- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Charqui samples presenting red spoi
Charqui samples presenting red spoilage (25 g) were homogenized
with 225 mL of peptone water (0.1% w/v), submitted to serial ten-fold
dilutions in peptone water (0.1% w/v), and spread on the surface of
plates containing Tryptone Soya Agar (TSA) (Oxoid, Basingstoke, UK)
supplemented with 3% (w/v) of NaCl (Synth, Diadema, Brazil), for the
isolation of medium halotolerant bacteria or 10% (w/v) of NaCl (for
the isolation of highly halotolerant bacteria). After aerobic incubation
at 37 °C for 72 h, the colonies were randomly selected, transferred to
Tryptone Soya Broth (TSB) (Oxoid, Basingstoke, UK) and streaked on
TSA to obtain pure cultures. The cultures were stored at −80 °C in the
presence of 20% w/v glycerol as crioprotector.
For identification of halophilic and halotolerant bacteria, total DNA of
the strains was extracted using the commercial Kit Ilustra bacteria
genomicPrep Mini Spin (GE Healthcare, UK), according to the manufacturer's recommendations. The DNA concentration was determined by
NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, USA) and the total DNA was used as
template for amplification of the almost complete 16S rDNA gene by
PCR, according toCibik, Lepage, and Tailliez (2000). The reaction mixture
(100 μL) contained 100 ng of template DNA, 1.5 mM of MgCl2, 10 μL of
1× Taq polymerase buffer, 2.5 U of Taq DNA polymerase, 200 μM of
deoxynucleoside triphosphates and 50 pM of each primer described in
Table 1. The amplification program comprised a first denaturation step
at 94 °C for 5 min, followed by 30 cycles of 94 °C for 1 min (denaturation), 55 °C for 1 min (annealing) and 72 °C for 1.5 min (extension),
and a final extension step at 72 °C for 5 min. The amplified products
were separated by electrophoresis on 1.0% agarose gels in 1× TBE
(Tris-borate EDTA, pH 8.0) buffer (Sigma, New York, USA). Gels were
stained in TBE buffer containing 0.5 μg/mL ethidium bromide (Sigma,
New York, USA).
The amplification products were purified using a Quantum Prep PCR
Kleen Spin column (BioRad, Madrid, Spain), and then sequenced using
primers Sp3, Sp4 and Sp5 (Table 1), according to Weisburg, Barns,
Pelletier, and Lane (1991), in a CEQ2000 XL DNA Analysis System
(Beckman Coulter, CA, USA). The obtained sequences were compared
with those available in GenBank database, using the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) at the National Center of Biotechnology Information website (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).
with 225 mL of peptone water (0.1% w/v), submitted to serial ten-fold
dilutions in peptone water (0.1% w/v), and spread on the surface of
plates containing Tryptone Soya Agar (TSA) (Oxoid, Basingstoke, UK)
supplemented with 3% (w/v) of NaCl (Synth, Diadema, Brazil), for the
isolation of medium halotolerant bacteria or 10% (w/v) of NaCl (for
the isolation of highly halotolerant bacteria). After aerobic incubation
at 37 °C for 72 h, the colonies were randomly selected, transferred to
Tryptone Soya Broth (TSB) (Oxoid, Basingstoke, UK) and streaked on
TSA to obtain pure cultures. The cultures were stored at −80 °C in the
presence of 20% w/v glycerol as crioprotector.
For identification of halophilic and halotolerant bacteria, total DNA of
the strains was extracted using the commercial Kit Ilustra bacteria
genomicPrep Mini Spin (GE Healthcare, UK), according to the manufacturer's recommendations. The DNA concentration was determined by
NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, USA) and the total DNA was used as
template for amplification of the almost complete 16S rDNA gene by
PCR, according toCibik, Lepage, and Tailliez (2000). The reaction mixture
(100 μL) contained 100 ng of template DNA, 1.5 mM of MgCl2, 10 μL of
1× Taq polymerase buffer, 2.5 U of Taq DNA polymerase, 200 μM of
deoxynucleoside triphosphates and 50 pM of each primer described in
Table 1. The amplification program comprised a first denaturation step
at 94 °C for 5 min, followed by 30 cycles of 94 °C for 1 min (denaturation), 55 °C for 1 min (annealing) and 72 °C for 1.5 min (extension),
and a final extension step at 72 °C for 5 min. The amplified products
were separated by electrophoresis on 1.0% agarose gels in 1× TBE
(Tris-borate EDTA, pH 8.0) buffer (Sigma, New York, USA). Gels were
stained in TBE buffer containing 0.5 μg/mL ethidium bromide (Sigma,
New York, USA).
