- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Materials and methods2.1. Organism
Materials and methods
2.1. Organism and growth conditions
Bacillus spp., potent protease (SBP-114) and lipase (RK-2) producers
were isolated from the soil by enrichment and selective
screening on skim milk agar plate and tributyrin agar plate
respectively. These strains were identified by MIDILABS (New York,
DE, USA) as Bacillus licheniformis and B. subtilus based on 500-bp
analysis and on the partial 16S rRNA gene alignment with the Gene
Bank database (ncbi, 2012) (). The organisms were cultivated at
37 1
C in a bacteriological incubator for 24 h and subsequently
maintained at 4
C in a B.O.D incubator (Yorko, Deluxe-10) by
routine transfers on nutrient agar slants at pH value of 7.0.
2.2. Enzyme production in a bioreactor
The enzymes used for dehairing (protease) and degreasing
(lipase) were produced and optimized in a 300 L stirred bioreactor
(Scigenics, India) with a working volume of 220 L, separately. The
modified base medium (pH-7) used for protease production contained
(gL
K
2
HPO
4
1
): wheat bran (2); soybean meal (15); KH
(3.0); Na
2
SO
4
(2.0); and MgSO
4
.7H
O (0.10). The medium
used for lipase production contained (g/L): sunflower oil (2);
glucose (2); peptone (15); NH
4
NO
3
2
2
(3.0); and MgSO
O
(0.8 mM) (pH 8). These media were sterilized separately in situ at
121
C for 20 min and inoculated with 2.0% of the seed inoculum
(nutrient broth) (OD
660nm
PO
y 0.600). Fermentation for protease
production was carried out at 37 1
4
4
(1.0);
.7H
C for 24 h and for lipase
2
30 1
C for 36 h. Rest of the parameters remained same for both
the enzyme production. The impeller speed was initially adjusted to
350 rpm and compressed sterile air was sparged into the medium at
constant rate of 0.6-
The dissolved oxygen was not allowed to
fall below a fixed set point of 40% by cascading in both the cases.
VVM.
Samples were withdrawn periodically at 2 h intervals and analysed
for protease and lipase production. The fermentation parameters,
such as temperature, pH, dissolved oxygen and airflow
were continuously monitored using microprocessor-controlled
probes. The fermentation broth was centrifuged at 8000 g for
20 min at 4
C to obtain cell free broth, containing lipase and
protease respectively. The cell pellet was discarded and the crude
enzyme was used for dehairing and degreasing experiments.
The crude protease and lipase rich broth were further concentrated
four times separately by ultrafiltration (using Spintrex) using
10 kDa MWCO membrane cartridge.
2.2.1. Protease assay
The protease activity was measured by the procedure as
described by Meyers and Ahearn (1977) with some modifications
(Saran et al., 2007). One unit of protease was equivalent to the
amount of enzyme required to release 1
mg of tyrosine per mL per
minute under standard assay conditions.
2.2.2. Lipase assay
Lipase activity in the culture filtrate was determined spectro-
photometrically using p-nitrophenyl palmitate as the substrate
using the procedure of Winkler and Stuckman (1979). One International
Unit (IU) of lipase activity was defined as the amount of
enzyme required to release 1
mMofp-nitro phenol per mL per
minute under the standard assay conditions.
2.3. Internally quenched fluorescent substrate specific method
In order to further confirm that B. licheniformis protease is
subtilisin-like serine protease with low-collagenase activity, the
concentrated protease samples were evaluated by internally
quenched fluorescent method. This method is based on the use of
designed, internally quenched fluorescent ‘universal’ protease
substrates, which contain several specific cleavage sites. Application
of a combination of fluorescence and mass spectral analysis
permits the profiling of proteolysis.
2.4. Dehairing & degreasing of animal skins and hides
2.4.1. Preparation of animal skins and hides
Goat skin, sheep skin and buffalo hide were obtained from the
local slaughter house. For storage, the skins were rubbed with twice
their weight in salts and stored in cold room at 4
C for 2e6 months
to prevent putrefaction. The skins were cut to a size of 1 sq. ft
(0.093 m
2
) for experiments. The salted skins and hides were
soaked, for a period of 6 h in water to eliminate salt, blood, and dirt
and to gain moisture lost during curing process.
