Ltd, London, UK). Decimal dilutions

Ltd, London, UK). Decimal dilutions of cheese homogenates were
prepared in sterile 0.1% (w/v) peptone solution. Lactococci counts
from commercial starter were determined on duplicate plates of
Tryptic Glucose Yeast agar (Biolife) with 0.1% added skim milk
(Biolife), after aerobic incubation for 24 h at 30 C. Clostridial spore
counts were determined on RCM agar as described in Section 2.2.
Microbiological analyses were carried out at 1, 7,15, 30 and 60 days.
2.5. Detection of late blowing defect
During the 60-d ripening of cheeses, qualitative formation of gas
and off-odors was regularly monitored by 3 trained panelists, by
visual inspection and by smell. Cheeses with LBD showed blownpackaging,
irregular eyes, cracks or splits, as consequence that the
cheese matrix could not withstand the pressure of produced gas,
and unpleasant or rancid odor.
2.6. Physico-chemical determinations
Cheese pH was measured in duplicate by means of a Crison pH
meter (model GPL 22, Crison Instruments, Barcelona, Spain) using a
Crison penetration electrode (model 52-3.2). Dry matter content
was determined in duplicate after drying to constant weight in a
vacuum oven at 100 C. pH and dry matter content were determined
at 1, 7, 15, 30 and 60 days.
Volatile compounds of 60-d-old cheeses were extracted in
duplicate by automated solid-phase microextraction (SPME) using
a CTC CombiPal autosampler (Agilent, Palo Alto, CA) and analyzed
by gas chromatography-mass spectrometry (GCeMS) (HP 6890-
MSD HP 5973, Agilent). Ten grams of cheese were homogenized
in a mechanical grinder with 15 g of Na2SO4 and 30 mL of an
aqueous solution of 543 mg/L cyclohexanone. Five grams of the
mixture were weighed in a 20 mL headspace glass vial sealed with
a PTFE faced silicone septum (Supelco, Bellefonte, PA, USA). Vials
were placed on autosampler tray and subjected to SPME. Both
equilibration and extraction phases were carried out at 37 C for
20 and 30 min, respectively. A 2 cm
50/30 mm StableFlex
Divinylbenzene/Carboxen/Polydimethylsiloxane (DVB/CAR/
PDMS) coated fiber (Supelco, Bellefonte, PA) was used for headspace
extraction. Desorption into the GC injection port was at
260 C for 10 min in splitless mode. Before use, the fiber was
conditioned in the GC injection port at 270 C for 1 h as recommended
by the manufacturer. Chromatographic separation was
carried out in a Zebron 100% polyethylene glycol capillary column
(60 m long; 0.25 mm internal diameter; 0.50 mm film thickness;
ZB-WAXplus, Phenomenex, Torrance, CA) with 1 mL/min helium
flow, with the following temperature program: 16 min at 45 C,
first ramp 4 C/min to 110 C, 9 min at 110 C, second ramp at
15 C/min to 220 C and 5 min at 220 C, final ramp to 240 C at
10 C/min and 2 min at 240 C. The detection, identification and
quantification of volatile compounds were carried out as
described by Garde, Carbonell, Fern
andez-García, Medina, and
Nu~nez (2002). Relative abundances of compounds were
expressed as percentages of their peak areas on the peak area of
the internal standard cyclohexanone.
Color parameters at the surface of 60-d-old cheeses were
measured using a CM-700 spectrocolorimeter equipped with
SpectraMagic NX VA.9 software (Minolta Camera Co., Osaka, Japan).
Cheese samples were cut into 1 cm thick slices. The reference
illuminant was D65 (standard daylight) and the observer angle was
10. Results were reported as L* (lightness), a* (green to red), b*
(blue to yellow), C (color saturation or chroma) and h (hue angle)
parameters. L* represents lightness, a* to a* indicates green to red
and b* to b* indicates blue to yellow. After color parameters were
read, the sample was rotated 90 and read again. This procedure
was carried out in quadruplicate. The method of color measurement
applied was Specular Component Excluded (SCE) where only
the diffuse reflectance is measured, which correlates better to the
way the observer sees the color of an object.
2.7. Statistical analysis
Statistical treatment of data was performed by means of SPSS
Win 12.0 program (SPSS Inc. Chicago, IL, USA). Data were analyzed
by ANOVA using a general linear model (GLM). Analysis of variance
with cheese age as main effect was performed on analytical variables,
and comparison of means was carried out by Tukey's test.
