IntroductionMaterials and methods2.

Introduction
Materials and methods
2.1. Natural source

Marigold flowers (T. erecta) from a single batch were used for all experiments. The batch contained flowers with a yellow-orange coloration ratio of 10:90 and 30% average weight of receptacles. The marigold flowers were divided in two sets. One set was conserved fresh and separated in two subsets. One of these subsets was processed via solid state fermentation. As for the second fresh flower subset, the petals were separated from their receptacles and processed via uncontrolled ensilage. For the second set, the petals were separated from their receptacles and processed via enzymatic treatments using a raw enzymatic extract (non-commercial enzymes) or commercial cellulose. In order to verify the effect of the original marigold flower moisture on the yield, the marigold was processed in two separate batches: one using fresh petals and the other using dried petals. The dried petals were obtained by dehydration under environmental conditions up to a moisture content of 10% (±1%). Also, to avoid changes on both fresh and dried marigold, all sets were stored at 4 °C and sealed in black polyethylene bags until they were used during experimental assays.

2.2. Traditional uncontrolled ensilage

In order to evaluate the traditional ensilage, the marigold flowers, including theirs receptacles, were stored for up to seven weeks in a closed yard under uncontrolled conditions. At the end, the product obtained was dried and processed to obtain marigold flower flour.

2.3. Microorganisms culture

A mixed culture of microorganisms (Flavobacterium IIb, Acinetobacter anitratus, and Rhizopus nigricans) were propagated and mixed, in the proportions according to Navarrete-Bolaños et al. (2003), to obtain the starter inoculum used in the solid-state fermentation assays. Furthermore, the starter inoculum was filtrated to obtain a raw enzymatic extract that was used in the enzymatic treatment with non-commercial enzymes.

2.4. Enzymatic treatments with non-commercial enzymes

In order to evaluate the effect of raw enzymatic extract on the marigold petals, the supernatants obtained from mixed culture filtrated were blended with dried or fresh petals in 1:12 (w/v) ratio and kept on rotary shaker at 28 °C and 175 rpm (Forma Scientific, model 4520) for 24 h. The samples treated were filtered to separate their solid and liquid phases. The solid phases, marigold petals treated, were processed to obtain marigold flower flour.

2.5. Enzymatic treatment with commercial cellulase

Commercial enzyme solution at 0.05 (±0.01% (w/v)) concentration and endo-1,4-β-d-glucanase (EC 3.2.1.4 from Aspergillus niger, Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) activity was used for enzymatic treatment with commercial cellulase according to Navarrete-Bolaños et al. (2004a). In the same manner as for the enzymatic treatments with raw enzymatic extract, the commercial enzyme solutions were blended with dried or fresh petals in 1:12 (w/v) ratio and kept on rotary shaker at 28 °C, 175 rpm for 120 h, the samples treated were filtered and the solid phases were processed to obtain marigold flower flour.

2.6. Solid state fermentation

The mixed culture microorganisms was blended with fresh marigold flower in 1.5:1 (w/v) ratio on a modular rotating drum fermentation system under the following conditions: 73.8% moisture content, intermittent agitation every 14.8 h, and 4.1 l inlet air/min. These conditions maximize the total xanthophylls extraction (Navarrete-Bolaños et al., 2004b) from the fermented marigold flower flour obtained.

2.7. Marigold flower flour

The products obtained by all proposed processes, enzymatic treatment, solid state fermentation and ensilage, were dehydrated in a vacuum oven (Shel Lab. model 1430) to 10% (±1%) moisture content, and milled (0.5-mm sieve) using a Brinkmann mill (Brinkmann, Westbury, NY). The flour obtained was analyzed by AOAC (1984) method 970.64 to determine the total xanthophylls concentration and to obtain oleoresin via a lixiviation process.