2.4.2. Experimental
The paste method was followed in all the studies for the beam
house operations of the leather industry (Fig. 4A,B). The skins/hides
after application of enzymes were loosely covered with single layer
of polythene sheets and kept at room temperature (30 2
C) for
24 h. Dehairing and degreasing were checked periodically up to
24 h. To check the dehairing potential, hair was removed using a
blunt end spatula. The efficacy of the dehairing enzyme at different
parameters (temperatures, pH, and enzyme concentrations)
was optimized for 100% dehairing. The scale of dehairing was
observed as follows: a) þ slight dehairing, b) þþ moderate
2.1. Organism and growth conditions
Bacillus spp., potent protease (SBP-114) and lipase (RK-2) producers
were isolated from the soil by enrichment and selective
screening on skim milk agar plate and tributyrin agar plate
respectively. These strains were identified by MIDILABS (New York,
DE, USA) as Bacillus licheniformis and B. subtilus based on 500-bp
analysis and on the partial 16S rRNA gene alignment with the Gene
Bank database (ncbi, 2012) (). The organisms were cultivated at
37 1
C in a bacteriological incubator for 24 h and subsequently
maintained at 4
C in a B.O.D incubator (Yorko, Deluxe-10) by
routine transfers on nutrient agar slants at pH value of 7.0.
2.2. Enzyme production in a bioreactor
The enzymes used for dehairing (protease) and degreasing
(lipase) were produced and optimized in a 300 L stirred bioreactor
(Scigenics, India) with a working volume of 220 L, separately. The
modified base medium (pH-7) used for protease production contained
(gL
K
2
HPO
4
1
): wheat bran (2); soybean meal (15); KH
(3.0); Na
2
SO
4
(2.0); and MgSO
4
.7H
O (0.10). The medium
used for lipase production contained (g/L): sunflower oil (2);
glucose (2); peptone (15); NH
4
NO
3
2
2
(3.0); and MgSO
O
(0.8 mM) (pH 8). These media were sterilized separately in situ at
121
C for 20 min and inoculated with 2.0% of the seed inoculum
(nutrient broth) (OD
660nm
PO
y 0.600). Fermentation for protease
production was carried out at 37 1
4
4
(1.0);
.7H
C for 24 h and for lipase
2
30 1
C for 36 h. Rest of the parameters remained same for both
the enzyme production. The impeller speed was initially adjusted to
350 rpm and compressed sterile air was sparged into the medium at
constant rate of 0.6-
The dissolved oxygen was not allowed to
fall below a fixed set point of 40% by cascading in both the cases.
VVM.
Samples were withdrawn periodically at 2 h intervals and analysed
for protease and lipase production. The fermentation parameters,
such as temperature, pH, dissolved oxygen and airflow
were continuously monitored using microprocessor-controlled
probes. The fermentation broth was centrifuged at 8000 g for
20 min at 4
C to obtain cell free broth, containing lipase and
protease respectively. The cell pellet was discarded and the crude
enzyme was used for dehairing and degreasing experiments.
The crude protease and lipase rich broth were further concentrated
four times separately by ultrafiltration (using Spintrex) using
10 kDa MWCO membrane cartridge.
2.2.1. Protease assay
The protease activity was measured by the procedure as
described by Meyers and Ahearn (1977) with some modifications
(Saran et al., 2007). One unit of protease was equivalent to the
amount of enzyme required to release 1
mg of tyrosine per mL per
minute under standard assay conditions.
2.2.2. Lipase assay
Lipase activity in the culture filtrate was determined spectro-
photometrically using p-nitrophenyl palmitate as the substrate
using the procedure of Winkler and Stuckman (1979). One International
Unit (IU) of lipase activity was defined as the amount of
enzyme required to release 1
mMofp-nitro phenol per mL per
minute under the standard assay conditions.
2.3. Internally quenched fluorescent substrate specific method
In order to further confirm that B. licheniformis protease is
subtilisin-like serine protease with low-collagenase activity, the
concentrated protease samples were evaluated by internally
quenched fluorescent method. This method is based on the use of
designed, internally quenched fluorescent ‘universal’ protease
substrates, which contain several specific cleavage sites. Application
of a combination of fluorescence and mass spectral analysis
permits the profiling of proteolysis.
2.4. Dehairing & degreasing of animal skins and hides
2.4.1. Preparation of animal skins and hides
Goat skin, sheep skin and buffalo hide were obtained from the
local slaughter house. For storage, the skins were rubbed with twice
their weight in salts and stored in cold room at 4
C for 2e6 months
to prevent putrefaction. The skins were cut to a size of 1 sq. ft
(0.093 m
2
) for experiments. The salted skins and hides were
soaked, for a period of 6 h in water to eliminate salt, blood, and dirt
and to gain moisture lost during curing process.
