Materials and MethodsViroid source

Materials and Methods
Viroid source and cDNA synthesis. A chrysanthemum
showing distinct stunting symptoms was collected from a
greenhouse in 2011, in Chung-Nam province, Korea. To
detect CSVd infection from the diseased chrysanthemum
plant, total RNA was extracted from 5 g of frozen
(–80o
C) leaves of the infected chrysanthemum using
Plant RNeasy Mini kit (Qiagen, USA), according to the
manufacturer’s instructions. Based on the sequences of
CSVd isolate K1 (Genbank accession no. AF394452),
One-step RT-PCR analysis was carried out to synthesize
full-length cDNA of CSVd using CSVd-specific primers
[CSVd-For: 5'-aaagaaatgaggcgaagaag-3' and CSVdRev:
5'-ttctttcaaagcagcagggt-3'], as described previously
(Chung et al., 2001). The thermo-cycling conditions were
as follows: 60 min at 50°C for reverse transcription (RT),
5 min at 95o
C (1 cycle), 94o
C, 30 s, 53o
C, 30 s and 72o
C,
30 s (40 cycles), and a final extension at 72o
C for 7 min.
RT-PCR product was analyzed in 1.2% agarose gel and
visualized after soaking in ethidium bromide solution.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการไวรอยด์สังเคราะห์ cDNA และแหล่ง ดอกเบญจมาศเป็นแสดงอาการคนแคระแตกต่างรวบรวมจากการเรือนกระจกใน 2011 ในจังหวัดน้ำชุง เกาหลี ถึงตรวจหาการติดเชื้อ CSVd จากดอกเบญจมาศเป็นโรคพืช รวม RNA ถูกแยกจาก 5 กรัมของแช่แข็ง(-80oค) ใบของเบญจมาศติดเชื้อโดยใช้พืชชุด RNeasy Mini (Qiagen สหรัฐอเมริกา), ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ตามลำดับของCSVd แยก K1 (Genbank ทะเบียนไม่ AF394452),วิเคราะห์ RT-PCR ขั้นดำเนินการสังเคราะห์ความยาวเต็ม cDNA ของ CSVd โดยใช้ไพรเมอร์ CSVd เฉพาะ[CSVd-สำหรับ: 5'-aaagaaatgaggcgaagaag-3' และ CSVdRev:5'-ttctttcaaagcagcagggt-3'] ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้(Chung et al. 2001) สภาพความร้อนขี่จักรยานดังนี้: 60 นาทีที่ 50° C สำหรับการถอดรหัสย้อนกลับ (RT),5 นาทีที่ 95oC (1 รอบ), 94oC, 30 s, 53oC, 30 s และ 72oC30 s (40 รอบ), และส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายที่ 72oC เป็นเวลา 7 นาทีใน 1.2% agarose เจลผลิตภัณฑ์ RT-PCR และแสดงเป็นภาพหลังจากแช่ในโซลูชันโบรไมด์ ethidium

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
ที่มาไวรอยด์และการสังเคราะห์ cDNA เบญจมาศ
แสดงอาการแคระแกร็นที่แตกต่างกันที่ถูกเก็บรวบรวมจาก
เรือนกระจกในปี 2011 ในจังหวัดชุงนัมเกาหลี เพื่อ
ตรวจหาการติดเชื้อ CSVd จากดอกเบญจมาศโรค
พืช RNA ทั้งหมดถูกสกัดจาก 5 กรัมแช่แข็ง
(-80o
C) ใบของดอกเบญจมาศที่ติดเชื้อโดยใช้
ชุดพืช RNeasy มินิ (Qiagen, สหรัฐอเมริกา) ตาม
คำแนะนำของผู้ผลิต ขึ้นอยู่กับลำดับของ
CSVd แยก K1 (. Genbank ภาคยานุวัติไม่มี AF394452)
หนึ่งในขั้นตอนการวิเคราะห์ RT-PCR ได้ดำเนินการในการสังเคราะห์
cDNA ยาวเต็มรูปแบบของการใช้ CSVd CSVd เฉพาะไพรเมอร์
[CSVd-สำหรับ: 5'-aaagaaatgaggcgaagaag-3 และ CSVdRev:
5'-ttctttcaaagcagcagggt-3 '] ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
(. ชุง, et al, 2001) เงื่อนไข Thermo ขี่จักรยานเป็น
ดังนี้ 60 นาทีที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลาถอดรหัสแบบย้อนกลับ (RT)
5 นาทีที่ 95o
C (1 รอบ) 94o
C, 30 วินาที, 53o
C, 30 และ 72o
C,
30 S ( 40 รอบ) และขยายสุดท้ายที่ 72o
C เป็นเวลา 7 นาที.
ผลิตภัณฑ์ RT-PCR วิเคราะห์ใน agarose gel ที่ 1.2% และ
มองเห็นหลังจากแช่ในสารละลายโบรไมด์ ethidium

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการแหล่งที่มา ไวรอยด์และการสังเคราะห์ cDNA . เป็นดอกเบญจมาศแสดงอาการแตกต่างกัน stunting รวบรวมจากเรือนกระจกใน 2011 , ในจังหวัดชุงนัม ประเทศเกาหลีใต้ เพื่อตรวจหาการติดเชื้อจากโรค csvd เก๊กฮวยพืช , อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจาก 5 กรัมแช่แข็ง( 80o จำกัดc ) ใบของดอกเบญจมาศที่ติดเชื้อโดยใช้ชุดมินิ rneasy พืช ( QIAGEN , USA ) ไปตามคำแนะนำของผู้ผลิต ขึ้นอยู่กับลำดับของcsvd แยก K1 ( ขนาดเข้าไม่ af394452 )หนึ่งขั้นตอน RT-PCR วิเคราะห์สังเคราะห์ยีนเต็มตัวของ csvd ใช้ไพรเมอร์ที่จำเพาะ csvd[ csvd : 5 " - aaagaaatgaggcgaagaag-3 " และ csvdrev :5 " - ttctttcaaagcagcagggt-3 " ] ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้( ชอง et al . , 2001 ) สภาพจักรยานเทอร์โม คือดังนี้ : 60 นาทีที่ 50 ° C ย้อนกลับถอดความ ( RT ) ,5 นาทีที่ 95o94o C ( 1 รอบ )30 , 53o Cอุณหภูมิ 30 และ 72oC30 วินาที ( 40 รอบ ) และประเภทสุดท้ายที่ 72oองศาเซลเซียส เป็นเวลา 7 นาทีสินค้านี้ถูกวิเคราะห์ใน 1.2 % เจลและปรากฏการณ์หลังการแช่ในสารละลายโบรไมด์คู่ .