Principal component analysis (PCA) with Varimax rotation was
carried out on volatile compounds.
3. Results and discussion
3.1. Lactococci counts
No significant differences in lactococci counts from commercial
starter were found among all cheeses at day 1, remaining nearly
constant until day 30 and decreasing after 60 d (Table 1). However,
a higher survival of starter lactococci was observed at the end of
ripening in cheeses inoculated with C. tyrobutyricum CECT 4011 and
INIA 68 than in control cheese and cheeses contaminated with
other Clostridium species. This fact points out a positive effect of the
metabolism of C. tyrobutyricum strains in cheese, creating a propitious
environment for lactococci endurance. G
omez-Torres et al.
(2014) also reported higher levels of lactococci in bovine milk
cheese made with commercial starter MA 16 and C. tyrobutyricum
CECT 4011 spores than in cheese made only with commercial
starter. Carbohydrate starvation and energy depletion prompt lactococci
to shift their metabolism from glycolysis to amino acid
catabolism and the additional source of energy increases the survival
of L. lactis (Stuart, Chou, & Weimer, 1999). In a previous work
in our laboratory C. tyrobutyricum strains showed proteolytic activity
in milk (S. Garde, unpublished results) and could have supplied
the amino acids that lactococci needed for amino acid
metabolism.
3.2. Symptoms of late blowing defect and spore counts
We regularly monitored the formation of gas and off-odors in
cheeses by visual inspection and by smell. Control cheese showed
vacuum-packaging, uniform texture, without cracks or splits
(Fig. 1B and D), and a pleasant lactic odor. All spores from autochthonous
and type-strains clostridia we used were able to induce
LBD in cheeses in different degrees and stages of ripening (Table 2).
Cheeses with LBD showed blown-packaging, irregular eyes, cracks
or splits as consequence of evolved gas and unpleasant or rancid
odor. Cheeses made with C. tyrobutyricum CECT 4011 and INIA 68
strains were the first to show blowing, with very pronounced
symptoms at the end of ripening (Fig. 1A and C). However, cheeses
made with C. butyricum CECT 361, C. beijerinckii INIA 63, and
C. sporogenes INIA 71, gave rise to belated and milder cheese
spoilage symptoms (Table 2). Klijn et al. (1995) only detected LBD in
cheeses when cheese milk was artificially contaminated with
spores of C. tyrobutyricum, pointing out C. tyrobutyricum as the
primary cause of LBD in cheese. Nonetheless, our results demonstrate
that other Clostridium species contribute to the appearance of
this defect, in accordance with other studies (Cocolin et al., 2004; Le
Bourhis et al., 2005, 2007).
In control cheese, we did not detect spore forming microorganisms
(Table 1), indicative that the milk was free of clostridial
spores. In cheeses artificially contaminated with Clostridium strains,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จำกัด ลอนดอน สหราชอาณาจักร) มี dilutions ทศนิยมของชี homogenatesเตรียมในโซลูชัน peptone 0.1% (w/v) ใส่ Lactococci นับจาก starter พาณิชย์ถูกกำหนดบนแผ่นซ้ำของSkim นมเพิ่ม tryptic ยีสต์น้ำตาลใน agar (Biolife) 0.1%(Biolife), หลังจากบ่มแอโรบิกใน 24 ชมที่ 30 C. Clostridial สปอร์นับถูกกำหนดบน RCM agar ตามที่อธิบายไว้ในหัวข้อ 2.2วิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาได้ดำเนินที่ 