2.4.2. Experimental
The paste method was followed in all the studies for the beam
house operations of the leather industry (Fig. 4A,B). The skins/hides
after application of enzymes were loosely covered with single layer
of polythene sheets and kept at room temperature (30 2
C) for
24 h. Dehairing and degreasing were checked periodically up to
24 h. To check the dehairing potential, hair was removed using a
blunt end spatula. The efficacy of the dehairing enzyme at different
parameters (temperatures, pH, and enzyme concentrations)
was optimized for 100% dehairing. The scale of dehairing was
observed as follows: a) þ slight dehairing, b) þþ moderate
0/5000
วัสดุและวิธีการ2.1. สิ่งมีชีวิตและเจริญเติบโตออกซิเจนบาซิลลัส โปรติเอสมีศักยภาพ (SBP-114) และผลิตเอนไซม์ไลเปส (RK-2)แยกจากดิน โดยการเพิ่มคุณค่า และเลือกคัดกรองบนแผ่นวุ้นนมพร่องมันเนยและแผ่นวุ้น tributyrinตามลาดับ สายพันธุ์เหล่านี้ถูก identified โดย MIDILABS (นิวยอร์กเดอ สหรัฐอเมริกา) เป็นบาซิลลัส licheniformis และ B. subtilus อิง 500 bpวิเคราะห์และคล้องบางส่วน 16S rRNA ยีนมียีนฐานข้อมูลธนาคาร (ncbi, 2012) () สิ่งมีชีวิตที่ถูกปลูกที่37 1C ในตู้อบที่แบคทีเรีย สำหรับ 24 ชั่วโมง และในเวลาต่อมา4C ในตู้อบที่ B.O.D (Yorko, Deluxe-10) โดยโอนเป็นประจำบนอาหารวุ้นเอียงที่ค่า pH 7.02.2 การผลิตเอนไซม์ในถังปฏิกรณ์ชีวภาพแบบเอนไซม์ที่ใช้สำหรับ dehairing (น้ำย่อย) และไข(เอนไซม์ไลเปส) ผลิต และเพิ่มประสิทธิภาพในถังปฏิกรณ์ชีวภาพแบบ 300 L กวน(Scigenics อินเดีย) กับทำเสียงของ 220 L แยกต่างหาก การmodified ฐานกลาง (pH 7) ใช้สำหรับการผลิตโปรติเอสที่มีอยู่(gLK2HPO41): รำข้าวสาลี (2); กากถั่วเหลือง (15); KH(3.0); นา2ดังนั้น4(2.0); และ MgSO4.7HO (0.10) สื่อใช้สำหรับผลิตเอนไซม์ไลเปสที่มีอยู่ (กรัม/ลิตร): น้ำมัน sunflower (2);กลูโคส (2); peptone (15); NH4ไม่ใช่322(3.0); และ MgSOO(0.8 มม.) (pH 8) สื่อเหล่านี้ได้ผ่านการฆ่าเชื้อแยกต่างหากในแหล่งกำเนิดที่121C 20 นาที และ inoculated ร้อยละ 2.0 ของ inoculum เมล็ด(สารอาหารน้ำซุป) (OD660nmPOy 0.600) หมักสำหรับโปรติเอสการผลิตดำเนินการ 37 144(1.0);.7HC สำหรับ 24 ชม และเอนไซม์ไลเปส230 1C สำหรับ 36 เหลือพารามิเตอร์อยู่เดียวกันสำหรับทั้งสองการผลิตเอนไซม์ ความเร็วใบพัดเริ่มปรับปรุงการ350 rpm และบีบอัดอากาศที่ผ่านการฆ่าเชื้อคือ sparged เป็นสื่อที่คงอัตรา 0.6-ออกซิเจนละลายน้ำไม่ได้รับอนุญาตให้ลดลงต่ำกว่าจุดที่ตั้งใน fixed 40% โดยซ้อนในทั้งสองกรณีVVMถอนเป็นระยะ ๆ ในช่วงเวลา 2 ชม. และวิเคราะห์ตัวอย่างสำหรับการผลิตโปรติเอสและไลเปส พารามิเตอร์การหมักเช่นอุณหภูมิ pH ออกซิเจนละลาย และ airflowได้รับการดูแลโดยใช้ไมโครโปรเซสเซอร์ควบคุมรบ น้ำซุปหมักเป็นผลิตภัณฑ์ที่ 8000 กรัมสำหรับ20 นาทีที่ 4C รับเซลล์ซุปฟรี ที่ประกอบด้วยเอนไซม์ไลเปส และโปรติเอสตามลำดับ เม็ดเซลล์ถูกละทิ้ง และยังดิบเอนไซม์ถูกใช้สำหรับ dehairing และการทดลองไขโปรติเอสที่ดิบและน้ำซุปที่อุดมไปด้วยเอนไซม์ไลเปสได้ต่อไปเข้มข้นครั้งที่สี่แยก โดยใช้ ultrafiltration (ใช้ Spintrex)10 kDa MWCO เยื่อตลับ2.2.1. ทดสอบโปรติเอสกิจกรรมโปรติเอสโดยวัดจากกระบวนการเป็นอธิบาย โดยริสเมเยอร์สและ Ahearn (1977) กับ modifications บาง(Saran et al. 2007) หนึ่งหน่วยโปรติเอสได้เทียบเท่ากับการปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นต้องปล่อย 1มก.