The amplification products were purified using a Quantum Prep PCR
Kleen Spin column (BioRad, Madrid, Spain), and then sequenced using
primers Sp3, Sp4 and Sp5 (Table 1), according to Weisburg, Barns,
Pelletier, and Lane (1991), in a CEQ2000 XL DNA Analysis System
(Beckman Coulter, CA, USA). The obtained sequences were compared
with those available in GenBank database, using the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) at the National Center of Biotechnology Information website (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).
0/5000
ตัวอย่าง charqui ที่แสดงสีแดงเน่าเสีย (25 กรัม) ถูก homogenized เป็นกลุ่ม
กับมล. 225 น้ำ peptone (0.1% w/v), ส่งไปประจำสิบพับ
dilutions น้ำ peptone (0.1% w/v), และกระจายบนพื้นผิวของ
แผ่นประกอบด้วย Tryptone เหลือง Agar (TSA) (Oxoid, Basingstoke, UK)
เสริม ด้วย 3% (w/v) ของ NaCl (Synth, Diadema บราซิล), สำหรับการ
แยกแบคทีเรียทนเกลือเพื่อใช้กลางหรือ 10% (w/v) ของ NaCl (สำหรับ
แยกแบคทีเรียทนเกลือเพื่อใช้สูง) หลังจากบ่มแอโรบิก
ที่ 37 ° C สำหรับ 72 h อาณานิคมถูกสุ่มเลือก โอนย้ายไป
Tryptone เหลืองซุป (TSB) (Oxoid, Basingstoke, UK) และลายบน
TSA รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ วัฒนธรรมถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C ในการ
ก็ 20% w/v กลีเซอรเป็น crioprotector.
สำหรับ identification ของชอบเกลือ และ แบคทีเรียทนเกลือเพื่อใช้ ดีเอ็นเอทั้งหมดของ
สายพันธุ์ถูกสกัดโดยใช้แบคทีเรีย Kit Ilustra ค้า
genomicPrep มินิหมุน (GE สุขภาพ UK), ตามคำแนะนำของผู้ผลิต กำหนดความเข้มข้นของดีเอ็นเอโดย
NanoDrop 2000 (เทอร์โม Scientific สหรัฐอเมริกา) และดีเอ็นเอทั้งหมดถูกใช้เป็น
แม่แบบสำหรับ amplification ของยีน rDNA 16S เกือบเสร็จสมบูรณ์แล้วโดย
PCR ตาม toCibik, Lepage และ Tailliez (2000)
(100 μL) ผสมปฏิกิริยาอยู่ 100 ng ของแม่แบบดีเอ็นเอ 1.5 มม.ของ MgCl2, μL 10 ของ
บัฟเฟอร์พอลิเมอเรส Taq × 1, 2.5 U Taq DNA พอลิเมอเรส μM 200 ของ
deoxynucleoside triphosphates และ 50 น.ของแต่ละพื้นที่อธิบายไว้ใน
1 ตาราง โปรแกรม amplification ประกอบด้วยขั้นตอน denaturation first
ที่ 94 ° C สำหรับ 5 นาที ตาม ด้วยรอบ 30 94 องศาเซลเซียสใน 1 นาที (denaturation), 55 ° C (การอบเหนียว) 1 นาที และ 72 ° C สำหรับ 1.5 นาที (นามสกุล),
และขั้นตอนส่วนขยาย final ที่ 72 ° C สำหรับ 5 นาที ผลิตภัณฑ์ amplified
ถูกคั่น ด้วย electrophoresis บน agarose 1.0% ใน 1 × TBE
(borate ทริสเรทติ้ง EDTA ค่า pH 8.0) บัฟเฟอร์ (ซิก นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) เจถูก
สีในบัฟเฟอร์ TBE ประกอบด้วยโบรไมด์ ethidium μg 0.5 mL (ซิก,
นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) .
