The reaction mixture consisted of 1

The reaction mixture consisted of 1 ll cDNA, 0.5 mM of each primer (P53 and GAPDH as internal control), iQ SYBR GREEN PERMIX (BIO-RAD 170–880, USA) in a total volume of 20 ll. PCR amplification and analysis were achieved using BIO-RAD iCycler thermal cycler and the MyiQ realtime PCR detection system. All templates were amplified using the following Light Cycler protocol. The primer for P53 was based on the sequence published in gene bank FJ233106.1 for O. niloticus; forward primer; GCATGTGGCTGATGTTGTTC and the reverse one GCAGGATGGTGGTCATCTCT. The fast start polymerase was activated and
cDNA denatured by a pre-incubation for 10 min at 95 C,the template was amplified for 40 cycles of denaturation programed for 20 s at 95 C, annealing of primers at 60 C programed for 20 s, and extension at 72 C programed for 30 s. Fluorescent data were acquired during each extension phase. Each assay includes triplicate samples for each tested cDNAs and no-template negative control

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผสมปฏิกิริยา consisted ของ cDNA จะ 1, 0.5 มม.แต่ละพื้น (P53 และ GAPDH เป็นตัวควบคุมภายใน), iQ เขียว SYBR PERMIX (ไบโอ-RAD 170 – 880 สหรัฐอเมริกา) ในปริมาณผลรวมของ 20 จะ PCR ขยาย และวิเคราะห์สำเร็จใช้ BIO RAD cycler ร้อน iCycler และ MyiQ realtime PCR ตรวจหาระบบ แม่แบบทั้งหมดถูกขยายโดยใช้โพรโทคอล Cycler แสงต่อไปนี้ รองพื้นสำหรับ P53 เป็นไปตามลำดับที่ประกาศธนาคารยีน FJ233106.1 สำหรับโอ niloticus รองพื้นไปข้างหน้า GCATGTGGCTGATGTTGTTC และ GCAGGATGGTGGTCATCTCT หนึ่งกลับ พอลิเมอเรสเริ่มอย่างรวดเร็วเรียกใช้ และcDNA denatured โดยบ่มก่อนใน 10 นาทีที่ 95 C แบบถูกขยายสำหรับวงจร 40 การ denaturation programed สำหรับ 20 s ที่ 95 C การอบเหนียวของไพรเมอร์ที่ 60 C programed 20 s และส่วนขยายที่ 72 C programed สำหรับข้อมูลฟลูออเรส s ได้ 30 ได้รับมาในระหว่างขั้นตอนแต่ละนามสกุลกัน วิเคราะห์แต่ละตัวอย่าง triplicate สำหรับแต่ละ cDNAs ผ่านการทดสอบและควบคุมลบแม่แบบไม่มี

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วย 1 LL cDNA 0.5 มิลลิของแต่ละประถมศึกษา (P53 และ GAPDH การควบคุมภายใน) iQ SYBR GREEN PERMIX (BIO-RAD 170-880, สหรัฐอเมริกา) ในปริมาณรวมของ 20 LL ขยาย PCR และการวิเคราะห์กำลังประสบความสำเร็จโดยใช้ BIO-RAD ปฏิทินสาธารณะ Cycler ความร้อนและระบบการตรวจสอบ MyiQ เรียลไทม์พีซีอาร์ แม่แบบทั้งหมดที่ถูกขยายโดยใช้โปรโตคอลแสง Cycler ต่อไปนี้ รองพื้นสำหรับ P53 ก็ขึ้นอยู่กับลำดับการตีพิมพ์ในยีน FJ233106.1 ธนาคารทุม niloticus; ไพรเมอร์ไปข้างหน้า; GCATGTGGCTGATGTTGTTC และย้อนกลับหนึ่ง GCAGGATGGTGGTCATCTCT โพลิเมอร์เริ่มต้นอย่างรวดเร็วถูกเปิดใช้งานและ
cDNA เอทิลแอลกอฮอล์โดยก่อนการบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 95 C, แม่ถูกขยายเป็น 40 รอบของการสูญเสียสภาพธรรมชาติ programed 20 ณ วันที่ 95 C, การหลอมของไพรเมอร์ที่ 60 C programed เป็นเวลา 20 วินาที, และ นามสกุลที่ 72 C programed สำหรับ 30 วินาที ข้อมูลที่เรืองแสงได้มาในระหว่างขั้นตอนการขยายแต่ละ แต่ละทดสอบรวมถึงตัวอย่างเพิ่มขึ้นสามเท่าสำหรับแต่ละ cDNAs การทดสอบและไม่มีแม่แบบควบคุมเชิงลบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปฏิกิริยาผสมประกอบด้วย 1 จะ cDNA 0.5 มม. ของแต่ละสี ( ตัวอย่าง gapdh และการควบคุมภายใน ) ไอคิว SYBR กรีน permix ( Bio-rad 170 – 880 , USA ) ในปริมาตรรวมของ 20 จะ การขยาย PCR และการวิเคราะห์ยาใช้ Bio-rad icycler ความร้อนรอบและ myiq Realtime PCR ตรวจสอบระบบ ทั้งหมดแม่แบบได้ขยายการใช้แสงรอบขั้นตอนต่อไปนี้ไพรเมอร์สำหรับปฏิบัติงานตามลําดับที่ตีพิมพ์ในธนาคารยีน fj233106.1 สำหรับ o . niloticus ; ไปข้างหน้า ไพรเมอร์ gcatgtggctgatgttgttc และย้อนกลับหนึ่ง gcaggatggtggtcatctct . เริ่มต้นที่รวดเร็วและการเปิดใช้โดยก่อน
วิธีบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 95 C แม่แบบถูกขยาย 40 รอบ ( programed 20 s 95 Cข้อดีของไพรเมอร์ที่ 60 C โปรแกรม 20 , และส่วนขยายที่ 72 C โปรแกรม 30 S . เรืองแสง ข้อมูลที่ได้มาระหว่างแต่ละส่วนขยายเฟส แต่ละวิธี รวมถึงตัวอย่างสำหรับแต่ละการทดสอบ cdnas ทำสำเนาสามฉบับ และไม่มีแม่แบบควบคุมลบ