Sets of diagnostic Southern blots a

Sets of diagnostic Southern blots are presented in Fig. 2
and demonstrate that the in vitro deletions were correctly
shuttled into the corresponding histone loci. In the copy-I
results of Fig. 2 A, for example, the Hind III digestions of
whole genome DNA from wild-type and copy-II deletion
strains show the normal 6.8-kb copy-I restricton fragment
when probed with Sc191. However, in the copy-I deletion
strain this fragment is ,~2 kb smaller. The other restriction
enzyme digestions in Fig. 2 A show that the deletion spans
the H3- and H4-transcribed sequences and that a new Eco
RI linker has been inserted at the site of the deletion. Since
the Sc191 fragment used as the probe in Fig. 2 A contains the
H3 and H4 coding sequences, it also crosshybridizes with
the coding sequences of the copy-II locus. These copy-II
fragments are present in the DNA digests from wild-type and
copy-I deletion strains, but are absent in the copy-II deletion
strain indicating that the coding sequences are missing from
the putative copy-II deletion. Positive evidence for the deletion
is presented in Fig. 2 B. The hybridization probe in this
case was the Sc218 fragment that is specific for the copy-II
downstream sequences. In the DNA from the copy-II deletion
strain the normal 3.5-kb Sc2ff/Eco RI fragment is fused
with an H3-distal fragment by the deletion to a give a 9.0-kb
fragment seen in the Eco RI digestions, while it is truncated
with the new Barn HI linker at the site of the deletion to give
a 3.0-kb fragment seen in the Eco RI-Bam HI double digestions.
Thus, haploids containing deletions of either the copy-I or
the copy-II histone H3-H4 gene pairs were successfully constructed.
If deletion of either the copy-I or copy-II genes had
been lethal, dissection of the pink variant diploids would
have produced two live white spore colonies and two dead
spores from the segregants with the deletion chromosome.
We conclude that the copy-I and copy-II histone H3-H4 loci
are functionally redundant; the presence of either region
alone is sufficient for cell viability. This is in agreement with
the results for disruption of the duplicated H2A-H2B loci
(27, 39).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชุดวินิจฉัยภาคใต้จัดแสดงในรูป 2และแสดงให้เห็นว่า การลบในหลอดทดลองได้อย่างถูกต้องshuttled เป็น loci ฮิสโตนที่สอดคล้องกัน ในการคัดลอก-ฉันผลของ 2 A รูป เช่น digestions III การรักษาของทั้งพันธุดีเอ็นเอจากการลบสำเนาที่สองและป่าชนิดสายพันธุ์ที่แสดงสำเนาปกติ 6.8-kb-ฉันส่วน restrictonเมื่อพิสูจน์ ด้วย Sc191 อย่างไรก็ตาม ในการคัดลอก-ฉันลบสายพันธุ์ที่ส่วนนี้ได้ เล็ก ~ 2 kb ข้อจำกัดอื่น ๆdigestions เอนไซม์ในรูป 2 A แสดงว่า การลบครอบคลุมลำดับการทับศัพท์ H3 และ H4 และที่โคใหม่เชื่อมโยงข้อมูล RI ได้ถูกแทรกในเว็บไซต์ของการลบ ตั้งแต่ส่วน Sc191 ที่ใช้เป็นโพรบในรูป 2 A ประกอบด้วยการลำดับรหัส H3 และ H4 ได้ มันยัง crosshybridizes ด้วยลำดับที่รหัสของโลกัสโพล II สำเนา เหล่านี้ที่สองสำเนากระจายอยู่ในดีเอ็นเอที่ถูกย่อยด้วยจากชนิดของป่า และสำเนา-ฉันลบสายพันธุ์ แต่มีขาดในการลบสำเนาที่สองบ่งชี้ว่า ลำดับการเข้ารหัสหายไปจากสายพันธุ์การอ้างว่าฝาสำเนา-II ลบ หลักฐานแสดงการบวกการลบในรูป 2 B. โพรบ hybridization ในการนี้กรณีถูกส่วน Sc218 ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับสำเนา-IIลำดับปลายน้ำ ในดีเอ็นเอจากการลบสำเนาที่สองเป็นการผสมผสานสายพันธุ์ Sc2ff/Eco RI ส่วนปกติของ 3.5 kbกับ H3 ปลายแยกส่วน โดยการลบเพื่อให้เป็น 9.0-kbเห็นใน digestions Eco RI แยกส่วนในขณะที่มันถูกตัดทอนมี linker HI ยุ้งข้าวใหม่ที่เว็บไซต์ของการลบให้ส่วน 3.0 กิโลที่เห็นใน digestions คู่ Eco RI-Bam HIHaploids ดังนั้น ประกอบด้วยการลบสำเนาอย่างใดอย่างหนึ่ง-ฉัน หรือเรียบร้อยแล้วมีการก่อสร้างคู่ยีนของฮิสโตน H3 H4 II สำเนาถ้าการลบสำเนาอย่างใดอย่างหนึ่ง-ฉันหรือสำเนา-II มียีนรับยุทธภัณฑ์ ของ diploids แปรสีชมพูจะมีผลิตสปอร์สีขาวสดสองอาณานิคมและตายสองราจาก segregants กับโครโมโซมการลบเราสรุปที่สำเนา-I และ II สำเนา loci ฮิสโตน H3 H4มีหน้าที่ซ้ำซ้อน ของภูมิภาคใดคนเดียวเพียงพอสำหรับชีวิตเซลล์ นี่คือสอดคล้องผลลัพธ์สำหรับการหยุดชะงักของ loci H2A H2B ซ้ำ(27, 39)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ชุด blots ภาคใต้วินิจฉัยจะถูกนำเสนอในรูป 2
และแสดงให้เห็นว่าการลบในหลอดทดลองได้อย่างถูกต้องถูก
มอบหมายให้เข้าไปในตำแหน่งสโตนที่สอดคล้องกัน ในสำเนา-I
ผลของรูป 2 ตัวอย่างเช่นหลังที่สามย่อยของ
ดีเอ็นเอทั้งจีโนมจากป่าชนิดและสำเนา-II ลบ
สายพันธุ์แสดงปกติ 6.8 KB สำเนา-I restricton ชิ้นส่วน
เมื่อตรวจสอบกับ Sc191 อย่างไรก็ตามในการลบสำเนาฉัน
เครียดชิ้นส่วนนี้เป็น ~ 2 KB ที่มีขนาดเล็ก อีกข้อ จำกัด
การย่อยของเอนไซม์ในรูป 2 แสดงให้เห็นว่าการลบครอบคลุม
H3- และ H4-คัดลอกลำดับและที่ใหม่ Eco
ลิงเกอร์ RI ได้รับการแทรกที่เว็บไซต์ของการลบ ตั้งแต่
ส่วน Sc191 ใช้เป็น probe ในมะเดื่อ 2 มี
H3 H4 และลำดับการเขียนโปรแกรมก็ยัง crosshybridizes กับ
ลำดับการเข้ารหัสของสถานทีสำเนา-II เหล่านี้สำเนา-II
ชิ้นส่วนที่มีอยู่ในดีเอ็นเอย่อยสลายจากป่าชนิดและ
คัดสายพันธุ์ที่ผมลบ แต่จะไม่อยู่ในการลบสำเนา-II
ความเครียดแสดงให้เห็นว่าลำดับการเข้ารหัสจะหายไปจาก
สมมุติลบสำเนา-II หลักฐานในเชิงบวกสำหรับการลบ
จะถูกนำเสนอในรูป 2 บีสอบสวนการผสมพันธุ์ในครั้งนี้
กรณีที่เป็นส่วน Sc218 ที่เป็นเฉพาะสำหรับสำเนา-II
ลำดับปลายน้ำ ใน DNA จากการลบสำเนาที่สอง
สายพันธุ์ปกติ 3.5 KB Sc2ff / Eco RI ชิ้นส่วนผสม
กับชิ้นส่วน H3-ปลายโดยการลบที่จะให้ 9.0 กิโล
ชิ้นส่วนที่เห็นในการย่อย Eco RI ในขณะที่มันจะถูกตัดทอน
กับใหม่ลิงเกอร์ Barn HI ที่เว็บไซต์ของการลบที่จะให้
ส่วน 3.0 KB เห็นในการย่อยคู่ Eco RI-ปัง HI.
ดังนั้นข้าวโพดที่ regenerate มีการลบของทั้งสำเนา-I หรือ
สำเนา-II สโตน H3-H4 คู่ยีนถูกสร้างขึ้นประสบความสำเร็จ.