ผลิตภัณฑ์ amplification ได้ purified ใช้ PCR เป็นการเตรียมการควอนตัม
คอลัมน์หมุน Kleen (BioRad มาดริด สเปน), และเรียงลำดับโดยใช้
ไพรเมอร์ Sp3, Sp4 และ Sp5 (ตาราง 1), ตาม Weisburg บ่ม,
Pelletier และเลน (1991), ในระบบวิเคราะห์ดีเอ็นเอ XL CEQ2000
(Beckman Coulter, CAสหรัฐอเมริกา) มีการเปรียบเทียบลำดับได้รับ
กับที่มีในฐานข้อมูลของ GenBank ใช้การพื้นฐานท้องถิ่นตำแหน่งค้นหาเครื่องมือ (ระเบิด) ที่เว็บไซต์แห่งชาติศูนย์เทคโนโลยีชีวภาพสารสนเทศ (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)
กับมล. 225 น้ำ peptone (0.1% w/v), ส่งไปประจำสิบพับ
dilutions น้ำ peptone (0.1% w/v), และกระจายบนพื้นผิวของ
แผ่นประกอบด้วย Tryptone เหลือง Agar (TSA) (Oxoid, Basingstoke, UK)
เสริม ด้วย 3% (w/v) ของ NaCl (Synth, Diadema บราซิล), สำหรับการ
แยกแบคทีเรียทนเกลือเพื่อใช้กลางหรือ 10% (w/v) ของ NaCl (สำหรับ
แยกแบคทีเรียทนเกลือเพื่อใช้สูง) หลังจากบ่มแอโรบิก
ที่ 37 ° C สำหรับ 72 h อาณานิคมถูกสุ่มเลือก โอนย้ายไป
Tryptone เหลืองซุป (TSB) (Oxoid, Basingstoke, UK) และลายบน
TSA รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ วัฒนธรรมถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C ในการ
ก็ 20% w/v กลีเซอรเป็น crioprotector.
สำหรับ identification ของชอบเกลือ และ แบคทีเรียทนเกลือเพื่อใช้ ดีเอ็นเอทั้งหมดของ
สายพันธุ์ถูกสกัดโดยใช้แบคทีเรีย Kit Ilustra ค้า
genomicPrep มินิหมุน (GE สุขภาพ UK), ตามคำแนะนำของผู้ผลิต กำหนดความเข้มข้นของดีเอ็นเอโดย
NanoDrop 2000 (เทอร์โม Scientific สหรัฐอเมริกา) และดีเอ็นเอทั้งหมดถูกใช้เป็น
แม่แบบสำหรับ amplification ของยีน rDNA 16S เกือบเสร็จสมบูรณ์แล้วโดย
PCR ตาม toCibik, Lepage และ Tailliez (2000)
(100 μL) ผสมปฏิกิริยาอยู่ 100 ng ของแม่แบบดีเอ็นเอ 1.5 มม.ของ MgCl2, μL 10 ของ
บัฟเฟอร์พอลิเมอเรส Taq × 1, 2.5 U Taq DNA พอลิเมอเรส μM 200 ของ
deoxynucleoside triphosphates และ 50 น.ของแต่ละพื้นที่อธิบายไว้ใน
1 ตาราง โปรแกรม amplification ประกอบด้วยขั้นตอน denaturation first
ที่ 94 ° C สำหรับ 5 นาที ตาม ด้วยรอบ 30 94 องศาเซลเซียสใน 1 นาที (denaturation), 55 ° C (การอบเหนียว) 1 นาที และ 72 ° C สำหรับ 1.5 นาที (นามสกุล),
และขั้นตอนส่วนขยาย final ที่ 72 ° C สำหรับ 5 นาที ผลิตภัณฑ์ amplified
ถูกคั่น ด้วย electrophoresis บน agarose 1.0% ใน 1 × TBE
(borate ทริสเรทติ้ง EDTA ค่า pH 8.0) บัฟเฟอร์ (ซิก นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) เจถูก
สีในบัฟเฟอร์ TBE ประกอบด้วยโบรไมด์ ethidium μg 0.5 mL (ซิก,
นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา) .