2.8. Xanthophylls extraction by hexane

The flours obtained from described treatments were extracted in a batch process using analytical grade hexane (J.T. Baker, Mallinckrodt Baker Inc., Phillipsburg, NJ) in 1:6 (w/v) flour to hexane ratio and at constant temperature of 35 °C during 15 min of extraction time (Navarrete-Bolaños, Jiménez-Islas, Rico-Martínez, Domínguez-Domínguez, & Regalado-González, 2001). When the extraction was concluded, the light phase (hexane + xanthophylls) must be separated of the heavy phase (solid). The light phase was concentrated to obtain the oleoresin extract that was weighed (digital analytical balance, Ohaus-explorer) to quantify the yield extraction and determine the xanthophylls concentration according to AOAC (1984) method 970.64. The heavy phase (solid) was desolventized, and the retained solvent volume was determined by difference of weights (Ohaus-explorer balance).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แนะนำวัสดุและวิธีการ2.1. ธรรมชาติแหล่งดอกดาวเรือง (ต.เรือง) จากชุดเดียวถูกใช้สำหรับการทดลองทั้งหมด ชุดประกอบดอกไม้สีส้มเหลืองอัตราส่วนของน้ำหนักเฉลี่ย 10:90 และ 30% ของภาชนะ ดอกดาวเรืองถูกแบ่งออกเป็นสองชุด ชุดอนุรักษ์สด และคั่นในชุดย่อยสอง ชุดย่อยเหล่านี้อย่างใดอย่างหนึ่งถูกประมวลผลผ่านสถานะของแข็งหมัก สำหรับชุดย่อยดอกไม้สดสอง กลีบแยกออกจากภาชนะบรรจุของพวกเขา และประมวลผลผ่านทาง ensilage ไม่สามารถควบคุม สำหรับชุดสอง กลีบแยกออกจากภาชนะบรรจุของพวกเขา และประมวลผลผ่านทางเอนไซม์บำบัดโดยใช้สารสกัดจากเอนไซม์ดิบ (เอนไซม์ไม่ใช่เชิงพาณิชย์) หรือเซลลูโลสพาณิชย์ ตรวจสอบผลของความชื้นของดอกไม้ดาวเรืองเดิมผลผลิต ดาวเรืองถูกประมวลผลในชุดแยกต่างหากที่สอง: หนึ่งใช้กลีบดอกสดและอื่น ๆ โดยใช้แห้งกลีบ กลีบดอกแห้งได้รับ โดยการคายน้ำภายใต้สภาพแวดล้อมความชื้นไม่เกิน 10% (± 1%) นอกจากนี้ เพื่อหลีกเลี่ยงการเปลี่ยนแปลงบนดาวเรืองทั้งสด และแห้ง ชุดทั้งหมดเก็บไว้ที่ 4 ° C และปิดผนึกในถุงพลาสติกสีดำจนกว่าพวกเขาใช้ในระหว่างการทดลอง assays2.2. แบบดั้งเดิมไม่สามารถควบคุม ensilageเพื่อประเมิน ensilage แบบดั้งเดิม ดอกดาวเรือง รวมทั้งภาชนะบรรจุ พวกเขาถูกเก็บไว้นานถึงเจ็ดสัปดาห์ในบ้านปิดไม่มีการควบคุมสภาวะ ปลาย ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับคือแห้ง และแปรรูปจะได้รับแป้งดอกไม้ดาวเรือง2.3. จุลินทรีย์วัฒนธรรมวัฒนธรรมผสมของจุลินทรีย์ (Flavobacterium IIb, Acinetobacter anitratus และบท nigricans) แพร่กระจาย และ ผสม ในสัดส่วนตาม Navarrete Bolaños et al. (2003), รับ inoculum starter ที่ใช้ใน assays solid-state หมัก นอกจากนี้ starter inoculum เป็น filtrated จะได้รับสารสกัดจากเอนไซม์การวัตถุดิบที่ใช้ในการรักษาเอนไซม์กับเอนไซม์ไม่2.4. เอนไซม์บำบัด ด้วยเอนไซม์ไม่ใช่เชิงพาณิชย์เพื่อประเมินผลของสารสกัดจากเอนไซม์ดิบในกลีบดอกดาวเรือง filtrated supernatants ที่ได้รับจากวัฒนธรรมผสมได้ผสมกับกลีบดอกที่แห้ง หรือสด 1:12 (w/v) ในอัตราส่วนและเก็บไว้บนหมุนปั่นที่ 28 ° C และ 175 rpm (Forma วิทยาศาสตร์ รุ่น 4520) ใน 24 ชม ตัวอย่างที่ถือว่าถูกถูกกรองแยกเฟสของแข็ง และของเหลว ระยะไม้ รักษา กลีบดอกดาวเรืองถูกประมวลผลรับแป้งดอกไม้ดาวเรือง2.5. เอนไซม์รักษา ด้วยค้า cellulaseใช้เอนไซม์ค้าโซลูชันที่ 0.05 ความเข้มข้น (ค่าความคลากเคลื่อน% (w/v)) และเอนโด 1, 4-β-d-glucanase (EC 3.2.1.4 จาก Aspergillus ไนเจอร์ บริษัทสารเคมี Sigma เซนต์หลุยส์ MO) กิจกรรมรักษาเอนไซม์ cellulase พาณิชย์ตาม Navarrete Bolaños et al. (2004a) ด้วย ในลักษณะเดียวกันสำหรับการรักษาเอนไซม์สกัดจากเอนไซม์ดิบ โซลูชั่นเชิงพาณิชย์เอนไซม์ถูกผสมกับกลีบแห้ง หรือสด 1:12 (w/v) ในอัตราส่วนและเก็บไว้บนหมุนปั่นที่ 28 ° C, 175 rpm สำหรับ 120 h ตัวอย่างถือว่า และเฟสของแข็งถูกประมวลผลเพื่อขอรับดาวเรืองดอกไม้แป้ง2.6. solid state หมักจุลินทรีย์ที่ผสมวัฒนธรรมถูกผสม ด้วยดอกดาวเรืองสดในอัตราส่วน 1.5:1 (w/v) บนเป็นส่วน ๆ หมุนถังหมักระบบภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้: 73.8% ความชื้น ความปั่นป่วนเป็นระยะ ๆ ทุก h 14.8 และ 4.1 ลิตรช่องอากาศ/นาที เงื่อนไขเหล่านี้เพิ่มการสกัดรวม xanthophylls (Navarrete Bolaños et al. 2004b) จากแป้งดอกดาวเรืองที่หมักได้2.7. ดาวเรืองดอกไม้แป้งผลิตภัณฑ์ที่ได้รับจากกระบวนการทั้งหมดเสนอ เอนไซม์บำบัด สถานะของแข็งหมัก และ ensilage ถูกอบแห้งในเตาสูญญากาศ (ห้องปฏิบัติการเลือกรุ่น 1430) ถึง 10% (± 1%) ความชื้นเนื้อหา และข้าวสาร (ตะแกรง 0.5 มิลลิเมตร) โดยใช้โรงสี Brinkmann (Brinkmann เดอะโซโห NY) แป้งได้ถูกวิเคราะห์ โดยวิธี AOAC (1984) 970.64 เพื่อกำหนดความเข้มข้นรวม xanthophylls และรับ oleoresin ผ่านกระบวนการ lixiviation2.8 xanthophylls สกัด ด้วยเฮกเซนแป้งที่ได้จากการรักษาอธิบายถูกสกัดในกระบวนการชุดงานที่ใช้เฮกเซนเกรดวิเคราะห์ (J.T. เบเกอร์ Mallinckrodt Baker Inc., Phillipsburg, NJ) ในแป้ง 1:6 (w/v) อัตราส่วนเฮกเซน และ ที่อุณหภูมิคงที่ 35 ° C ในช่วง 15 นาทีของเวลาสกัด (Navarrete Bolaños, Jiménez-ไอสลาสมาลวิ มาร์ตี เนซเปอร์โตริโก Domínguez Domínguez และ Regalado González, 2001) เมื่อแยกประกอบ ระยะแสง (เฮกเซน + xanthophylls) ต้องแยกของเฟสหนัก (ของแข็ง) ระยะแสงได้เข้มข้นรับ oleoresin สารสกัดที่ชั่งน้ำหนัก (ดิจิตอลเครื่องชั่งวิเคราะห์ Ohaus explorer) เพื่อกำหนดปริมาณผลผลิตการสกัด และตรวจสอบ xanthophylls ความเข้มข้นตามวิธี AOAC (1984) 970.64 ขั้นหนัก (แข็ง) คือ desolventized และปริมาณตัวทำละลายสะสมถูกกำหนด โดยความแตกต่างของน้ำหนัก (Ohaus explorer สมดุล)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทนำ
วัสดุและวิธีการ
2.1 แหล่งธรรมชาติ