หากการลบทั้งสำเนา-I หรือยีนคัดลอก-II ได้
รับการตายผ่าของ diploids ตัวแปรสีชมพูจะ
ได้มีการผลิตทั้งสองสดอาณานิคมของสปอร์สีขาวและสองตาย
สปอร์จากลูกผสมที่มีโครโมโซมลบ.
เรา สรุปได้ว่าการคัดลอกสำเนา I และ-II สโตน H3-H4 ตำแหน่ง
ซ้ำซ้อนหน้าที่; การปรากฏตัวของภูมิภาคอย่างใดอย่างหนึ่ง
เพียงอย่างเดียวก็เพียงพอแล้วสำหรับชีวิตของเซลล์ นี้อยู่ในข้อตกลงกับ
ผลลัพธ์ของการหยุดชะงักของตำแหน่งซ้ำ H2A-H2B
(27, 39)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ชุดตรวจวินิจฉัย blots แสดงในรูปที่ 2 ภาคใต้และแสดงให้เห็นได้ในหลอดทดลองลบได้อย่างถูกต้องshuttled ในโลไซฮิสโตนที่สอดคล้องกัน ใน copy-iจากรูปที่ 2 เป็น ตัวอย่าง digestions Hind III ของทั้งจีโนมดีเอ็นเอจากยา 2 ลบและคัดลอกสายพันธุ์ที่แสดงปกติ 6.8-kb copy-i restricton ส่วนเมื่อตรวจสอบ sc191 . อย่างไรก็ตาม ในการลบ copy-iส่วนนี้เป็นสายพันธุ์ , ~ 2 กิโลเล็ก ข้อกำหนดอื่น ๆเอนไซม์ digestions ในรูปที่ 2 แสดงการขยายที่ส่วน H3 และ H4 ถ่ายทอดลำดับและที่สิ่งแวดล้อมใหม่ริ ลิงเกอร์ มีแทรกอยู่ในเว็บไซต์ของการลบ ตั้งแต่การ sc191 เบสใช้เป็น probe ในรูปที่ 2 ประกอบด้วยH3 H4 นะครับ และก็ยัง crosshybridizes กับลำดับการเขียนลำดับของการคัดลอก 2 ตน . เหล่านี้คัดลอก IIชิ้นส่วนอยู่ในดีเอ็นเอย่อยจากของและcopy-i การลบสายพันธุ์ แต่ไม่อยู่ในเล่ม 2 .สายพันธุ์ที่ระบุว่ารหัสลำดับจะหายไปจากคัดลอกซึ่ง 2 ลบ . หลักฐานที่เป็นบวกสำหรับการลบที่แสดงในรูปที่ 2 ข. hybridization probe ในนี้กรณีเป็น sc218 ชิ้นส่วนที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการคัดลอก IIลําดับที่ปลายน้ำ ในดีเอ็นเอที่ได้จากการคัดลอกการลบ IIความเครียดปกติ 3.5-kb sc2ff / Eco RI ชิ้นส่วนประกอบกับ H3 ส่วนโดยการลบส่วนปลายเพื่อให้ 9.0-kbส่วนที่เห็นใน Eco RI digestions ในขณะที่มันเป็นปลายตัดกับใหม่บ้านสวัสดีโปรแกรมเชื่อมโยงที่เว็บไซต์ของลบให้เป็นชิ้นส่วนที่เห็นใน 3.0-kb Eco RI แบมไงคู่ digestions .ดังนั้น haploids ที่มีทั้ง copy-i หรือการลบสำเนาที่สองช่วย h3-h4 ยีนคู่ได้สำเร็จสร้างถ้าลบทั้ง copy-i หรือคัดลอก 2 ยีนได้การถึงแก่ชีวิตได้ การชำแหละสีชมพูจะแปร Diploidsได้ผลิตสองสดอาณานิคมและสองศพสีขาว สปอร์สปอร์จาก segregants กับการลบโครโมโซมเราสรุปได้ว่า copy-i และคัดลอก II ช่วย h3-h4 ตามลำดับมีการทำงานซ้ำซ้อน ; การปรากฏตัวของทั้งภูมิภาคคนเดียว คือ เพียงพอสำหรับเซลล์ . นี้เป็นข้อตกลงกับผลการ h2a-h2b ของภาพตามลำดับ( 27 , 39 )