Cryosections (16 μm-thick, n=8 for

Cryosections (16 μm-thick, n=8 for each rat) were then fixed in ice
cold 2% paraformaldehyde and 0.2 % glutaraldehyde, incubated in X-gal
solution (0.8 mol/L Na2HPO4, 0.2mol/L NaH2
PO4, 10 mmol/L KCl,
1 mol/L MgCl2, 100 mmol/L K4Fe(CN)6, 100 mmol/L K3Fe(CN)6, 10%
Triton, 2% X-gal in dimethylformamide) for 24 h at 37 °C, and dehydrated
in multiple ethanol baths. Other sections (n=4 for each rat) were
labelled by the CD68 antibody (AbD Serotec, UK). The formaldehyde
fixed pieces were dehydrated then embedded in paraffin. Sections of
6 μm thick (n=4 for each rat) were then stained with sirius red. The
CD68 and Sirius red sections were conducted on the rats sacrificed
on day 4. The isolated cardiac myocytes from the GFP- or siRNAtransfected
hearts were directly observed under a confocal microscope
(Olympus FV1000) with a 488 or 546 nm excitation.
Transfection quantifications were done with the ImageJ program,
by thresholding the acquired pictures, then creating selections of the
transfected areas. X-gal stained areas were expressed as a percentage
of the total transverse left ventricular section area

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

cryosections (16 ไมโครเมตรหนา, n = 8 สำหรับหนูแต่ละ) ได้รับการแก้ไขแล้วในน้ำแข็ง
% paraformaldehyde 2 เย็นและ Glutaraldehyde 0.2% บ่มใน x-แกลลอนโซลูชั่น
(0.8 mol / l Na2HPO4, 0.2mol / ลิตร nah2
PO4 10 มิลลิโมล / ลิตร KCL,
1 โมล / ลิตร MgCl2, 100 มิลลิโมล / ลิตร k4fe (CN) 6, 100 มิลลิโมล / ลิตร k3fe (CN) 6, 10%
Triton, 2% x-gal ใน dimethylformamide) เวลา 24 ชั่วโมง ที่ 37 ° C, และ
คายน้ำในห้องอาบน้ำของเอทานอลหลาย ๆส่วนอื่น ๆ (n = 4 สำหรับหนูแต่ละ) มี
ป้าย cd​​68 แอนติบอดี (อับดุล serotec, UK) ฟอร์มาล​​ดีไฮด์
คงเป็นชิ้นแห้งแล้วฝังในพาราฟิน ในส่วนของ
6 ไมโครเมตรหนา (n = 4 สำหรับหนูแต่ละ) มีการย้อมแล้วกับซิเรียสสีแดง
cd68 และส่วน Sirius แดงได้ดำเนินการในหนูเสียสละ
ในวันที่ 4 myocytes การเต้นของหัวใจที่แยกจาก GFP หรือ sirnatransfected
หัวใจที่ถูกตั้งข้อสังเกตโดยตรงภายใต้กล้องจุลทรรศน์ confocal
(OLYMPUS fv1000) ด้วยการกระตุ้นนาโนเมตรหรือ 488 546.
quantifications transfection ได้ทำกับโปรแกรม ImageJ
โดย thresholding ภาพที่ได้มานั้นสร้างการเลือกของพื้นที่ transfected
X-แกลลอนพื้นที่สีถูกแสดงเป็นร้อยละ
จากทั้งหมดขวางพื้นที่ส่วนกระเป๋าหน้าท้องด้านซ้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Cryosections (μm หนา 16, n = 8 สำหรับหนูแต่ละ) คงถูกแล้วน้ำแข็ง
เย็น paraformaldehyde 2% และ 0.2% glutaraldehyde, incubated ใน X-กัล
โซลูชัน (โมล 0.8 L Na2HPO4, 0.2mol / L NaH2
PO4, 10 mmol/L KCl,
1 โมล/L MgCl2, 100 mmol/L K4Fe (CN) 6, 100 mmol/L K3Fe (CN) 6, 10%
ไตรตั้น 2% X-กัลใน dimethylformamide) ใน 24 ชมที่ 37 ° Cและอบแห้ง
ในอาบน้ำเอทานอลหลาย ส่วนอื่น ๆ (n = 4 สำหรับแต่ละหนู) ถูก
labelled ด้วยแอนติบอดี CD68 (AbD Serotec, UK) ฟอร์มาลดีไฮด์
ชิ้นถาวรอบแห้งแล้ว ฝังในพาราฟิน ส่วนของ
μm หนา 6 (n = 4 สำหรับหนูแต่ละ) แล้วก็สีกับริอุสสีแดง ใน
CD68 และริอุสส่วนสีแดงได้ดำเนินการบนหนูเสียสละ
วัน 4 Myocytes หัวใจแยกจาก GFP - หรือ siRNAtransfected
หัวใจถูกสังเกตโดยตรงภายใต้
(Olympus FV1000) กล้องจุลทรรศน์ confocal กับ 488 หรือ 546 nm ในการกระตุ้นการ
Transfection quantifications ทำกับโปรแกรม ImageJ,
โดย thresholding ได้รับภาพ การเลือก
transfected พื้นที่ X-กัลสีพื้นที่ที่แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์
รวม transverse ที่ตั้งส่วนหัวใจห้องล่างซ้าย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