ดอกดาวเรือง ( T. erecta) จากชุดเดียวถูกนำมาใช้สำหรับการทดลองทั้งหมด ชุดที่มีดอกไม้ที่มีอัตราส่วนสีสีเหลืองสีส้มของ 10:90 และน้ำหนักเฉลี่ย 30% ของภาชนะ ดอกไม้ดอกดาวเรืองถูกแบ่งออกเป็นสองชุด หนึ่งชุดได้รับการอนุรักษ์สดและแยกออกเป็นสองส่วนย่อย หนึ่งในส่วนย่อยเหล่านี้ได้รับการประมวลผลผ่านการหมักของรัฐที่มั่นคง ในฐานะที่เป็นสองกลุ่มย่อยดอกไม้สดกลีบถูกแยกออกจากภาชนะของพวกเขาและการประมวลผลผ่าน Ensilage ไม่สามารถควบคุมได้ สำหรับชุดที่สองกลีบถูกแยกออกจากภาชนะของพวกเขาและการประมวลผลผ่านการรักษาโดยใช้เอนไซม์สารสกัดดิบเอนไซม์ (เอนไซม์ที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์) หรือเซลลูโลสในเชิงพาณิชย์ เพื่อตรวจสอบผลของความชื้นดอกดาวเรืองเดิมต่อผลผลิตที่ดอกดาวเรืองถูกประมวลผลในสอง batches เฉพาะกิจการ: หนึ่งใช้กลีบดอกสดและอื่น ๆ โดยใช้กลีบดอกแห้ง กลีบดอกแห้งที่ได้จากการคายน้ำภายใต้สภาพแวดล้อมได้ถึงความชื้น 10% (± 1%) นอกจากนี้เพื่อหลีกเลี่ยงการเปลี่ยนแปลงทั้งดอกดาวเรืองสดและแห้ง, ชุดทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสและปิดผนึกในถุงพลาสติกชนิดสีดำจนกว่าพวกเขาจะถูกนำมาใช้ในระหว่างการตรวจทดลอง.