ผลิตภัณฑ์ amplification ได้ purified ใช้ PCR เป็นการเตรียมการควอนตัม
คอลัมน์หมุน Kleen (BioRad มาดริด สเปน), และเรียงลำดับโดยใช้
ไพรเมอร์ Sp3, Sp4 และ Sp5 (ตาราง 1), ตาม Weisburg บ่ม,
Pelletier และเลน (1991), ในระบบวิเคราะห์ดีเอ็นเอ XL CEQ2000
(Beckman Coulter, CAสหรัฐอเมริกา) มีการเปรียบเทียบลำดับได้รับ
กับที่มีในฐานข้อมูลของ GenBank ใช้การพื้นฐานท้องถิ่นตำแหน่งค้นหาเครื่องมือ (ระเบิด) ที่เว็บไซต์แห่งชาติศูนย์เทคโนโลยีชีวภาพสารสนเทศ (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)
การแปล กรุณารอสักครู่..
Charqui samples presenting red spoilage (25 g) were homogenized
with 225 mL of peptone water (0.1% w/v), submitted to serial ten-fold
dilutions in peptone water (0.1% w/v), and spread on the surface of
plates containing Tryptone Soya Agar (TSA) (Oxoid, Basingstoke, UK)
supplemented with 3% (w/v) of NaCl (Synth, Diadema, Brazil), for the
isolation of medium halotolerant bacteria or 10% (w/v) of NaCl (for
the isolation of highly halotolerant bacteria). After aerobic incubation
at 37 °C for 72 h, the colonies were randomly selected, transferred to
Tryptone Soya Broth (TSB) (Oxoid, Basingstoke, UK) and streaked on
TSA to obtain pure cultures. The cultures were stored at −80 °C in the
presence of 20% w/v glycerol as crioprotector.
For identification of halophilic and halotolerant bacteria, total DNA of
the strains was extracted using the commercial Kit Ilustra bacteria
genomicPrep Mini Spin (GE Healthcare, UK), according to the manufacturer's recommendations. The DNA concentration was determined by
NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, USA) and the total DNA was used as
template for amplification of the almost complete 16S rDNA gene by
PCR, according toCibik, Lepage, and Tailliez (2000). The reaction mixture
(100 μL) contained 100 ng of template DNA, 1.5 mM of MgCl2, 10 μL of
1× Taq polymerase buffer, 2.5 U of Taq DNA polymerase, 200 μM of
deoxynucleoside triphosphates and 50 pM of each primer described in
Table 1. The amplification program comprised a first denaturation step
at 94 °C for 5 min, followed by 30 cycles of 94 °C for 1 min (denaturation), 55 °C for 1 min (annealing) and 72 °C for 1.5 min (extension),
and a final extension step at 72 °C for 5 min. The amplified products
were separated by electrophoresis on 1.0% agarose gels in 1× TBE
(Tris-borate EDTA, pH 8.0) buffer (Sigma, New York, USA). Gels were
stained in TBE buffer containing 0.5 μg/mL ethidium bromide (Sigma,
New York, USA).