cryosections ( 16 μ m - หนา, N = 8 สำหรับแต่ละหนู)ได้กำหนดในน้ำแข็ง
เย็น paraformaldehyde 2% และ 0.2% glutaraldehyde , incubated ใน X - แกลลอน
โซลูชัน( 0.8 Website : www . mol / L นา 2 hpo4 , 0.2 Website : www . mol / L NAH 2
po4 , 10 มิลลิโมล/ L kcl ,
1 Website : www . mol / L mgcl2 , 100 มิลลิโมล/ L K 4 แซนตาเฟ( CN ) 6 , 100 มิลลิโมล/ L K 3 แซนตาเฟ( CN ) 6 , 10%
Triton , 2% x - แกลลอนใน dimethylformamide )สำหรับ 24 ชั่วโมงที่ 37 ° C ,และความร้อน
เอทานอลในหลายอ่างอาบน้ำ.ส่วนพื้นที่อื่นๆ( N = 4 สำหรับหนูแต่ละ)เป็น
ปิดป้ายโดยซีดี 68 แอนทิบอด - อิ(ดินลูกรังอยู่ปะปนกับหินชนิดต่างๆ serotec สหราชอาณาจักร) เป็นชิ้นเล็กชิ้นน้อยฟอร์มาลดีไฮด์
คงที่มีความร้อนแล้วเอ็มเบ็ดเด็ดในน้ำมันก๊าด ส่วนต่างๆของμ m
6 หนา( N = 4 สำหรับหนูแต่ละ)ได้แต้มสีพร้อมด้วย sirius สีแดง
แผ่นซีดี 68 และ sirius สีแดงส่วนต่างๆที่ถูกจัดขึ้นในวันพวกหนูได้ถวาย
ในวันที่ 4 myocytes หัวใจแยกจาก gfp - sirnatransfected หรือ
ตามมาตรฐานใจก็ปฏิบัติตามโดยตรงกล้องจุลทรรศน์ confocal
( Olympus ตรงโปรโตคอล FV 1000 )พร้อมด้วย 488 หรือ 546 nm ไดนาโม)ด้วยไฟฟ้าที่. quantifications
transfection ก็ทำได้ด้วยโปรแกรม imagej ที่
โดย thresholding ภาพ ได้รับแล้วการสร้างทางเลือกของพื้นที่
transfected ได้ บริเวณพื้นที่แต้มสี X - แกลลอนมีเป็นเปอร์เซ็นต์
ซึ่งจะช่วยการตั้งอยู่คนละข้างรวมพื้นที่มาตราและ