ของไทโรซีนต่อมิลลิลิตรต่อนาทีภายใต้สภาวะทดสอบมาตรฐาน2.2.2. เอนไซม์ไลเปส assayกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสใน filtrate วัฒนธรรมถูกกำหนดโตโฟโต-photometrically ใช้ p nitrophenyl palmitate เป็นพื้นผิวใช้ขั้นตอนของ Winkler และ Stuckman (1979) นานาชาติหนึ่งหน่วย (IU) กิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่จำเป็นต้องปล่อย 1ฟีนอลไนโต mMofp ต่อมิลลิลิตรต่อนาทีภายใต้สภาวะทดสอบมาตรฐาน2.3 ภายในดับ fluorescent พื้น specific วิธีเพื่อที่จะเพิ่มเติม confirm โปรติเอสที่ B. licheniformisโปรติเอสเหมือน subtilisin รอบเส้นใยประสาทกับกิจกรรม collagenase ต่ำ การตัวอย่างโปรติเอสที่เข้มข้นถูกประเมินโดยภายในดับ fluorescent วิธี วิธีนี้เป็นไปตามการใช้ตัวทดลองภายใน fluorescent 'สากล' โปรติเอส การออกแบบพื้นผิว ซึ่งประกอบด้วยหลายเว็บไซต์ความแตก specific แอพลิเคชันชุดของ fluorescence และการวิเคราะห์สเปกตรัมมวลอนุญาตให้ profiling ของ proteolysis2.4. Dehairing และไขของหนังสัตว์และหนัง2.4.1. เตรียมหนังสัตว์และหนังผิวของแพะ แกะผิวและควายซ่อนได้รับจากการศพในท้องถิ่น สำหรับเก็บ สกินถูกลูบกับสองในเกลือ และเก็บไว้ในห้องเย็นที่ 4C 2e6 เดือนเพื่อป้องกัน putrefaction สกินถูกตัดให้มีขนาด 1 ตารางฟุต(0.093 m2) สำหรับการทดลอง กินเค็มและซ่อนแช่ ระยะเวลา 6 ชม.ในน้ำเพื่อกำจัดเกลือ เลือด และสิ่งสกปรกและได้รับความชื้นที่สูญเสียในระหว่างกระบวนการบ่ม2.4.2. ทดลองวิธีการวางตามมาในการศึกษาสำหรับคานบ้านการดำเนินงานของอุตสาหกรรมเครื่องหนัง (รูปที่ 4A, B) สกิน/ซ่อนหลังจากแอพลิเคชันของเอนไซม์ได้หลวม ๆ คลุมชั้นเดียวpolythene แผ่น และเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (30 2ค) สำหรับ24 h. Dehairing และไขถูกตรวจสอบเป็นระยะ ๆ ถึง24 ชม การตรวจ dehairing อาจเกิดขึ้น ผมถูกเอาออกโดยใช้การโคนปลายทื่อ Efficacy ของเอนไซม์ dehairing ที่แตกต่างกันพารามิเตอร์ (อุณหภูมิ pH และความเข้มข้นของเอนไซม์)คือเหมาะสำหรับ dehairing 100% มาตราส่วนของ dehairing คือสังเกตดังนี้:) þเล็กน้อย dehairing ข) þþปานกลาง
การแปล กรุณารอสักครู่..
วัสดุและวิธีการ
2.1 สิ่งมีชีวิตและการเจริญเติบโตเงื่อนไข
Bacillus spp. น้ำย่อยที่มีศักยภาพ (SBP-114) และเอนไซม์ไลเปส (RK-2) ผู้ผลิต
ที่แยกได้จากดินโดยการเพิ่มปริมาณและเลือก
คัดกรองบนแผ่นวุ้นนมพร่องมันเนยและ tributyrin จานเลี้ยงเชื้อ
ตามลำดับ สายพันธุ์เหล่านี้ถูกระบุ Fi ed โดย MIDILABS (New York,
DE, USA) เป็น licheniformis Bacillus และ B subtilus บนพื้นฐาน 500 bp
วิเคราะห์และในส่วนการจัดตำแหน่งของยีน 16S rRNA กับยีน
ฐานข้อมูลธนาคาร (NCBI 2012) () สิ่งมีชีวิตที่ได้รับการปลูกฝังที่
37? 1
ซีในศูนย์บ่มเพาะแบคทีเรียเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและต่อมา
เก็บรักษาไว้ที่ 4
?
