Extraction and Quantification of DN

Extraction and Quantification of DNA.—Fungal mycelium for DNA extraction was grown in 150 mL of Malt extract yeast extract broth and gyrated at 125 rpm for 4–6 d at 2862C. The mycelia were harvested by filtration through a double layer of cheese cloth and freeze dried under vacuum. Total genomic DNA was extracted as described by Lee and Taylor (1992), with some modifications. Approximately 200 gm of lyophilized mycelium was taken into 1.5 mL eppendorf tube, crushed with micro-pestle, mixed with 300 mL of lysis solution (50 mM Tris-HCl, pH 7.8, 50 mM Na2-EDTA, 3% SDS) to which 1% 2-mercaptoethanol was added freshly and in-cubated at 65 C for 4 h. Proteinase K (600 mgmL21)was added and further incubated at 35 C for 1 h. The extracted genomic DNA was purified by phenol-chloroform method and precipitated with ethanol. The pure quantified DNA samples were stored at 4 C for further use.

Identification and detection of Macrophomina phaseolina by using species-specific primers and probe. Available from: https://www.researchgate.net/publication/5517783_Identification_and_detection_of_Macrophomina_phaseolina_by_using_species-specific_primers_and_probe [accessed Sep 21, 2015].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดและนับของดีเอ็นเอซึ่งปลูกใน 150 mL ของมอลต์สารสกัดจากยีสต์สารสกัดจากซุป และ gyrated ที่ 125 rpm สำหรับ d 4 – 6 ที่ 2862C. mycelium เชื้อราสำหรับการสกัดดีเอ็นเอ Mycelia จะถูกเก็บเกี่ยว โดยการกรองผ่านชั้นสองของผ้าชี และตรึงแห้งภายใต้สุญญากาศ รวม genomic DNA ถูกสกัดตามที่อธิบายไว้ โดยลีและเทย์เลอร์ (1992), มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง Lyophilized mycelium ประมาณ 200 กรัมถูกถ่ายลงในหลอด eppendorf 1.5 mL บดกับไมโคร pestle ผสมกับ 300 mL ของโซลูชัน lysis (50 mM ตรี-HCl, pH 7.8, 50 mM Na2 EDTA, SDS 3%) ที่ 1% 2 mercaptoethanol ถูกเพิ่มสดและใน cubated ที่ C 65 สำหรับ 4 h. Proteinase K เพิ่ม และ incubated เพิ่มเติม ที่ 35 C สำหรับ 1 h (600 mgmL21) DNA genomic แยกบริสุทธิ์ โดยวิธีวางคลอโรฟอร์ม และตะกอน ด้วยเอทานอล ตัวอย่างดีเอ็นเอ quantified บริสุทธิ์ถูกเก็บไว้ที่ C 4 สำหรับใช้ต่อไป การระบุและตรวจพบ Macrophomina phaseolina โดยใช้ไพรเมอร์ species-specific และโพรบ จาก: https://www.researchgate.net/publication/5517783_Identification_and_detection_of_Macrophomina_phaseolina_by_using_species-specific_primers_and_probe [เข้าถึง Sep 21, 2015]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดและปริมาณของดีเอ็นเอ - เส้นใยเชื้อราเพื่อการสกัดดีเอ็นเอ ปลูกใน 150 มิลลิลิตร สารสกัดจากยีสต์ สารสกัดจากมอลต์และน้ำซุป gyrated 125 รอบต่อนาที 4 – 6 D ที่ 2862c . เส้นใยเก็บเกี่ยวโดยการกรองผ่านสองชั้นของผ้าชีสและแช่แข็งแห้งภายใต้สูญญากาศ รวมจีโนมดีเอ็นเอตามที่อธิบายไว้โดย ลี และ เทย์เลอร์ ( 2535 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนประมาณ 200 กรัมของโปรตีนเส้นใยถูก 1.5 ml หลอดเพนดอร์ฟ , ไมโครตำบดผสมกับ 300 มิลลิลิตร ( 50 มม. โดยการสลายสารละลาย HCl , pH 7.8 , 50 มม. N EDTA , 3 % SDS ) ที่ 1 เพียงอย่างเดียวเพิ่มใหม่ใน cubated ที่ 65 C เป็นเวลา 4 ชั่วโมง โปรเค 600 mgml21 ) คือการเพิ่มและเพิ่มเติมบ่มที่อุณหภูมิ 35 องศาเซลเซียสนาน 1 ชั่วโมงสกัดดีเอ็นเอบริสุทธิ์โดยวิธีคลอโรฟอร์ม ฟีนอลและตกตะกอนด้วยเอทานอล บริสุทธิ์ปริมาณดีเอ็นเอ ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เพื่อการใช้งานต่อไป

การระบุและตรวจสอบ macrophomina ชีวภาพโดยใช้ไพรเมอร์ และเผ่าพันธุ์ - เฉพาะการสอบสวน หาได้จาก : https://www.researchgate .สุทธิ / สิ่งพิมพ์ / 5517783_identification_and_detection_of_macrophomina_phaseolina_by_using_species-specific_primers_and_probe [ เข้าถึง Sep 21 , 2015 ]