CHI Frozen leaf tissue (0.3 g) was

CHI Frozen leaf tissue (0.3 g) was homogenized in 5 mL of potassium phosphate buffer (50 mM, pH 7.8) containing 50 mM ascorbate, 0.2 mM EDTA, 18 mM mercap to ethanol and 2% (w/v) polyvinylpyrrolidone. After centrifuging the homogenate at 12,000 × g for 20 min, the supernatant was used for phenylalanineammonialyase (PAL) and CHI enzyme analyses. All procedures were performed at 4◦C.For the analysis of PAL activity, the assay mixture contained 2.5 mL of 60 mM borate buffer (pH 8.8, containing 10 mM l-phenylalanine) and 0.5 mL of crude enzyme extract (McCallum and Walker, 1990). After incubating the homogenate at 34◦C for 30 min, the reaction was stopped with 0.5 mL of 35% (w/v) trifluoroaceticacid. The homogenate was then centrifuged at 5000 × g for 5 minto remove the denatured proteins. PAL activity was spectrophoto metrically measured by reading the absorbance at 290 nm. One unit of PAL activity was defined as the amount of enzyme required to cause a one thousandth change in absorbance at 290 nm per minper mg of sample (fresh weight). For the analysis of CHI activity, 2,4,4,6-tetrahydroxy chal-cone (naringenin chalcone) was first synthesized using naringenin,which was dissolved in 50% KOH, and then recrystallized using aqueous ethanol. The assay mixture for the CHI analysis contained 2 mL of the reaction mixture (50 mM Tris-HCl, pH 7.4; 7.5 mg mL−1BSA; and 50 mM KCN) and 0.75 mL of the crude enzyme extract (Lister et al., 1996). After the addition of 0.05 mL of 1 mg mL−1tetrahydroxy chalcone in 2-ethoxyethanol, the solution was incubated at 34◦C for 30 min. CHI activity was measured as the change in the absorbance at 381 nm. One unit of CHI activity was defined as the amount of enzyme required to cause a one thousandth change in absorbance at 381 nm per min per mg of sample (fresh weight).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เนื้อเยื่อใบแช่แข็ง CHI (0.3 g) ถูก homogenized ใน 5 มล.ของโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (50 มม. pH 7.8) ที่มี 50 มม. ascorbate, 0.2 mM EDTA, mercap 18 มม.เอทานอลและ 2% (w/v) polyvinylpyrrolidone หลังจากสิ่ง homogenate ที่ 12,000 × g 20 นาที supernatant ถูกใช้สำหรับ phenylalanineammonialyase (PAL) และการวิเคราะห์เอนไซม์ CHI กระบวนการทั้งหมดดำเนินการในการวิเคราะห์กิจกรรม PAL ส่วนผสมทดสอบอยู่ 2.5 มล. 60 มม. borate บัฟเฟอร์ (pH 8.8 ประกอบด้วย 10 มม. l เอพลัส) และ 0.5 mL ของเอนไซม์ดิบสารสกัด (McCallum และวอล์คเกอร์ 1990) 4◦C.For หลังจาก incubating homogenate 34◦C 30 นาทีที่ ปฏิกิริยาถูกหยุด ด้วย 0.5 mL ของ 35% (w/v) trifluoroaceticacid Homogenate การแก้ไขแล้วจากที่ 5000 × g สำหรับวเดนท์ 5 เอาโปรตีนลแปลง กิจกรรม PAL คือ spectrophoto metrically วัด โดยการอ่านค่าที่ 290 nm กำหนดกิจกรรม PAL หนึ่งหน่วยเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นต้องเกิดการเปลี่ยนแปลง thousandth หนึ่งในค่าที่ 290 nm ต่อ minper mg ของตัวอย่าง (น้ำหนักสด) การวิเคราะห์กิจกรรมจิ 2, 4,4, 6 - tetrahydroxy chal-กรวย (naringenin chalcone) ถูกสังเคราะห์ครั้งแรกโดยใช้ naringenin ซึ่งละลายใน 50% เกาะ แล้ว recrystallized ใช้เอทานอลละลาย ผสมทดสอบวิเคราะห์ CHI อยู่ 2 มล.ผสมปฏิกิริยา (50 มม.ทริสเรทติ้ง HCl, pH 7.4; 7.5 มิลลิกรัม mL−1BSA และ 50 มม. KCN) และ 0.75 mL ของเอนไซม์ดิบแยก (ลิสเตอร์ et al. 1996) หลังจากการเพิ่มของ chalcone mL−1tetrahydroxy 1 มิลลิกรัมใน 2 ethoxyethanol 0.05 มิลลิลิตร โซลูชัน incubated ที่ 34◦C สำหรับกิจกรรมจิ 30 นาทีโดยวัดเป็นการเปลี่ยนแปลงค่าที่ 381 nm กำหนดกิจกรรม CHI หนึ่งหน่วยเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นต้องเกิดการเปลี่ยนแปลง thousandth หนึ่งในค่าที่ 381 nm ต่อนาทีต่อมิลลิกรัมของอย่าง (น้ำหนักสด)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