1, 7,15, 30 และ 60 วัน2.5 การพัดความบกพร่องของสายตรวจระหว่าง ripening 60 d ของเนยแข็ง คุณภาพการก่อตัวของก๊าซและออกกลิ่นประจำได้ถูกติดตาม โดย panelists ฝึกอบรม 3 โดยตรวจสอบภาพ และกลิ่น เนยแข็งกับ LBD พบ blownpackagingไม่สม่ำเสมอดวงตา รอยแตก หรือ แยก เป็นสัจจะที่จะชีสเมตริกซ์สามารถทนต่อความดันของก๊าซที่ผลิตและกลิ่นไม่พึงประสงค์ หรือ rancid2.6. ดิออร์ determinationsชีส pH ถูกวัดซ้ำ โดย Crison pHเมตร (รุ่น GPL 22 เครื่อง Crison บาร์เซโลนา สเปน) ใช้เป็นCrison เจาะไฟฟ้า (รุ่น 52-3.2) เนื้อหาเรื่องแห้งกำหนดในซ้ำหลังจากแห้งน้ำหนักคงที่ในการเตาอบเครื่องดูดฝุ่นที่ pH 100 C. และเนื้อหาเรื่องแห้งถูกกำหนดที่ 1, 7, 15, 30 และ 60 วันมีสกัดสารระเหยของเนยแข็ง 60 d อายุในซ้ำโดยอัตโนมัติใช้ microextraction เฟสของแข็ง (SPME)autosampler CTC CombiPal (Agilent ดัลลัส CA) และวิเคราะห์โดย spectrometry chromatography ก๊าซมวล (GCeMS) (HP 6890-มือ HP 5973, Agilent) 10 กรัมของชีได้ homogenized เป็นกลุ่มในเครื่องบดเครื่องจักรกลของ Na2SO4 15 กรัมและ 30 mL ของการละลายของ cyclohexanone 543 mg/L กรัม 5 ของการส่วนผสมมีน้ำหนักในแก้วคอนแทค headspace 20 mL ปิดสนิทด้วยไฟเบอร์การเผชิญ septum ซิลิโคน (Supelco, Bellefonte, PA สหรัฐอเมริกา) Vialsวางบนถาด autosampler และการ SPME การ ทั้งสองอย่างระยะ equilibration และสกัดได้ดำเนินการใน 37 C สำหรับ20 และ 30 นาที ตามลำดับ StableFlex 2 ซม. 50/30 มม.Divinylbenzene/Carboxen/Polydimethylsiloxane (DVB/รถ /PDMS) ใช้สำหรับ headspace เคลือบไฟเบอร์ (Supelco, Bellefonte, PA)สกัด Desorption เข้าพอร์ตฉีด GC อยู่ในC 260 สำหรับ 10 นาทีในโหมด splitless ก่อนใช้ ไฟเบอร์จะถูกปรับอากาศในท่าฉีด GC ที่ 270 C สำหรับ 1 h แนะนำโดยผู้ผลิต แยก chromatographic ถูกดำเนินการในคอลัมน์เส้นเลือดฝอย polyethylene glycol 100% Zebron(ยาว 60 เมตร เส้นผ่าศูนย์กลางภายใน 0.25 มม. ความ หนา 0.50 มม.ฟิล์มZB-WAXplus, Phenomenex รันซ์ CA) กับฮีเลียม 1 mL/minกระแส โปรแกรมอุณหภูมิต่อไปนี้: 16 นาทีที่ 45 C4 C/นาที ถึง 110 C, 9 นาทีที่ 110 C ทางลาด ทางลาดที่สองก่อน15 C/นาที 220 C และที่ C 220 ทางลาดสุดท้ายถึง 240 C ที่ 5 นาที10 C/นาที และนาที 2 ที่ค. 240 ตรวจสอบ รหัส และนับของสารประกอบที่ระเหยได้ดำเนินการเป็นโดย Garde, Carbonell เฟิร์น andez García เมดิน่า และNu ~ nez (2002) Abundances สัมพัทธ์ของสารได้แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของพื้นที่สูงสุดของพวกเขาบนพื้นที่สูงสุดของcyclohexanone มาตรฐานภายในมีพารามิเตอร์สีที่พื้นผิวของเนยแข็งอายุ 60 dวัดโดยใช้ spectrocolorimeter CM 700 ที่เพียบพร้อมไปด้วยซอฟต์แวร์ SpectraMagic NX VA.9 (บริษัทกล้อง Minolta โอซาก้า ญี่ปุ่น)ตัวอย่างชีถูกตัดเป็นชิ้นหนา 1 ซม. การอ้างอิงหลอดไฟถูก D65 (มาตรฐานตามฤดูกาล) และมุมนักการ10 มีรายงานผลเป็น L * (ความสว่าง), เป็น * b (สีเขียวกับสีแดง), *(สีฟ้ากับสีเหลือง), C (ความเข้มของสีหรือความ) และ h (เว้มุม)พารามิเตอร์ L * แสดงถึงความสว่าง การ * ให้การ * บ่งชี้สีเขียวกับสีแดงและข * ไป b ระบุสีฟ้ากับสีเหลือง หลังจากที่มีพารามิเตอร์สีอ่าน ตัวอย่าง 90 หมุน และอ่านอีกครั้ง ขั้นตอนนี้ได้ดำเนินการใน quadruplicate วิธีการวัดสีใช้ถูกแยกส่วนประกอบของแสงสะท้อนแบบกระจก (SCE) เดียวแบบสะท้อนแสงแบบกระจายวัด ซึ่งดีคู่กับการทางดิออบเซิร์ฟเวอร์มองเห็นสีของวัตถุ2.7. สถิติวิเคราะห์ทำการรักษาข้อมูลทางสถิติโดยใช้โปรแกรม12.0 ชนะโปรแกรม (โปรแกรม Inc. ชิคาโก IL สหรัฐอเมริกา) มีวิเคราะห์ข้อมูลโดยการวิเคราะห์ความแปรปรวนโดยใช้แบบจำลองเชิงเส้นทั่วไป (GLM) วิเคราะห์ผลต่างของชีอายุเป็นผลหลักทำตามตัวแปรวิเคราะห์และเปรียบเทียบหมายถึงถูกดำเนินการ โดยการทดสอบของ Tukeyวิเคราะห์ส่วนประกอบหลัก (PCA) กับ Varimax หมุนได้carried out on volatile