4. Materials and methodsTo validate

4. Materials and methods
To validate the new NDT technique, experiments were performed in the conditions detailed thereafter to con rm the
assumptions previously described.
4.1. Bacterial cells
The bacterial cells used were R. erythropolis DCL14 strain and
the interesting properties for this study are summarized in Table 1.
The bacterium was rst isolated by the Division of Industrial
Microbiology of the Wageningen University, The Netherlands,
from a sample collected on a ditch in Reeuwijk [16]. It is deposited
and maintained at the Institute for Biotechnology and Bioengineering, Instituto Superior T cnico, Lisbon, Portugal.
Cells were grown in 100 mL Erlenmeyer asks containing
20 mL of mineral medium supplemented with 0.25% (v/v) absolute
ethanol (99.9%, Panreac) or 0.25% (v/v) n-hexadecane (99.9%
Sigma-Aldrich) as carbon source. The cells were grown in orbital
shakers (Aralab Lda) at 28 1C and 200 rpm and collected at the end
of the exponential growth phase. After centrifugation, the cells
were washed and ressuspended in phosphate buffer (pH7, 50 mM)
to an optical density (measured at 600 nm) of 1 to standardise the
initial concentration of cells in the assays. To the cell suspension,
a Live/Deads BacLightTM bacterial viability kit from Molecular
Probes (Invitrogen Co.) was added (0.5 L per 500 L of cell
suspension). The kit contains a mixture of SYTOs9 green uorescent nucleic acid stain (which stains all bacteria green) and
propidium iodide (which stains only bacteria with damaged
membranes; since it reduces the SYTOs 9 uorescence when they
are both present, non-viable cells are stained red).
4.2. Samples characterization
Three materials were selected and these were: stainless steel
AISI 304L, aluminium alloy AA1100 and electrolytic copper. These
are commonly used materials in engineering, including in microfabrication. It was intended to produce small size defects of wellknown morphology, with the same shape, a part of a scale factor
concerning the dimensions, good reproducibility, and easy to
measure. Therefore, defects were arti cially produced using a
micro hardness indenter Mitutoyo HM-112 with different loads