2.2 Ensilage ไม่มีการควบคุมแบบดั้งเดิม

เพื่อประเมิน Ensilage แบบดั้งเดิมดอกดาวเรืองรวมทั้งภาชนะพวกเขาถูกเก็บไว้ได้ถึงเจ็ดสัปดาห์ในลานปิดภายใต้เงื่อนไขที่ไม่สามารถควบคุมได้ ในตอนท้ายของผลิตภัณฑ์ที่ได้ถูกทำให้แห้งและประมวลผลเพื่อให้ได้แป้งดอกดาวเรือง.

2.3 วัฒนธรรมจุลินทรีย์

วัฒนธรรมผสมของเชื้อจุลินทรีย์ (Flavobacterium IIb, Acinetobacter anitratus และ Rhizopus nigricans) ได้รับการขยายพันธุ์และผสมในสัดส่วนตาม Navarrete-Bolaños et al, (2003) เพื่อให้ได้หัวเชื้อเริ่มต้นใช้ในแบบ solid-state หมักตรวจ นอกจากนี้หัวเชื้อเริ่มต้นที่ถูกกรองเพื่อให้ได้สารสกัดเอนไซม์ดิบที่ใช้ในการรักษาด้วยเอนไซม์เอนไซม์ที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์.

2.4 การรักษาด้วยเอนไซม์ที่มีเอนไซม์ที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์

เพื่อที่จะประเมินผลกระทบของสารสกัดจากเอนไซม์ดิบบนกลีบดอกดาวเรืองที่ supernatants ที่ได้จากการเพาะเลี้ยงผสมกรองถูกผสมกับกลีบแห้งหรือสดใน 1:12 (w / v) อัตราการใช้และเก็บไว้ในแบบหมุน เครื่องปั่นที่ 28 องศาเซลเซียสและ 175 รอบต่อนาที (Forma วิทยาศาสตร์รุ่น 4520) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการรักษาถูกกรองเพื่อแยกขั้นตอนของแข็งและของเหลวของพวกเขา ขั้นตอนที่เป็นของแข็งกลีบดอกดาวเรืองได้รับการรักษาที่ถูกประมวลผลเพื่อให้ได้แป้งดอกดาวเรือง.