compounds.3. Results and discussion3.1. Lactococci countsNo significant differences in lactococci counts from commercialstarter were found among all cheeses at day 1, remaining nearlyconstant until day 30 and decreasing after 60 d (Table 1). However,a higher survival of starter lactococci was observed at the end ofripening in cheeses inoculated with C. tyrobutyricum CECT 4011 andINIA 68 than in control cheese and cheeses contaminated withother Clostridium species. This fact points out a positive effect of themetabolism of C. tyrobutyricum strains in cheese, creating a propitiousenvironment for lactococci endurance. G
omez-Torres et al.(2014) also reported higher levels of lactococci in bovine milkcheese made with commercial starter MA 16 and C. tyrobutyricumCECT 4011 spores than in cheese made only with commercialstarter. Carbohydrate starvation and energy depletion prompt lactococcito shift their metabolism from glycolysis to amino acidcatabolism and the additional source of energy increases the survivalof L. lactis (Stuart, Chou, & Weimer, 1999). In a previous workin our laboratory C. tyrobutyricum strains showed proteolytic activityin milk (S. Garde, unpublished results) and could have suppliedthe amino acids that lactococci needed for amino acidmetabolism.3.2. Symptoms of late blowing defect and spore countsWe regularly monitored the formation of gas and off-odors incheeses by visual inspection and by smell. Control cheese showedvacuum-packaging, uniform texture, without cracks or splits(Fig. 1B and D), and a pleasant lactic odor. All spores from autochthonousand type-strains clostridia we used were able to induceLBD in cheeses in different degrees and stages of ripening (Table 2).Cheeses with LBD showed blown-packaging, irregular eyes, cracksor splits as consequence of evolved gas and unpleasant or rancidodor. Cheeses made with C. tyrobutyricum CECT 4011 and INIA 68strains were the first to show blowing, with very pronouncedsymptoms at the end of ripening (Fig. 1A and C). However, cheesesmade with C. butyricum CECT 361, C. beijerinckii INIA 63, andC. sporogenes INIA 71, gave rise to belated and milder cheesespoilage symptoms (Table 2). Klijn et al. (1995) only detected LBD incheeses when cheese milk was artificially contaminated withspores of C. tyrobutyricum, pointing out C. tyrobutyricum as theprimary cause of LBD in cheese. Nonetheless, our results demonstratethat other Clostridium species contribute to the appearance ofthis defect, in accordance with other studies (Cocolin et al., 2004; LeBourhis et al., 2005, 2007).In control cheese, we did not detect spore forming microorganisms(Table 1), indicative that the milk was free of clostridialspores. In cheeses artificially contaminated with Clostridium strains,

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จำกัด ลอนดอนสหราชอาณาจักร) เจือจางทศนิยมของ homogenates
ชีสที่ถูกจัดทำขึ้นผ่านการฆ่าเชื้อ0.1% (w / v) สารละลายเปปโตน Lactococci
นับจากเริ่มต้นที่ได้รับการพิจารณาในเชิงพาณิชย์บนจานซ้ำ
Tryptic กลูโคสอาหารเลี้ยงเชื้อยีสต์ (BioLife) กับนมพร่องมันเนย 0.1% เพิ่ม
(BioLife) หลังจากบ่มแอโรบิกเป็นเวลา 24 ชั่วโมงวันที่ 30 องศาเซลเซียส Clostridial
สปอร์นับได้รับการพิจารณาในอาหารเลี้ยงเชื้อRCM ตามที่อธิบายไว้ในข้อ 2.2.
การวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาได้ดำเนินการที่ 1, 7,15, 30 และ 60 วัน.