CHI แช่แข็งเนื้อเยื่อใบ (0.3 กรัม) ทำให้เป็นเนื้อเดียวกันในขนาด 5 ml ของบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (ขนาด 50 มมค่า pH 7.8) ที่มีขนาด 50 มม ascorbate 0.2 มิลลิ EDTA, 18 มม mercap เอทานอลและ 2% (w / v) polyvinylpyrrolidone หลังจากเหวี่ยง homogenate 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 20 นาที, สารละลายที่ใช้สำหรับ phenylalanineammonialyase (PAL) และการวิเคราะห์เอนไซม์ CHI ขั้นตอนทั้งหมดถูกดำเนินการใน4◦C.Forวิเคราะห์ของกิจกรรม PAL ที่ผสมการทดสอบที่มีอยู่ 2.5 มิลลิลิตร 60 มิลลิบัฟเฟอร์ borate (pH 8.8 ที่มี 10 mm L-phenylalanine) และ 0.5 มิลลิลิตรของสารสกัดจากเอนไซม์ (แม็กคอลและวอล์คเกอร์ 1990) หลังจากบ่ม homogenate ที่34◦Cสำหรับ 30 นาทีปฏิกิริยาก็หยุดกับ 0.5 มิลลิลิตร 35% (w / v) trifluoroaceticacid homogenate ถูกปั่นแล้วที่ 5000 ×กรัม 5 มินโตะเอาโปรตีนเอทิลแอลกอฮอล์ กิจกรรม PAL ถูก spectrophoto วัดตวงวัดโดยการอ่านการดูดกลืนแสงที่ 290 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของกิจกรรม PAL ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลง thousandth หนึ่งในการดูดกลืนแสงที่ 290 นาโนเมตรต่อมิลลิกรัม minper ของกลุ่มตัวอย่าง (น้ำหนักสด) สำหรับการวิเคราะห์ของกิจกรรมไค, 2, 4,4? 6? -tetrahydroxy Chal-cone (naringenin chalcone) เป็นครั้งแรกที่สังเคราะห์โดยใช้ naringenin ซึ่งถูกละลายใน 50% KOH แล้ว recrystallized ใช้เอทานอลในน้ำ ส่วนผสมการทดสอบสำหรับการวิเคราะห์ CHI มี 2 มิลลิลิตรผสมปฏิกิริยา (ขนาด 50 มม Tris-HCl ค่า pH 7.4; 7.5 มิลลิกรัม ML-1BSA และขนาด 50 มม KCN). และ 0.75 มลสารสกัดเอนไซม์ (Lister et al, 1996 ) หลังจากที่นอกเหนือจาก 0.05 มิลลิลิตร 1 มิลลิกรัม chalcone ML-1tetrahydroxy ใน 2 ethoxyethanol, การแก้ปัญหาที่ถูกบ่มที่34◦Cเป็นเวลา 30 นาที กิจกรรม CHI วัดการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 381 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของกิจกรรม CHI ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลง thousandth หนึ่งในการดูดกลืนแสงที่ 381 นาโนเมตรต่อนาทีต่อมิลลิกรัมของกลุ่มตัวอย่าง (น้ำหนักสด)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ชิ เนื้อเยื่อใบแช่แข็ง ( 0.3 กรัม ) เป็นโฮโม 5 มิลลิลิตร โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 50 มม. , pH 7.8 ) ที่มี จาก 50 mm , 0.2 mM EDTA 18 มม. mercap เอทานอลและ 2% ( w / v ) พอลิวินิลไพร์โรลิโดน . หลังจากการแยกสารที่ 12000 ×กรัม นาน 20 นาที นำมาใช้สำหรับ phenylalanineammonialyase ( PAL ) และไคเอนไซม์เป็นองค์ประกอบ ขั้นตอนที่ 4 การ◦ c.for การวิเคราะห์กิจกรรมเพื่อน ( ส่วนผสมที่มีอยู่ 2.5 มล. 60 มม. บอเรตบัฟเฟอร์ ( พีเอช 8.8 ที่มี 10 มิลฟีนิลอะลา ) และ 0.5 มิลลิลิตรเอนไซม์สกัด ( McCallum และวอล์คเกอร์ , 2533 ) หลังจากการแยกเพาะ อายุ 34 ◦ C เป็นเวลา 30 นาที ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดด้วย 0.5 ml 35 % ( w / v ) trifluoroaceticacid . โดยแยกเป็นระดับที่ 5 × g 5 มินโตะเอาโปรตีนใช้ . กิจกรรมเพื่อนคือ spectrophoto ชั่งตวงวัดวัดโดยการอ่านค่าการดูดกลืนแสงที่ 290 nm . หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเพื่อนถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นเพื่อให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในหนึ่งพันค่าการดูดกลืนแสงที่ 290 nm ต่อ minper มิลลิกรัมของตัวอย่าง ( น้ำหนักสด ) สำหรับการวิเคราะห์กิจกรรมไค 2,4,4,6-tetrahydroxy ชัลโคน ( naringenin chalcone ) เป็นครั้งแรกที่ได้ใช้ naringenin ซึ่งละลายได้ใน 50 เกาะ แล้ว recrystallized โดยใช้สารละลายเอทานอล ส่วนผสม ( สำหรับการวิเคราะห์ไคที่มีอยู่ 2 มิลลิลิตรปฏิกิริยาผสม ( 50 มม. โดยกรดไฮโดรคลอริก pH 7.4 ; มก 7.5 ml − 1bsa ; 50 มม. kcn ) และ 0.75 มิลลิลิตรเอนไซม์สกัดหยาบ ( Lister et al . , 1996 ) หลังจากเติม 0.05 มิลลิลิตร 1 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร− 1tetrahydroxy chalcone ใน 2-ethoxyethanol ทางแก้คือ บ่มที่ 34 ◦ C เป็นเวลา 30 นาที ชี กิจกรรมวัดคือการเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 381 nm . หน่วยหนึ่งของกิจกรรมชิถูกกำหนดไว้เป็นยอดเงินของเอนไซม์ต้องก่อให้เกิดหนึ่งในพันส่วนเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงที่ 381 nm ต่อนาทีต่อมิลลิกรัมของตัวอย่าง ( น้ำหนักสด )