2.5 เอนไซม์ที่มีเซลลูเลสในเชิงพาณิชย์

แก้ปัญหาเอนไซม์ทางการค้าที่ 0.05 (± 0.01% (w / v)) ความเข้มข้นและ Endo-1,4-β-D-glucanase (EC 3.2.1.4 จากเชื้อรา Aspergillus ไนเจอร์ซิก Chemical Co. , เซนต์หลุยส์ , MO) กิจกรรมที่ถูกนำมาใช้สำหรับการรักษาด้วยเอนไซม์เซลลูเลสในเชิงพาณิชย์ตาม Navarrete-Bolaños et al, (2004a) ในลักษณะเช่นเดียวกับการรักษาด้วยสารสกัดจากเอนไซม์เอนไซม์ดิบโซลูชั่นเอนไซม์ในเชิงพาณิชย์ได้รับการผสมกับกลีบแห้งหรือสด 1:12 (w / v) อัตราการใช้และเก็บไว้ในเครื่องปั่นแบบหมุนที่ 28 ° C, 175 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 120 ชั่วโมง ตัวอย่างได้รับการรักษาถูกกรองและขั้นตอนที่เป็นของแข็งที่ถูกประมวลผลเพื่อให้ได้แป้งดอกดาวเรือง.

2.6 การหมักของรัฐที่มั่นคง

จุลินทรีย์เชื้อผสมได้รับการผสมกับดอกดาวเรืองสดใน 1.5: 1 (w / v) อัตราการใช้ในแบบแยกส่วนหมุนระบบกลองหมักภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้: ความชื้น 73.8% ปั่นป่วนต่อเนื่องทุก 14.8 ชั่วโมงและ 4.1 ลิตรที่ไหลเข้า อากาศ / นาที เงื่อนไขเหล่านี้เพิ่มรวมการสกัด xanthophylls (Navarrete-Bolaños et al., 2004b) จากแป้งหมักดอกไม้ดอกดาวเรืองที่ได้รับ.

2.7 ดอกดาวเรืองแป้ง

ผลิตภัณฑ์ที่ได้จากกระบวนการเสนอทั้งหมดเอนไซม์หมักของรัฐที่มั่นคงและ Ensilage เป็นแห้งในเตาอบสูญญากาศ (Shel Lab. รุ่น 1430) ถึง 10% (± 1%) ความชื้นและข้าวสาร (0.5 มม ตะแกรง) โดยใช้โรงงาน Brinkmann (Brinkmann, นิวยอร์กซิตี้) แป้งที่ได้มาวิเคราะห์โดย AOAC (1984) วิธี 970.64 เพื่อตรวจสอบความเข้มข้น xanthophylls รวมและจะได้รับ oleoresin ผ่านกระบวนการ lixiviation ได้.