2.5 การตรวจหาข้อบกพร่องเป่าปลายในช่วงสุก 60 d ของชีสคุณภาพการก่อตัวของก๊าซและกลิ่นไม่พึงประสงค์ออกจากได้รับการตรวจสอบอย่างสม่ำเสมอโดย3 ผู้ร่วมอภิปรายการฝึกอบรมโดยการตรวจสอบภาพและกลิ่น ชีสกับ LBD แสดงให้เห็น blownpackaging, สายตาผิดปกติรอยแตกหรือแยกเป็นผลว่าเมทริกซ์ชีสไม่สามารถทนต่อแรงดันของก๊าซที่ผลิต, และกลิ่นที่ไม่พึงประสงค์หรือหืน. 2.6 หาความกายภาพและทางเคมีpH ชีสวัดในที่ซ้ำกันโดยวิธีการของพีเอช Crison เมตร (รุ่นจีพี 22 เครื่องมือ Crison, บาร์เซโลนา, สเปน) โดยใช้อิเล็กโทรดเจาะCrison (รุ่น 52-3.2) เนื้อหาแห้งถูกกำหนดในที่ซ้ำกันหลังจากการอบแห้งให้น้ำหนักคงที่ในเตาอบสูญญากาศที่100 องศาเซลเซียส พีเอชและเนื้อหาแห้งได้รับการพิจารณาวันที่ 1, 7, 15, 30 และ 60 วัน. สารระเหยของเนยแข็ง 60 d เก่าถูกสกัดในที่ซ้ำกันโดยอัตโนมัติของแข็งเฟสmicroextraction (อยู) โดยใช้CTC CombiPal ฉีดตัวอย่างอัตโนมัติ (Agilent, พาโลอัล โต, แคลิฟอร์เนีย) และวิเคราะห์โดยก๊าซspectrometry โคมวล (GCeMS) (HP 6890- เอ็มเอสเอชพี 5973, Agilent) สิบกรัมของชีสที่ถูกปั่นในเครื่องบดเครื่องจักรกลที่มี 15 กรัมของ Na2SO4 และ 30 มิลลิลิตรของสารละลายของ543 mg / L cyclohexanone ห้ากรัมของส่วนผสมที่ได้รับการชั่งน้ำหนักในขวดแก้ว headspace 20 มิลลิลิตรปิดผนึกด้วย PTFE ต้องเผชิญกับเยื่อบุโพรงซิลิโคน (Supelco, เบลลาฟอน, PA, สหรัฐอเมริกา) ขวดถูกวางไว้บนถาดฉีดตัวอย่างอัตโนมัติและเป็นไปอยู ทั้งสองขั้นตอนสมดุลและการสกัดได้ดำเนินการที่ 37? C เป็นเวลา 20 และ 30 นาทีตามลำดับ 2 ซม.? 50/30 มม StableFlex divinylbenzene / Carboxen / polydimethylsiloxane (DVB / คัน / PDMS) เส้นใยเคลือบ (Supelco, เบลลาฟอน, PA) ที่ใช้สำหรับ headspace สกัด คายเข้ากับพอร์ตการฉีด GC อยู่ที่260 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีในโหมด Splitless ก่อนที่จะใช้เส้นใยที่ถูกปรับอากาศในพอร์ตการฉีด GC ที่ 270 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงตามคำแนะนำโดยผู้ผลิต การแยกสารได้รับการดำเนินการใน Zebron 100% คอลัมน์ฝอยไกลคอลเอทิลีน (60 เมตรยาว 0.25 มิลลิเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางภายใน 0.50 มิลลิเมตรความหนาของฟิล์ม; ZB-WAXplus, Phenomenex, ทอร์รันซ์) 1 มิลลิลิตร / นาทีฮีเลียมไหลมีดังต่อไปนี้โปรแกรมอุณหภูมิ: 16 นาทีที่ 45 C? ลาดแรก 4 C / นาที 110 C, 9 นาทีที่ 110 องศาเซลเซียสทางลาดที่สองที่? 