The amplification products were purified using a Quantum Prep PCR
Kleen Spin column (BioRad, Madrid, Spain), and then sequenced using
primers Sp3, Sp4 and Sp5 (Table 1), according to Weisburg, Barns,
Pelletier, and Lane (1991), in a CEQ2000 XL DNA Analysis System
(Beckman Coulter, CA, USA). The obtained sequences were compared
with those available in GenBank database, using the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) at the National Center of Biotechnology Information website (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).
with 225 mL of peptone water (0.1% w/v), submitted to serial ten-fold
dilutions in peptone water (0.1% w/v), and spread on the surface of
plates containing Tryptone Soya Agar (TSA) (Oxoid, Basingstoke, UK)
supplemented with 3% (w/v) of NaCl (Synth, Diadema, Brazil), for the
isolation of medium halotolerant bacteria or 10% (w/v) of NaCl (for
the isolation of highly halotolerant bacteria). After aerobic incubation
at 37 °C for 72 h, the colonies were randomly selected, transferred to
Tryptone Soya Broth (TSB) (Oxoid, Basingstoke, UK) and streaked on
TSA to obtain pure cultures. The cultures were stored at −80 °C in the
presence of 20% w/v glycerol as crioprotector.
For identification of halophilic and halotolerant bacteria, total DNA of
the strains was extracted using the commercial Kit Ilustra bacteria
genomicPrep Mini Spin (GE Healthcare, UK), according to the manufacturer's recommendations. The DNA concentration was determined by
NanoDrop 2000 (Thermo Scientific, USA) and the total DNA was used as
template for amplification of the almost complete 16S rDNA gene by
PCR, according toCibik, Lepage, and Tailliez (2000). The reaction mixture
(100 μL) contained 100 ng of template DNA, 1.5 mM of MgCl2, 10 μL of
1× Taq polymerase buffer, 2.5 U of Taq DNA polymerase, 200 μM of
deoxynucleoside triphosphates and 50 pM of each primer described in
Table 1. The amplification program comprised a first denaturation step
at 94 °C for 5 min, followed by 30 cycles of 94 °C for 1 min (denaturation), 55 °C for 1 min (annealing) and 72 °C for 1.5 min (extension),
and a final extension step at 72 °C for 5 min. The amplified products
were separated by electrophoresis on 1.0% agarose gels in 1× TBE
(Tris-borate EDTA, pH 8.0) buffer (Sigma, New York, USA). Gels were
stained in TBE buffer containing 0.5 μg/mL ethidium bromide (Sigma,
New York, USA).
The amplification products were purified using a Quantum Prep PCR
Kleen Spin column (BioRad, Madrid, Spain), and then sequenced using
primers Sp3, Sp4 and Sp5 (Table 1), according to Weisburg, Barns,
Pelletier, and Lane (1991), in a CEQ2000 XL DNA Analysis System
(Beckman Coulter, CA, USA). The obtained sequences were compared