C ในที่ประชุมคณะกรรมการศูนย์บ่มเพาะ (Yorko, Deluxe-10) โดย
การโอนเงินเป็นประจำในอาหารเลี้ยงเชื้อ slants ที่ค่า pH 7.0.
? 2.2 การผลิตเอนไซม์ในระบบถังหมัก
เอนไซม์ที่ใช้ในการ dehairing (protease) และล้างไขมัน
(เอนไซม์ไลเปส) มีการผลิตและเพิ่มประสิทธิภาพใน 300 L หมักแบบกวน
(Scigenics อินเดีย) มีปริมาณการทำงานของ L 220 แยก
ฐาน Modi Fi เอ็ดกลาง (pH-7) ใช้สำหรับการผลิตเอนไซม์โปรติเอมี
(gL
K
2
HPO
4
1
): รำข้าวสาลี (2); กากถั่วเหลือง (15); KH
(3.0); Na
2
SO
4
(2.0); และ MgSO
4
.7H
O (0.10) สื่อที่
ใช้สำหรับการผลิตเอนไซม์ไลเปสที่มีอยู่ (g / L): ดวงอาทิตย์ FL Ower น้ำมัน (2);
กลูโคส (2); เปปโตน (15); NH
4
NO
3
2
2
(3.0); และ MgSO
O
(0.8 มิลลิเมตร) (pH? 8) สื่อเหล่านี้ได้ผ่านการฆ่าเชื้อที่แยกจากกันในแหล่งกำเนิดที่
121
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีและเชื้อด้วย 2.0% ของเชื้อเมล็ด
(สารอาหารน้ำซุป) (OD
?
660nm
PO
Y 0.600) หมักน้ำย่อย
ผลิตได้ดำเนินการที่ 37? 1
?
4
4
(1.0);
.7H
เซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและเอนไซม์ไลเปส
ที่ 2
วันที่ 30? 1
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 36 ชั่วโมง ส่วนที่เหลือของพารามิเตอร์ที่ยังคงเหมือนเดิมสำหรับทั้ง
การผลิตเอนไซม์ ความเร็วในการผลักดันการปรับขั้นต้น
350 รอบต่อนาทีและอัดอากาศผ่านการฆ่าเชื้อถูก sparged เข้ากลางที่
อัตราดอกเบี้ยคงที่ของ 0.6-
?
ออกซิเจนที่ละลายในน้ำไม่ได้รับอนุญาตที่จะ
ลดลงต่ำกว่า Fi คงจุด 40% ที่กำหนดโดยซ้อนในทั้งสองกรณี.
VVM
ตัวอย่างที่ถูกถอนออกเป็นระยะที่ 2 ช่วงเวลาชั่วโมงและวิเคราะห์
สำหรับโปรติเอสและเอนไซม์ไลเปสผลิต พารามิเตอร์หมัก
เช่นอุณหภูมิค่า pH, ปริมาณออกซิเจนละลายน้ำและอากาศ FL โอ๊ย
ถูกตรวจสอบอย่างต่อเนื่องโดยใช้ไมโครโปรเซสเซอร์ที่ควบคุม
ยานสำรวจ น้ำซุปหมักถูกหมุนเหวี่ยงที่ 8000 กรัมสำหรับ
20 นาทีที่ 4
C เพื่อให้ได้น้ำซุปฟรีมือถือที่มีเอนไซม์ไลเปสและ
โปรติเอสตามลำดับ เม็ดเซลล์ถูกทิ้งและน้ำมันดิบ
เอนไซม์ที่ใช้สำหรับ dehairing และการทดลองล้างไขมัน.
?
โปรติเอสมันดิบและน้ำซุปที่อุดมไปด้วยเอนไซม์ไลเปสมีความเข้มข้นอีก
ครั้งที่สี่แยกโดย ltration Fi พิเศษ (ใช้ Spintrex) โดยใช้
10 ตลับเมมเบรน kDa MWCO.
2.2.1 โปรติเอสทดสอบ
กิจกรรมโปรติเอสโดยวัดจากวิธีการที่
อธิบายโดยเมเยอร์สและ Ahearn (1977) กับบางไพเพอร์ Modi Fi
(สราญ et al., 2007) หนึ่งหน่วยของน้ำย่อยเป็นเทียบเท่ากับ
ปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการปล่อย 1
mg ของซายน์ต่อมิลลิลิตรต่อ
นาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน.