2.8 สกัดเฮกเซน xanthophylls โดย

แป้งที่ได้รับจากการรักษาอธิบายถูกสกัดในกระบวนการผลิตเป็นชุดโดยใช้เฮกเซนเกรดวิเคราะห์ (JT Baker, Mallinckrodt เบเกอร์อิงค์ลิฟส์, นิวเจอร์ซีย์) 1: 6 (w / v) แป้งอัตราส่วนเฮกเซนและที่อุณหภูมิคงที่ 35 องศาเซลเซียสในช่วงเวลา 15 นาทีของเวลาการสกัด (Navarrete-Bolañosเมเนซ-Islas ยั-มาร์ติเนDomínguez-Domínguezและ Regalado อนซาเลซ, 2001) เมื่อสกัดสรุปขั้นตอนแสง (เฮกเซน + xanthophylls) ต้องแยกจากกันของเฟสหนัก (ของแข็ง) เฟสแสงเข้มข้นที่จะได้รับสารสกัดจาก oleoresin ที่ชั่งน้ำหนัก (ชั่งวิเคราะห์ดิจิตอล Ohaus-Explorer) ปริมาณผลผลิตการสกัดและการตรวจสอบความเข้มข้น xanthophylls ตาม AOAC (1984) วิธี 970.64 เฟสหนัก (ของแข็ง) คือ desolventized และปริมาณตัวทำละลายที่เก็บไว้ถูกกำหนดโดยความแตกต่างของน้ำหนัก (ยอด Ohaus-Explorer)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แนะนำวัสดุและวิธีการ2.1 . แหล่งธรรมชาติดอกดาวเรือง ( T . erecta ) จากชุดเดียวที่ใช้ในทุกการทดลอง ชุดมีดอกไม้ด้วยสี เหลือง ส้ม และอัตราส่วนของ 10:90 น้ำหนักเฉลี่ย 30% ของเครื่อง . ดอกดาวเรือง ดอกไม้ถูกแบ่งออกเป็น 2 ชุด ชุดถนอมอาหารสดและถูกแบ่งออกเป็นสองส่วนย่อย . หนึ่งของข้อมูลเหล่านี้ถูกประมวลผลผ่านการหมักของแข็ง . อย่างที่สองย่อยดอกไม้ กลีบแยกจากภาชนะของพวกเขาและประมวลผลผ่านทางเปียกไม่มีการควบคุม . สำหรับชุดสอง กลีบแยกจากภาชนะของพวกเขาและประมวลผลผ่านทางเอนไซม์ เอนไซม์บําบัด โดยใช้วัตถุดิบสารสกัดเอนไซม์ที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์ ) หรือเซลลูโลสเชิงพาณิชย์ เพื่อตรวจสอบผลของความชื้นที่มีผลต่อผลผลิต ต้นดาวเรือง , ดาวเรืองได้ทำแยกเป็น 2 ชุด : ใช้กลีบดอกสดและอื่น ๆ ใช้กลีบดอกแห้ง กลีบดอกแห้ง ( dehydration ภายใต้สภาพแวดล้อมขึ้นอยู่กับความชื้น 10% ( ± 1% ) นอกจากนี้ เพื่อหลีกเลี่ยงการเปลี่ยนแปลง ทั้งสด และแห้ง ดอกดาวเรือง , ชุดทั้งหมดเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C และปิดผนึกไว้ในถุงพลาสติกสีดำจนกว่าพวกเขาจะถูกใช้ในวิธีทดลอง2.2 . ไม่มีการควบคุมแบบเปียกเพื่อประเมินเปียกแบบดั้งเดิม , ดอกดาวเรือง รวมทั้งพวกเขา receptacles ถูกเก็บไว้ถึงเจ็ดสัปดาห์ในบ้านปิดภายใต้เงื่อนไขที่ควบคุมไม่ได้ . สุดท้าย ได้ผลิตภัณฑ์เป็นแห้งและประมวลผลเพื่อให้ได้ดอกดาวเรืองแป้ง2.3 เพาะจุลินทรีย์วัฒนธรรมผสมของจุลินทรีย์ ( Acinetobacter anitratus และด้วยฟลาโวแบคทีเรียม , ได้ nigricans ) ไปผสมในสัดส่วนตาม นาบาร์เรเตโบลาเมือง OS et al . ( 2003 ) เพื่อให้ได้เริ่มต้นที่ใช้ในการหมักของเชื้อหรือ . นอกจากนี้ ปริมาณที่ผลิตได้เริ่มต้นที่จะได้รับวัตถุดิบสารสกัดเอนไซม์ ที่ใช้ในการรักษาด้วยเอนไซม์ เอนไซม์ ที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์2.4 . การรักษาด้วยเอนไซม์ เอนไซม์ที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์เพื่อศึกษาผลของการใช้เอนไซม์ดิบสกัดบนกลีบดอกดาวเรือง , supernatants ผลิตได้จากเชื้อจุลินทรีย์ผสมผสมกับกลีบแห้งหรือสด ในอัตราส่วน 1 : 12 ( w / v ) และเก็บไว้ในเครื่องเขย่าที่ 28 ° C และ 175 รอบต่อนาที ( - วิทยาศาสตร์ , รูปแบบใน ) เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ตัวอย่างที่ถูกกรอง การแยกของของแข็งและของเหลวเฟส ขั้นตอนที่เป็นของแข็งกลีบดอกดาวเรืองรักษา วิเคราะห์เพื่อให้ได้ดอกดาวเรืองแป้ง2.5 การรักษาด้วยเอนไซม์เซลลูเลส พาณิชย์กับเอนไซม์ทางการค้าในสารละลาย 0.05 ( ± 0.01 % ( w / v ) สมาธิ และ endo-1,4 - บีตา - d-glucanase ( EC 3.2.1.4 จาก Aspergillus niger , Sigma Chemical Co . , St . Louis , MO ) กิจกรรมเอนไซม์เซลลูเลสที่ใช้สำหรับการรักษาด้วยการค้าตาม นาบาร์เรเตโบลาเมือง OS et al . ( 2004a ) ในลักษณะเดียวกันเพื่อรักษาด้วยเอนไซม์ เอนไซม์ดิบสกัดเอนไซม์พาณิชย์โซลูชั่นผสมกับกลีบแห้งหรือสด ในอัตราส่วน 1 : 12 ( w / v ) และเก็บไว้ในเครื่องเขย่าที่ 28 ° C , 175 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 120 ชั่วโมง ตัวอย่างที่ถูกกรองและขั้นตอนที่เป็นของแข็งที่ถูกประมวลผลเพื่อให้ได้ดอกดาวเรืองแป้ง2.6 การหมักของแข็งจุลินทรีย์จุลินทรีย์ผสมก็ผสมกับดอกดาวเรืองสด 1.5 ( w / v ) อัตราส่วนในโมดูลกลองหมุนหมักระบบภายใต้เงื่อนไขต่อไปนี้ : ความชื้น 73.8 % อัตราการกวนทุก 14.8 H และ 4.1 ลิตร / นาที ลมเข้า เงื่อนไขเหล่านี้เพิ่มการสกัดสารแซนโทฟิลล์ทั้งหมด ( นาวาร์เร็ตเต้โบลาเมือง OS et al . , 2004b ) จากดอกดาวเรืองหมักแป้งได้2.7 . ดาวเรืองดอกไม้แป้งผลิตภัณฑ์ที่ได้จากการนำเสนอกระบวนการ , เอนไซม์ , การหมักสถานะของแข็งและเปียก , แห้งในเตาอบสูญญากาศ ( เชลแล็บ รุ่น 1 ) 10% ( ± 1% ) มีความชื้น และข้าวสาร ( 0.5-mm ตะแกรง ) โดยใช้ brinkmann โรงสี ( brinkmann Westbury , NY ) แป้งที่ได้วิเคราะห์โดยวิธีไม่ ( 1984 ) 970.64 เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของแซนโทฟิลล์รวมและเพื่อให้ได้ปริมาณโอลีโอเรซินผ่านกระบวนการ lixiviation .2.8 . การสกัดด้วยสารแซนโธฟิลล์แป้งที่ได้จากการอธิบายการทดลองสกัดโดยใช้เฮกเซนในกระบวนการแบทช์เกรดวิเคราะห์ ( J.T . Baker , Ltd phillipsburg เบเกอร์ ( NJ ) 1 : 6 ( w / v ) อัตราส่วนระหว่างแป้งและน้ำที่อุณหภูมิคงที่ 35 ° C ในช่วง 15 นาทีของเวลาในการสกัด ( นาวาร์เร็ตเต้โบลาเมือง OS , Jim é nez islas , ริโก้มาร์ตีเนซ ดอม โดมิงเกซ ดอม โดมิงเกซ และ regalado . kgm gonz lez , 2001 ) เมื่อสกัดจากเฟสแสง ( น้ำ + แซนโทฟิลล์ ) ต้องแยกจากขั้นหนัก ( แข็ง ) ระยะแสง เพื่อให้ได้สารสกัดจากโอลีโอเรซินที่ชั่งดิจิตอล วิเคราะห์ความสมดุล ohaus Explorer ) ปริมาณการสกัดและตรวจสอบปริมาณแซนโทฟิลล์ตามองศา เซลเซียส ( 1984 ) วิธี 970.64 . ขั้นหนัก ( แข็ง ) คือ desolventized และยังคงอยู่ตัวทำละลายปริมาณวิเคราะห์ความแตกต่างของน้ำหนักสมดุล Explorer ohaus )