15 C / นาที 220 ซีและ 5 นาทีที่ 220 องศาเซลเซียสสุดท้าย? ทางลาดถึง 240? C ที่10 องศาเซลเซียส / นาทีและ 2 นาทีที่ 240 องศาเซลเซียส การตรวจสอบบัตรประจำตัวและปริมาณของสารระเหยได้ดำเนินการตามที่อธิบายโดยGarde, Carbonell, เฟิร์น? Andez-GarcíaเมดินาและNu ~ หนีบ (2002) ญาติของอนุภาคสารถูกแสดงเป็นร้อยละของพื้นที่ที่สูงสุดของพวกเขาบนพื้นที่จุดสูงสุดของcyclohexanone มาตรฐานภายใน. พารามิเตอร์สีที่พื้นผิวของชีส 60 d เก่าที่ถูกวัดโดยใช้CM-700 spectrocolorimeter พร้อมกับซอฟแวร์SpectraMagic NX VA.9 (กล้อง Minolta Co. , โอซาก้าประเทศญี่ปุ่น). ตัวอย่างชีสถูกตัดเป็น 1 ซม. ชิ้นหนา อ้างอิงสว่างเป็น D65 (กลางวันมาตรฐาน) และมุมสังเกตการณ์เป็น 10 ?. ผลที่ได้รับรายงานเป็น L * (ความสว่าง), a * ​​(สีเขียวเป็นสีแดง), b * (สีฟ้าเป็นสีเหลือง), C (ความอิ่มตัวของสีหรือความเข้มของสี) และ h (สีมุม) พารามิเตอร์ L * แสดงให้เห็นถึงความสว่างหรือไม่ * * * * * ไปยังแสดงให้เห็นสีเขียวเป็นสีแดงและ? b * b * ที่จะแสดงให้เห็นเป็นสีเหลืองสีฟ้า หลังจากพารามิเตอร์สีถูกอ่านตัวอย่างถูกหมุน 90? และอ่านอีกครั้ง ขั้นตอนนี้ได้ดำเนินการใน quadruplicate วิธีการวัดสีที่ใช้ชิ้นส่วนได้รับการยกเว้น Specular (SCE) เท่านั้นที่สะท้อนกระจายเป็นวัดที่มีความสัมพันธ์ที่ดีขึ้นกับวิธีการสังเกตเห็นสีของวัตถุ. 2.7 การวิเคราะห์ทางสถิติการรักษาทางสถิติของข้อมูลที่ได้ดำเนินการโดยวิธีการของโปรแกรม SPSS ชนะ 12.0 โปรแกรม (SPSS อิงค์ชิคาโก, อิลลินอยส์, สหรัฐอเมริกา) วิเคราะห์ข้อมูลโดยการวิเคราะห์โดยใช้แบบจำลองเชิงเส้นทั่วไป (GLM) การวิเคราะห์ความแปรปรวนอายุชีสเป็นผลกระทบหลักที่ได้ดำเนินการกับตัวแปรการวิเคราะห์และการเปรียบเทียบวิธีการได้ดำเนินการโดยการทดสอบของTukey. การวิเคราะห์องค์ประกอบหลัก (PCA) กับการหมุน VariMax ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับสารระเหย. 3 และการอภิปรายผล3.1 นับ Lactococci ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในการนับ lactococci จากการค้าเริ่มต้นที่พบในหมู่ชีสทั้งหมดใน1 วันที่เหลืออยู่เกือบตลอดเวลาจนกว่าจะถึงวันที่30 และลดลงหลังจาก 60 d (ตารางที่ 1) แต่อยู่รอดที่สูงขึ้นของ lactococci เริ่มต้นเป็นข้อสังเกตในตอนท้ายของการทำให้สุกในเนยแข็งเชื้อด้วยซีtyrobutyricum CECT 4011 และInia 68 กว่าในการควบคุมชีสและชีสที่ปนเปื้อนชนิดClostridium อื่น ๆ ความจริงเรื่องนี้ชี้ให้เห็นผลในเชิงบวกของการเผาผลาญอาหารของซีสายพันธุ์ tyrobutyricum ในชีส, การสร้างมงคลสภาพแวดล้อมสำหรับการอดทนlactococci G? omez-ตอร์เร et al. (2014) นอกจากนี้ยังมีการรายงานระดับสูงของ lactococci ในนมวัวชีสที่ทำด้วยเริ่มต้นการค้าMA 16 และ C tyrobutyricum CECT 4011 สปอร์กว่าในการทำชีสเท่านั้นที่มีการค้าเริ่มต้น อดอาหารคาร์โบไฮเดรตและทันการสูญเสียพลังงาน lactococci ที่จะเปลี่ยนการเผาผลาญอาหารของพวกเขาจาก glycolysis อะมิโนกรดcatabolism และแหล่งที่มาของพลังงานเพิ่มความอยู่รอดของL. lactis (จวร์ต, โจวและ Weimer, 1999) ในการทำงานก่อนหน้าในห้องปฏิบัติการของเรา tyrobutyricum ซีสายพันธุ์ฤทธิ์โปรตีนในนม(เอสจี๊ดผลที่ไม่ถูกเผยแพร่) และจะได้จัดกรดอะมิโนที่จำเป็นสำหรับการlactococci กรดอะมิโนเผาผลาญ. 