2.2.2 เอนไซม์ไลเปสทดสอบ
กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสใน ltrate วัฒนธรรม Fi ถูกกำหนด spectro-
photometrically ใช้ palmitate P-Nitrophenyl เป็นสารตั้งต้น
ที่ใช้ขั้นตอนของเคลอร์และ Stuckman นี้ (1979) หนึ่งระหว่าง
Unit (IU) ของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสเป็นนิยามปริมาณของ
เอนไซม์ที่จำเป็นในการปล่อย 1
mMofp-ไนโตรฟีนอลต่อมิลลิลิตรต่อ
นาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน.
2.3 ภายในดับชั้น uorescent ตั้งต้น speci วิธี Fi C
เพื่อ Con เพิ่มเติม Fi RM ว่า B. licheniformis น้ำย่อยเป็น
subtilisin เหมือนน้ำย่อยซีรีนที่มีฤทธิ์ต่ำคอลลาที่
ตัวอย่างน้ำย่อยเข้มข้นได้รับการประเมินโดยภายใน
ดับชั้นวิธี uorescent วิธีการนี้จะขึ้นอยู่กับการใช้งานของ
การออกแบบภายในชั้นดับ uorescent 'สากล' น้ำย่อย
พื้นผิวซึ่งมีหลายเว็บไซต์แตกแยก speci Fi C การประยุกต์ใช้
การรวมกันของ uorescence ลอริด้าและการวิเคราะห์สเปกตรัมมวล
อนุญาตให้ Fi Pro หลิงของ proteolysis.
2.4 dehairing และล้างไขมันของหนังสัตว์และซ่อน
2.4.1 การเตรียมการของหนังสัตว์และซ่อน
ผิวแพะแกะผิวและควายซ่อนที่ได้รับจาก
โรงฆ่าสัตว์ในท้องถิ่น สำหรับการจัดเก็บสกินที่ถูกถูด้วยสองครั้ง
น้ำหนักของพวกเขาในเกลือและเก็บไว้ในห้องเย็นที่อุณหภูมิ 4
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2e6 เดือน
เพื่อป้องกันไม่ให้เน่าเปื่อย สกินถูกตัดกับขนาดของ 1 ตาราง. ฟุต
(ม 0.093
2
?
) สำหรับการทดลอง สกินเค็มและซ่อนถูก
แช่เป็นเวลา 6 ชั่วโมงในน้ำเพื่อกำจัดเกลือในเลือดและสิ่งสกปรก
และความชื้นที่จะได้รับหายไปในระหว่างกระบวนการบ่ม.
2.4.2 ทดลอง
วิธีการวางตามมาในการศึกษาทั้งหมดสำหรับคาน
การดำเนินงานที่บ้านของอุตสาหกรรมเครื่องหนัง (รูป. 4A, B) สกิน / กลอง
หลังจากการประยุกต์ใช้เอนไซม์ถูกปกคลุมด้วยคับชั้นเดียว
ของแผ่นพลาสติกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (30? 2
C) สำหรับ
24 ชั่วโมง dehairing และล้างไขมันได้รับการตรวจสอบเป็นระยะถึง
24 ชั่วโมง ในการตรวจสอบที่มีศักยภาพ dehairing ผมจะถูกลบออกโดยใช้
ไม้พายปลายทู่ cacy Fi EF ของเอนไซม์ dehairing ที่แตกต่างกัน
พารามิเตอร์ (อุณหภูมิ pH และความเข้มข้นของเอนไซม์)
ได้รับการปรับให้เหมาะสมกับ 100% dehairing ขนาดของ dehairing ถูก
ตั้งข้อสังเกตดังนี้ก) TH dehairing เล็กน้อยข) þþปานกลาง
?
2.1 สิ่งมีชีวิตและการเจริญเติบโตเงื่อนไข
Bacillus spp. น้ำย่อยที่มีศักยภาพ (SBP-114) และเอนไซม์ไลเปส (RK-2) ผู้ผลิต
ที่แยกได้จากดินโดยการเพิ่มปริมาณและเลือก
คัดกรองบนแผ่นวุ้นนมพร่องมันเนยและ tributyrin จานเลี้ยงเชื้อ
ตามลำดับ สายพันธุ์เหล่านี้ถูกระบุ Fi ed โดย MIDILABS (New York,
DE, USA) เป็น licheniformis Bacillus และ B subtilus บนพื้นฐาน 500 bp
วิเคราะห์และในส่วนการจัดตำแหน่งของยีน 16S rRNA กับยีน
ฐานข้อมูลธนาคาร (NCBI 2012) () สิ่งมีชีวิตที่ได้รับการปลูกฝังที่
37? 1
ซีในศูนย์บ่มเพาะแบคทีเรียเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและต่อมา
เก็บรักษาไว้ที่ 4
?