with those available in GenBank database, using the Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) at the National Center of Biotechnology Information website (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/).
การแปล กรุณารอสักครู่..
ตัวอย่างการนำเสนอ charqui เน่าเสียสีแดง ( 25 กรัม ) เป็นโฮโม 225 มิลลิลิตร ตามลำดับ
กับน้ำ ( 0.1 % w / v ) ยื่นต่ออนุกรมสิบพับ
เจือจางในเปปโตนน้ำ ( 0.1 % w / v ) และการแพร่กระจายบนพื้นผิวของแผ่นวุ้น
ที่มีทริพโทนเหลือง ( TSA ) ( oxoid Basingstoke , , สหราชอาณาจักร )
เสริม 3% ( w / v ) เกลือ ( Synth Diadema บราซิล
)การคัดแยกแบคทีเรียทนเค็มปานกลาง หรือ 10 % ( w / v ) เกลือ (
แยกสูงทนแบคทีเรีย ) หลังจากบ่มที่ 37 ° C
แอโรบิกนาน 72 ชั่วโมง อาณานิคมสุ่มโอน
ทริพโทนซุปถั่วเหลือง ( TSB ) ( oxoid Basingstoke , สหราชอาณาจักร , ) และลายบน
TSA ได้รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ วัฒนธรรมที่อุณหภูมิ− 80 ° C ใน
มี 20 % W / V
รอลเป็น crioprotector .สำหรับ identi จึงประจุบวกของเอนไซม์ทนเค็มและแบคทีเรีย ดีเอ็นเอทั้งหมดของ
สายพันธุ์ถูกสกัดโดยใช้ชุดพาณิชย์ ilustra แบคทีเรีย
genomicprep ขนาดเล็กหมุน ( GE Healthcare , UK ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ความเข้มข้นของดีเอ็นเอถูกกำหนดโดย
nanodrop 2000 ( เทอร์โม scienti จึง C , USA ) และดีเอ็นเอทั้งหมดใช้
แม่แบบสำหรับ ampli ไอออนบวกจึงเกือบสมบูรณ์ของยีน 16S rDNA ด้วย
tocibik Lepage PCR , ตาม , และ tailliez ( 2000 ) ปฏิกิริยาผสม
( 100 μ L ) บรรจุ 100 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ , 1.5 มม. ชุด 10 μ l
1 ×แท็กการบัฟเฟอร์ 2.5 U ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค , 200 μ M
ไตรฟ เฟต deoxynucleoside 50 PM ของแต่ละแนวทางอธิบาย
โต๊ะ 1การแลกเปลี่ยนโปรแกรม ampli จึงประกอบด้วย จึงตัดสินใจเดินทางไปขั้นตอนที่ 94 ° C (
5 นาที ตามด้วย 30 รอบ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที ( ( 55 ° C ) 1 นาที ( อบ ) และ 72 ° C 1.5 มิน ( ส่วนขยาย ) ,
และจึงขยายขั้นตอนที่ 72 นาล ° C เป็นเวลา 5 นาที ampli จึงเอ็ดผลิตภัณฑ์
ถูกแยกโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบน 1.0% ในเจล (
1 × ( บริษัททีบีบอเรท EDTA pH 8.0 ) บัฟเฟอร์ ( Sigma , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา )เจลถูก
เปรอะเปื้อนในบัฟเฟอร์ที่มีμทีบี 0.5 g / ml ทิเดียมโบรไมด์ ( Sigma ,
นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา )
ampli จึงแลกเปลี่ยนผลิตภัณฑ์ ภูริจึงเอ็ดใช้ควอนตัมเตรียม PCR
คลีนปั่นคอลัมน์ ( biorad , มาดริด , สเปน ) , และจากนั้นใช้ primers ลำดับ
่ sp5 ( sp4 , และ ตารางที่ 1 ) ตาม weisburg โรงนา
เพลเลอเทียร์ และ เลน ( 1991 ) ใน ceq2000 XL ดีเอ็นเอการวิเคราะห์ระบบ
( Beckman Coulter , CA , USA )การวิเคราะห์ลำดับเปรียบเทียบ
กับที่มีอยู่ในฐานข้อมูลขนาดโดยใช้เครื่องมือค้นหาการปรับพื้นฐานท้องถิ่น ( ระเบิด ) ที่ศูนย์แห่งชาติของเว็บไซต์ข้อมูลชีวภาพ ( http : / / www.ncbi . nlm . NIH . gov / )
กับน้ำ ( 0.1 % w / v ) ยื่นต่ออนุกรมสิบพับ
เจือจางในเปปโตนน้ำ ( 0.1 % w / v ) และการแพร่กระจายบนพื้นผิวของแผ่นวุ้น