3.2 อาการที่เกิดจากข้อบกพร่องเป่าปลายและจำนวนสปอร์เรามีการตรวจสอบการก่อตัวของก๊าซและกลิ่นไม่พึงประสงค์ออกไปในเนยแข็งจากการตรวจสอบภาพและกลิ่น แสดงให้เห็นว่าการควบคุมชีสสูญญากาศบรรจุภัณฑ์เนื้อเครื่องแบบโดยไม่มีรอยแตกหรือแยก(รูป. 1B และ D) และกลิ่นแลคติกที่น่าพอใจ สปอร์ทั้งหมดจาก autochthonous และชนิดสายพันธุ์ clostridia ที่เราใช้ก็สามารถที่จะทำให้เกิดการLBD ในชีสในองศาที่แตกต่างกันและขั้นตอนของการสุก (ตารางที่ 2). ชีสกับ LBD แสดงให้เห็นเป่าบรรจุภัณฑ์สายตาผิดปกติรอยแตกหรือแยกเป็นผลมาจากก๊าซพัฒนาและที่ไม่พึงประสงค์หรือหืนกลิ่น เนยแข็งที่ทำด้วยซี tyrobutyricum CECT 4011 และ Inia 68 สายพันธุ์เป็นครั้งแรกที่จะแสดงเป่ามีเด่นชัดมากอาการในตอนท้ายของการทำให้สุก (รูป. 1A และ C) แต่เนยแข็งที่ทำด้วยซี butyricum CECT 361 ซี beijerinckii Inia 63 และซี sporogenes Inia 71, ก่อให้เกิดความล่าช้าและอ่อนโยนชีสอาการเน่าเสีย(ตารางที่ 2) Klijn et al, (1995) ที่ตรวจพบเพียง LBD ในชีสนมเนยแข็งเมื่อถูกปนเปื้อนด้วยสปอร์ซีtyrobutyricum ชี้ให้เห็นซี tyrobutyricum เป็นสาเหตุหลักของการLBD ในชีส อย่างไรก็ตามผลของเราแสดงให้เห็นว่าสายพันธุ์เชื้อ Clostridium อื่น ๆ ที่นำไปสู่การปรากฏตัวของข้อบกพร่องนี้สอดคล้องกับการศึกษาอื่นๆ (Cocolin et al, 2004;. Le. Bourhis et al, 2005, 2007). ในชีสควบคุมเราไม่พบสปอร์ จุลินทรีย์ที่ก่อตัวขึ้น(ตารางที่ 1) ที่บ่งบอกว่านมเป็นอิสระของ clostridial สปอร์ ที่ปนเปื้อนในเนยแข็งเทียมกับสายพันธุ์เชื้อ Clostridium,

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จำกัด , ลอนดอน , UK ) วิธีการทศนิยม homogenates ชีสถูก
เตรียมเป็นหมัน 0.1% ( w / v ) เปปโตนโซลูชั่น แลกโตค ไค นับจากเริ่มต้นเชิงพาณิชย์ได้พิจารณา

ซ้ำจานอาหาร yeast glucose agar ( biolife ) 0.1 % เพิ่มหางนม
( biolife ) หลังจากบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 30 -  C clostridial สปอร์
นับคำนวณเกี่ยวกับจำนวนวุ้นที่อธิบายไว้ในมาตรา 2.2 .
การวิเคราะห์ทางจุลชีววิทยาได้ทดลองที่ 1 , 7,15 , 30 และ 60 วัน
2.5 การตรวจหาสายเป่าข้อบกพร่อง
ในระหว่าง 60-d สุกของเนยแข็ง , การพัฒนาคุณภาพของก๊าซและกลิ่นก็หมั่นตรวจสอบ
3
การตรวจสอบโดยผู้ผ่านการอบรม และมีกลิ่น เบวูล์ฟกับ lbd พบ blownpackaging
ตา , ผิดปกติ , รอยแตกหรือแยกเป็นผล
ชีสเมทริกซ์ไม่สามารถทนต่อความดันของผลิตก๊าซ และกลิ่นอันไม่พึงประสงค์หรือเหม็นหืน
.