C ในที่ประชุมคณะกรรมการศูนย์บ่มเพาะ (Yorko, Deluxe-10) โดย
การโอนเงินเป็นประจำในอาหารเลี้ยงเชื้อ slants ที่ค่า pH 7.0.
? 2.2 การผลิตเอนไซม์ในระบบถังหมัก
เอนไซม์ที่ใช้ในการ dehairing (protease) และล้างไขมัน
(เอนไซม์ไลเปส) มีการผลิตและเพิ่มประสิทธิภาพใน 300 L หมักแบบกวน
(Scigenics อินเดีย) มีปริมาณการทำงานของ L 220 แยก
ฐาน Modi Fi เอ็ดกลาง (pH-7) ใช้สำหรับการผลิตเอนไซม์โปรติเอมี
(gL
K
2
HPO
4
1
): รำข้าวสาลี (2); กากถั่วเหลือง (15); KH
(3.0); Na
2
SO
4
(2.0); และ MgSO
4
.7H
O (0.10) สื่อที่
ใช้สำหรับการผลิตเอนไซม์ไลเปสที่มีอยู่ (g / L): ดวงอาทิตย์ FL Ower น้ำมัน (2);
กลูโคส (2); เปปโตน (15); NH
4
NO
3
2
2
(3.0); และ MgSO
O
(0.8 มิลลิเมตร) (pH? 8) สื่อเหล่านี้ได้ผ่านการฆ่าเชื้อที่แยกจากกันในแหล่งกำเนิดที่
121
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาทีและเชื้อด้วย 2.0% ของเชื้อเมล็ด
(สารอาหารน้ำซุป) (OD
?
660nm
PO
Y 0.600) หมักน้ำย่อย
ผลิตได้ดำเนินการที่ 37? 1
?
4
4
(1.0);
.7H
เซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงและเอนไซม์ไลเปส
ที่ 2
วันที่ 30? 1
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 36 ชั่วโมง ส่วนที่เหลือของพารามิเตอร์ที่ยังคงเหมือนเดิมสำหรับทั้ง
การผลิตเอนไซม์ ความเร็วในการผลักดันการปรับขั้นต้น
350 รอบต่อนาทีและอัดอากาศผ่านการฆ่าเชื้อถูก sparged เข้ากลางที่
อัตราดอกเบี้ยคงที่ของ 0.6-
?
ออกซิเจนที่ละลายในน้ำไม่ได้รับอนุญาตที่จะ
ลดลงต่ำกว่า Fi คงจุด 40% ที่กำหนดโดยซ้อนในทั้งสองกรณี.
VVM
ตัวอย่างที่ถูกถอนออกเป็นระยะที่ 2 ช่วงเวลาชั่วโมงและวิเคราะห์
สำหรับโปรติเอสและเอนไซม์ไลเปสผลิต พารามิเตอร์หมัก
เช่นอุณหภูมิค่า pH, ปริมาณออกซิเจนละลายน้ำและอากาศ FL โอ๊ย
ถูกตรวจสอบอย่างต่อเนื่องโดยใช้ไมโครโปรเซสเซอร์ที่ควบคุม
ยานสำรวจ น้ำซุปหมักถูกหมุนเหวี่ยงที่ 8000 กรัมสำหรับ
20 นาทีที่ 4
C เพื่อให้ได้น้ำซุปฟรีมือถือที่มีเอนไซม์ไลเปสและ
โปรติเอสตามลำดับ เม็ดเซลล์ถูกทิ้งและน้ำมันดิบ
เอนไซม์ที่ใช้สำหรับ dehairing และการทดลองล้างไขมัน.
?
โปรติเอสมันดิบและน้ำซุปที่อุดมไปด้วยเอนไซม์ไลเปสมีความเข้มข้นอีก
ครั้งที่สี่แยกโดย ltration Fi พิเศษ (ใช้ Spintrex) โดยใช้
10 ตลับเมมเบรน kDa MWCO.
2.2.1 โปรติเอสทดสอบ
กิจกรรมโปรติเอสโดยวัดจากวิธีการที่
อธิบายโดยเมเยอร์สและ Ahearn (1977) กับบางไพเพอร์ Modi Fi
(สราญ et al., 2007) หนึ่งหน่วยของน้ำย่อยเป็นเทียบเท่ากับ
ปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการปล่อย 1
mg ของซายน์ต่อมิลลิลิตรต่อ
นาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน.
