม์สามารถเพิ่มขึ้น 48 % ที่ความเข้มข้นของโซเดียมทอโรโคเลต 7 และถูกยับยั้งที่ความเข้มข้นมากกว่า
10mm .