2.6 physico เคมี determinations
ชีส pH วัดซ้ำโดยวิธีการของ crison เครื่องวัด pH
( แบบ GPL 22 , เครื่องมือ crison บาร์เซโลนา , สเปน ) ใช้
crison เจาะไฟฟ้า ( แบบ 52-3.2 )
เนื้อหาแห้ง ตั้งใจในซ้ำหลังจากการอบแห้งเพื่อคงน้ำหนักใน
เตาอบที่อุณหภูมิ 100 องศาเซลเซียส  สูญญากาศ และวัตถุแห้งเป็น
ที่ 1 , 7 , 15 , 30 และ 60 วัน
ระเหยของ 60-d-old ชีสสกัดใน
ซ้ำโดย microextraction ส่วนแบบอัตโนมัติ ( spme ) ใช้ : CTC combipal autosampler ( Agilent , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย ) และวิเคราะห์ก๊าซสัปดาห์
โดย สเปกโตรเมทรี ( gcems ) ( HP 6890 -
5973 เอ็มเอสเอชพี Agilent , ) 10 กรัมชีสเป็นโฮโม
ในเครื่องบดทางกลกับ 15 กรัม และ na2so4 30 มิลลิลิตรของสารละลายของ
411 มิลลิกรัมต่อลิตรทำให้ . 5 กรัม ( ชั่ง
ผสมในขวดแก้ว ปิดด้วย 20 ml เฮดสเปซ : PTFE เผชิญกั้น ( supelco bellefonte , ซิลิโคน , PA , USA ) ขวด
ถูกวางไว้บนถาด autosampler และต้อง spme . ทั้งคู่
equilibration และการสกัดระยะทดลองที่ 37  C
20 และ 30 นาทีตามลำดับ 2 ซม.
50 / 30 มม. stableflex
ไดไวนิลเบนซีน / carboxen / O ( DVB / รถยนต์ /
( PDMS ) ใยแก้วเคลือบ supelco bellefonte , PA ) ใช้สำหรับการสกัดเฮดสเปซ

สามารถฉีดเข้า GC พอร์ตอยู่ที่ 260 
C 10 นาทีในโหมด splitless . ก่อนที่จะใช้ไฟเบอร์
ปรับอากาศใน GC ฉีดพอร์ตที่ 270  C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เป็นการแนะนำ
โดยผู้ผลิตดิ้นรนอยู่
ดำเนินการใน zebron 100% โพลีเอธิลีนไกลคอลแคพิลลารีคอลัมน์
( 60 เมตรยาว ; 0.25 มม. เส้นผ่าศูนย์กลางภายใน ; 0.50 มม. ความหนาของฟิล์ม ;
ไบต์ waxplus phenomenex Torrance , CA , , ) กับ 1 มิลลิลิตรต่อนาทีฮีเลียม
ไหล ดังนี้อุณหภูมิโปรแกรม : 16 นาทีที่ 45 
C แรก  ลาด 4 องศาเซลเซียส / นาที 110  C , 9 นาทีที่ 110  C
2 ทางลาดที่ 15  องศาเซลเซียส / นาที 220  C และ 5 นาทีที่ 220  Cสุดท้ายทางลาด 240  C ที่
10  องศาเซลเซียส / นาที 2 นาทีที่ 240  C ตรวจสอบ การจำแนกชนิดและปริมาณของสารระเหยได้

เป็นไปตามที่อธิบายโดย Garde คาร์โบเนล เฟิร์น
andez กาโอ การ์ซีอา เมดิน่า , นูเนส ,
~ ( 2002 ) abundances สัมพัทธ์ของสารที่
แสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของพื้นที่บนยอดเขาสูงสุดของพื้นที่

ทำให้มาตรฐานภายในค่าสีที่พื้นผิวของ 60-d-old เนยแข็ง คือการวัดโดยใช้ cm-700

spectramagic spectrocolorimeter พร้อมกับซอฟต์แวร์ va.9 NX ( Minolta กล้อง บริษัท โอซาก้า ญี่ปุ่น ) ตัวอย่าง
ชีสมาตัดเป็นชิ้นหนา 1 cm . อ้างอิง
การส่องสว่างเป็น D65 ( กลางวันมาตรฐาน ) และผู้สังเกตการณ์ มุม
10  . ผลลัพธ์ที่ได้รายงานเป็น L * ( ความสว่าง ) , * ( เขียว แดง ) , B *
( ฟ้าเหลือง )