2.2.2 เอนไซม์ไลเปสทดสอบ
กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสใน ltrate วัฒนธรรม Fi ถูกกำหนด spectro-
photometrically ใช้ palmitate P-Nitrophenyl เป็นสารตั้งต้น
ที่ใช้ขั้นตอนของเคลอร์และ Stuckman นี้ (1979) หนึ่งระหว่าง
Unit (IU) ของกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสเป็นนิยามปริมาณของ
เอนไซม์ที่จำเป็นในการปล่อย 1
mMofp-ไนโตรฟีนอลต่อมิลลิลิตรต่อ
นาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบมาตรฐาน.
2.3 ภายในดับชั้น uorescent ตั้งต้น speci วิธี Fi C
เพื่อ Con เพิ่มเติม Fi RM ว่า B. licheniformis น้ำย่อยเป็น
subtilisin เหมือนน้ำย่อยซีรีนที่มีฤทธิ์ต่ำคอลลาที่
ตัวอย่างน้ำย่อยเข้มข้นได้รับการประเมินโดยภายใน
ดับชั้นวิธี uorescent วิธีการนี้จะขึ้นอยู่กับการใช้งานของ
การออกแบบภายในชั้นดับ uorescent 'สากล' น้ำย่อย
พื้นผิวซึ่งมีหลายเว็บไซต์แตกแยก speci Fi C การประยุกต์ใช้
การรวมกันของ uorescence ลอริด้าและการวิเคราะห์สเปกตรัมมวล
อนุญาตให้ Fi Pro หลิงของ proteolysis.
2.4 dehairing และล้างไขมันของหนังสัตว์และซ่อน
2.4.1 การเตรียมการของหนังสัตว์และซ่อน
ผิวแพะแกะผิวและควายซ่อนที่ได้รับจาก
โรงฆ่าสัตว์ในท้องถิ่น สำหรับการจัดเก็บสกินที่ถูกถูด้วยสองครั้ง
น้ำหนักของพวกเขาในเกลือและเก็บไว้ในห้องเย็นที่อุณหภูมิ 4
องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2e6 เดือน
เพื่อป้องกันไม่ให้เน่าเปื่อย สกินถูกตัดกับขนาดของ 1 ตาราง. ฟุต
(ม 0.093
2
?
) สำหรับการทดลอง สกินเค็มและซ่อนถูก
แช่เป็นเวลา 6 ชั่วโมงในน้ำเพื่อกำจัดเกลือในเลือดและสิ่งสกปรก
และความชื้นที่จะได้รับหายไปในระหว่างกระบวนการบ่ม.
2.4.2 ทดลอง
วิธีการวางตามมาในการศึกษาทั้งหมดสำหรับคาน
การดำเนินงานที่บ้านของอุตสาหกรรมเครื่องหนัง (รูป. 4A, B) สกิน / กลอง
หลังจากการประยุกต์ใช้เอนไซม์ถูกปกคลุมด้วยคับชั้นเดียว
ของแผ่นพลาสติกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้อง (30? 2
C) สำหรับ
24 ชั่วโมง dehairing และล้างไขมันได้รับการตรวจสอบเป็นระยะถึง
24 ชั่วโมง ในการตรวจสอบที่มีศักยภาพ dehairing ผมจะถูกลบออกโดยใช้
ไม้พายปลายทู่ cacy Fi EF ของเอนไซม์ dehairing ที่แตกต่างกัน
พารามิเตอร์ (อุณหภูมิ pH และความเข้มข้นของเอนไซม์)
ได้รับการปรับให้เหมาะสมกับ 100% dehairing ขนาดของ dehairing ถูก
ตั้งข้อสังเกตดังนี้ก) TH dehairing เล็กน้อยข) þþปานกลาง
?
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Set up the Reaction Mixes according to t
- gud
- เด็กผู้หญิงที่นั่นน่ารัก
- Vacuum the carpets
- Take out the rubbish
- rubbish
- Bangkok's movement has continued to grow
- Samui Island at surathani
- After that loss,fudan academy cancelleda
- Also we obtain
- Bangkok's population has continued to gr
- Where do your parents live
- Actually
- Where did your friends live
- คุณพูดจริงหรอ
- it is all about tackling some of the unf
- The environmental factors such as drough
- dont laugh at me:(haha
- partial softening of feed water, removal
- นำเสนอโดย
- คุณเลิกสูบบุหรี่ได้ไหม
- what dificulty this test is!
- However, the aggregation process takes p
