2.4. Proteomic analysisThe multi-en

2.4. Proteomic analysis
The multi-enzyme preparation was applied to a 10% SDS-PAGEgel and separated using a MiniProtean II cell (Biorad, Hercules, CA).The protein bands were visualized using Coomassie blue R-250 staining and were manually excised into four fractions according to their apparent molecular weights (up to 116.0 kDa). The polypep-tides in gel were then digested with trypsin (Ettan Spot Handling Workstation User Manual 18-1153-55 Edition AC, GE Healthcare Biosciences, Uppsala, Sweden). The tryptic peptides were resuspended with 0.1% formic acid and analyzed on a SYNAPT HDMSmass spectrometer (Waters, Milford, MA) according to Wong-wilaiwalin et al. [21]. All MS/MS spectra were searched using the Mascot®search engine (Matrix Science, Boston, MA) against the NCBI-nr database using the following criteria: enzyme trypsin,static modification of cysteine (+57.05130 Da), and differential modification of methionine (+15.99940). The search results were filtered by cross-correlation versus charge state (+1 ≥ 1.5, +2 ≥ 2.0,+3 ≥ 2.5) and protein probability (minimum 1.00E-3). The candidate protein queries were mapped to the UniProt Knowledge base(UniProtKB) [22].

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. Proteomic วิเคราะห์การเตรียมเอนไซม์หลายใช้ 10% SDS PAGEgel และการแยกใช้เซลล์ MiniProtean II (Biorad เฮอร์คิวลิส CA) แถบโปรตีนที่แสดงเป็นภาพใช้ย้อมสี Coomassie blue R-250 แล้วได้ด้วยตนเองสรรพสามิตเป็นสี่ส่วนตามน้ำหนักโมเลกุลชัดเจน (ถึง 116.0 kDa) น้ำ polypep เจได้แล้วถูกย่อย ด้วยทริปซิน (Ettan จุดการจัดการเวิร์กสเตชันคู่มือ 18-1153-55 รุ่น AC, GE ดูแลสุขภาพออก อุปซาลา สวีเดน) เปปไทด์ tryptic resuspended กับกรดฟอร์มิก 0.1% และวิเคราะห์แบบ SYNAPT HDMSmass สเปกโตรมิเตอร์ (น้ำ ลฟอร์ด MA) ตามวง wilaiwalin et al. [21] ทั้งหมด MS/MS สเปกตรัมค้นใช้โปรแกรมค้นหา Mascot® (วิทยาศาสตร์เมตริกซ์ Boston, MA) กับฐานข้อมูล NCBI ยางพาราโดยใช้เกณฑ์ต่อไปนี้: เอนไซม์ทริปซิน ปรับเปลี่ยนคง cysteine (+57.05130 ดา), และปรับเปลี่ยนความแตกต่างของเมไทโอนีน (+15.99940) ผลการค้นหากรอง โดยสหสัมพันธ์ข้ามเมื่อเทียบกับค่าสถานะ (+ 1 ≥ 1.5, + 2 ≥ 2.0, + 3 ≥ 2.5) และโปรตีนน่าเป็น (ขั้นต่ำ 1.00E-3) สอบถามสมัครโปรตีนถูกแมปไป base(UniProtKB) รู้ UniProt [22]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 วิเคราะห์ proteomic
การเตรียมความพร้อมหลายเอนไซม์ถูกนำไปใช้ 10% SDS-PAGEgel และแยกโดยใช้เซลล์ MiniProtean ii (Biorad ดาวแคลิฟอร์เนีย) ได้โดยง่ายแถบโปรตีนที่ถูกมองเห็นโดยใช้ Coomassie สีฟ้า R-250 การย้อมสีและตัดด้วยตนเองเป็นสี่เศษส่วน ตามน้ำหนักโมเลกุลของพวกเขาอย่างเห็นได้ชัด (ถึง 116.0 กิโลดาลตัน) ที่กระแสน้ำ polypep ในเจลถูกย่อยแล้วกับ trypsin (Ettan จุด Handling ข่ายผู้ใช้คู่มือการใช้งาน 18-1153-55 รุ่น AC, GE Healthcare ชีววิทยาศาสตร์, Uppsala, สวีเดน) เปปไทด์ทริปซิ resuspended กับกรดฟอร์มิ 0.1% และวิเคราะห์ใน SYNAPT HDMSmass สเปกโตรมิเตอร์ (Waters, ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) ตามวงศ์ wilaiwalin et al, [21] ทั้งหมด MS / MS สเปกตรัมถูกค้นหาโดยใช้เครื่องมือMascot®search (Matrix วิทยาศาสตร์, บอสตัน) กับฐานข้อมูล NCBI NR-โดยใช้เกณฑ์ต่อไปนี้: เอนไซม์ทริปซิดัดแปลงคงที่ของ cysteine (57.05130 ดา) และค่าการเปลี่ยนแปลงของ methionine (15.99940) ผลการค้นหาที่ถูกกรองโดยข้ามความสัมพันธ์เมื่อเทียบกับค่าใช้จ่ายของรัฐ (1 ≥ 1.5 2 ≥ 2.0 + 3 ≥ 2.5) และความน่าจะเป็นโปรตีน (ขั้นต่ำ 1.00E-3) แบบสอบถามโปรตีนผู้สมัครที่ได้รับการแมปไป UniProt ฐานความรู้ (UniProtKB) [22]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การวิเคราะห์โปรตีนการเตรียมเอนไซม์หลายอัตรา 10% SDS pagegel และแยกใช้ miniprotean 2 เซลล์ ( biorad , Hercules , CA . ) เป็นปรากฏการณ์การใช้แถบโปรตีนเหล่านี้น่าจะเป็น r-250 สีฟ้าติดอยู่ด้วยตนเองที่ตัดเป็นสี่ส่วนตามน้ำหนักของพวกเขาปรากฏโมเลกุล ( ถึง 116.0 kDa ) การ polypep กระแสน้ำในเจลแล้วย่อยด้วยเอนไซม์ ( ettan จุดการจัดการผู้ใช้เวิร์กสเตชันคู่มือ 18-1153-55 รุ่น AC , GE Healthcare ชีววิทยาศาสตร์ อุปซอลา , สวีเดน ) มีเปปไทด์อาหารถูก resuspended กับ 0.1% กรดและวิเคราะห์ใน synapt hdmsmass Spectrometer ( น้ำ , ฟอร์ด , MA ) ตามวง wilaiwalin et al . [ 21 ] ทั้งหมดของ MS / MS spectra ถูกตรวจค้นโดยใช้มาสคอต® Search Engine ( Matrix , วิทยาศาสตร์ , Boston , MA ) กับ ncbi NR ฐานข้อมูลโดยใช้เกณฑ์ต่อไปนี้ : เอนไซม์เอนไซม์ การเปลี่ยนแปลงคงที่ของซิสเทอีน ( + 57.05130 ดา ) และการปรับความแตกต่างของเมทไธโอนีน ( + 15.99940 ) ผลการค้นหาถูกกรองโดย cross-correlation เมื่อเทียบกับค่าใช้จ่ายของรัฐ ( + 1 + 2 ≥≥ 1.5 , 2.0 , 2.5 และความน่าจะเป็น + 3 ≥ ) โปรตีน ( ขั้นต่ำ 1.00e-3 ) โปรตีนที่ถูกแมปไปยังผู้สมัครแบบสอบถาม uniprot ฐานความรู้ ( uniprotkb ) [ 22 ]