ที่มีทริพโทนเหลือง ( TSA ) ( oxoid Basingstoke , , สหราชอาณาจักร )
เสริม 3% ( w / v ) เกลือ ( Synth Diadema บราซิล
)การคัดแยกแบคทีเรียทนเค็มปานกลาง หรือ 10 % ( w / v ) เกลือ (
แยกสูงทนแบคทีเรีย ) หลังจากบ่มที่ 37 ° C
แอโรบิกนาน 72 ชั่วโมง อาณานิคมสุ่มโอน
ทริพโทนซุปถั่วเหลือง ( TSB ) ( oxoid Basingstoke , สหราชอาณาจักร , ) และลายบน
TSA ได้รับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ วัฒนธรรมที่อุณหภูมิ− 80 ° C ใน
มี 20 % W / V
รอลเป็น crioprotector .สำหรับ identi จึงประจุบวกของเอนไซม์ทนเค็มและแบคทีเรีย ดีเอ็นเอทั้งหมดของ
สายพันธุ์ถูกสกัดโดยใช้ชุดพาณิชย์ ilustra แบคทีเรีย
genomicprep ขนาดเล็กหมุน ( GE Healthcare , UK ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ความเข้มข้นของดีเอ็นเอถูกกำหนดโดย
nanodrop 2000 ( เทอร์โม scienti จึง C , USA ) และดีเอ็นเอทั้งหมดใช้
แม่แบบสำหรับ ampli ไอออนบวกจึงเกือบสมบูรณ์ของยีน 16S rDNA ด้วย
tocibik Lepage PCR , ตาม , และ tailliez ( 2000 ) ปฏิกิริยาผสม
( 100 μ L ) บรรจุ 100 นาโนดีเอ็นเอแม่แบบ , 1.5 มม. ชุด 10 μ l
1 ×แท็กการบัฟเฟอร์ 2.5 U ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค , 200 μ M
ไตรฟ เฟต deoxynucleoside 50 PM ของแต่ละแนวทางอธิบาย
โต๊ะ 1การแลกเปลี่ยนโปรแกรม ampli จึงประกอบด้วย จึงตัดสินใจเดินทางไปขั้นตอนที่ 94 ° C (
5 นาที ตามด้วย 30 รอบ 94 ° C เป็นเวลา 1 นาที ( ( 55 ° C ) 1 นาที ( อบ ) และ 72 ° C 1.5 มิน ( ส่วนขยาย ) ,
และจึงขยายขั้นตอนที่ 72 นาล ° C เป็นเวลา 5 นาที ampli จึงเอ็ดผลิตภัณฑ์
ถูกแยกโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบน 1.0% ในเจล (
1 × ( บริษัททีบีบอเรท EDTA pH 8.0 ) บัฟเฟอร์ ( Sigma , นิวยอร์ก , สหรัฐอเมริกา )เจลถูก
เปรอะเปื้อนในบัฟเฟอร์ที่มีμทีบี 0.5 g / ml ทิเดียมโบรไมด์ ( Sigma ,
นิวยอร์ก สหรัฐอเมริกา )
ampli จึงแลกเปลี่ยนผลิตภัณฑ์ ภูริจึงเอ็ดใช้ควอนตัมเตรียม PCR
คลีนปั่นคอลัมน์ ( biorad , มาดริด , สเปน ) , และจากนั้นใช้ primers ลำดับ
่ sp5 ( sp4 , และ ตารางที่ 1 ) ตาม weisburg โรงนา
เพลเลอเทียร์ และ เลน ( 1991 ) ใน ceq2000 XL ดีเอ็นเอการวิเคราะห์ระบบ
( Beckman Coulter , CA , USA )การวิเคราะห์ลำดับเปรียบเทียบ
กับที่มีอยู่ในฐานข้อมูลขนาดโดยใช้เครื่องมือค้นหาการปรับพื้นฐานท้องถิ่น ( ระเบิด ) ที่ศูนย์แห่งชาติของเว็บไซต์ข้อมูลชีวภาพ ( http : / / www.ncbi . nlm . NIH . gov / )
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- I always talk to you before
- รายได้ค้างรับค่าใช้จ่ายจ่ายล่วงหน้าเช็คร
- Fresh greens
- it s have u a bf? no?
- Employees holding a flag
- หมอนอิง
- channel subscriber counts on June 16
- เพื่อส่งเสริมสุขภาพอนามัยแก่นักเรียนที่ข
- แต่เราไม่รู้จะขายให้ใคร
- afford
- Set of three
- How long do you work?
- a penny for your thoughts
- เครื่องจักรเสียหายมาเป็นเวลาสองเดือนแล้ว
- Think after you speak
- เราเป็นหว่งอนาคต
- งานของฉันสนุกแล้ว
- is expected
- beans is a dick
- some valuable equipment
- Ejector blades
- ทูลีฟ
- 不需要再ใช้英雄帖了
- จริงหรอค่ะ ฉันดีใจนะที่คุณคิดอย่างนั้น