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4. วัสดุและวิธีการการตรวจสอบเทคนิคผู้ใหม่ ดำเนินการทดลองในเงื่อนไขรายละเอียดหลังจากนั้นตุ๋น rm จะสมมติฐานที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้4.1. แบคทีเรียเซลล์เซลล์แบคทีเรียที่ใช้ได้ต้องใช้ R. erythropolis DCL14 และคุณสมบัติน่าสนใจสำหรับการศึกษานี้สามารถสรุปได้ในตารางที่ 1แบคทีเรียมี rst แยกต่างหาก โดยในส่วนของอุตสาหกรรมจุลชีววิทยาของมหาวิทยาลัยอย่างไร Wageningen ประเทศเนเธอร์แลนด์จากตัวอย่างที่เก็บรวบรวมในคูใน Reeuwijk [16] มีการฝากเงินและยังคงอยู่ที่สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพและ Bioengineering, T ห้อง Instituto cnico ลิสบอน โปรตุเกสเซลล์ที่โตใน Erlenmeyer ถามประกอบด้วย 100 มลปริมาณ 20 mL ของแร่กลางเสริม ด้วย 0.25% (v/v) แน่นอนเอทานอล (99.9%, Panreac) หรือ 0.25% (v/v) n-hexadecane (99.9%Sigma-Aldrich) เป็นแหล่งคาร์บอน เซลล์เติบโตขึ้นในออร์บิทัลยางมะตอย (Aralab Lda) ที่ 28 1C และ 200 รอบต่อนาที และเก็บรวบรวมในตอนท้ายของเฟสเรขา หลังจาก centrifugation เซลล์ถูกล้าง และ ressuspended ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7, 50 มม.)จะมีความหนาแน่นออปติคอล (วัดที่ 600 nm) 1 standardise การความเข้มข้นเริ่มต้นของเซลล์ในการ assays เพื่อระงับเซลล์ชุดชีวิตแบคทีเรีย สด/Deads BacLightTM จากโมเลกุลคลิปปากตะเข้ (บริษัท Invitrogen) เพิ่ม (0.5 L ต่อ L 500 ของเซลล์ระงับ) ชุดประกอบด้วยส่วนผสมของ SYTOs9 uorescent เขียวกรดนิวคลีอิกคราบ (ซึ่งคราบสกปรกแบคทีเรียทั้งหมดสีเขียว) และไอโอไดด์ propidium (คราบที่เฉพาะแบคทีเรียกับความเสียหายสาร เนื่องจากมันช่วยลด uorescence SYTOs 9 เมื่อพวกเขามีอยู่ ไม่ได้เซลล์สีแดง)4.2 การจำแนกตัวอย่างเลือกวัสดุที่สาม และมี: เหล็กกล้าไร้สนิมAISI 304L, AA1100 อะลูมิเนียมและทองแดง electrolytic เหล่านี้มีใช้โดยทั่วไปวัสดุวิศวกรรม รวมถึง microfabrication สร้างขึ้นเพื่อผลิตบกพร่องขนาดเล็กของสัณฐานวิทยาอุดรธานี รูปทรงเดียวกัน เป็นส่วนหนึ่งของตัวคูณสเกลเกี่ยวข้องกับมิติ reproducibility ดี และง่ายต่อการวัด ดังนั้น ข้อบกพร่องถูกอา cially ผลิตโดยใช้การอาศัยความแข็งไมโคร Mitutoyo HM-112 กับโหลดแตกต่างกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4. วัสดุและวิธีการ
ในการตรวจสอบเทคนิค NDT ใหม่ทดลองดำเนินการในเงื่อนไขรายละเอียดหลังจากนั้น con rm
สมมติฐานที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้.
4.1 เซลล์แบคทีเรีย
เซลล์แบคทีเรียใช้ถูกอาร์ erythropolis ความเครียด DCL14 และ
คุณสมบัติที่น่าสนใจสำหรับการศึกษานี้ได้สรุปไว้ในตารางที่ 1.
แบคทีเรียที่แยกแรกโดยกองอุตสาหกรรม
จุลชีววิทยาของ Wageningen University, เนเธอร์แลนด์,
จากตัวอย่างที่เก็บจาก คลองใน Reeuwijk [16] มันเป็นเงินฝาก
และการบำรุงรักษาที่สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพและวิศวกรรมชีวภาพ, Instituto Superior T cnico, ลิสบอน, โปรตุเกส.
เซลล์ที่ถูกปลูกใน 100 มลรูปกรวยถามที่มี
ปริมาณ 20 มลของกลางแร่เสริมด้วย 0.25% (v / v) แน่นอน
เอทานอล (99.9% , Panreac) หรือ 0.25% (v / v) n-hexadecane (99.9%
Sigma-Aldrich) เป็นแหล่งคาร์บอน เซลล์ที่ถูกปลูกในวงโคจร
อิทธิพล (Aralab Lda) วันที่ 28 1C และ 200 รอบต่อนาทีและเก็บในตอนท้าย
ของระยะการเจริญเติบโต หลังจากการปั่นแยกเซลล์
ถูกล้างและ ressuspended ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7, 50 มิลลิเมตร)
เพื่อความหนาแน่นของออปติคอล (วัดที่ 600 นาโนเมตร) 1 ที่จะสร้างมาตรฐาน
ความเข้มข้นเริ่มต้นของเซลล์ในการตรวจ การระงับเซลล์
สด / ตายชุดที่มีศักยภาพ BacLightTM แบคทีเรียจากโมเลกุล
Probes (Invitrogen จำกัด ) เพิ่ม (0.5 ลิตรต่อ 500 L ของเซลล์
Suspension) ชุดที่มีส่วนผสมของสีเขียว SYTOs9 uorescent คราบกรดนิวคลีอิก (ซึ่งคราบแบคทีเรียสีเขียว) และ
ไอโอไดด์ propidium (ซึ่งคราบแบคทีเรียที่มีเพียงความเสียหาย
เยื่อเนื่องจากมันช่วยลด SYTOs 9 uorescence เมื่อพวกเขา
มีทั้งปัจจุบันเซลล์ที่ไม่ทำงานได้เป็นสี สีแดง).
4.2 ตัวอย่างตัวละคร
สามวัสดุที่ได้รับการคัดเลือกและเหล่านี้คือ: สแตนเลส
AISI 304L, AA1100 อลูมิเนียมและทองแดงด้วยไฟฟ้า เหล่านี้
เป็นวัสดุที่นิยมใช้ในงานวิศวกรรมรวมทั้งในชิ้นงานขนาดเล็ก มันตั้งใจที่จะผลิตข้อบกพร่องขนาดเล็ก ๆ ของสัณฐานวิทยา wellknown มีรูปร่างเหมือนกันเป็นส่วนหนึ่งของปัจจัยระดับ
ที่เกี่ยวข้องกับมิติ, การทำสำเนาที่ดีและง่ายต่อการ
วัด ดังนั้นข้อบกพร่องอยู่ถึงแม้ว่าศิลปะการผลิตโดยใช้
ความแข็งไมโครหัวกด Mitutoyo HM-112 กับโหลดที่แตกต่างกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 . วัสดุและวิธีการ
เพื่อตรวจสอบเทคนิค NDT ใหม่ ทดลองในเงื่อนไขรายละเอียดหลังจากนั้น con RM

สมมติฐานที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ . . . เซลล์แบคทีเรียเซลล์แบคทีเรียที่ใช้ R .

dcl14 erythropolis สายพันธุ์และคุณสมบัติที่น่าสนใจสำหรับการศึกษาในครั้งนี้สรุปได้ในตารางที่ 1 .
แบคทีเรียเป็น RST แยกออกจากกองอุตสาหกรรม
จุลชีววิทยาของมหาวิทยาลัย Wageningen เนเธอร์แลนด์
จากตัวอย่างที่เก็บในคูน้ำใน reeuwijk [ 16 ] มันคือฝาก
และดูแลรักษาที่สถาบันเทคโนโลยีชีวภาพและชีววิศวกรรม Instituto ดีกว่า T cnico ลิสบอน โปรตุเกส
เซลล์เติบโตใน 100 มิลลิลิตร ประกอบด้วยเออร์เลนเมเยอร์ถาม
20 ml น้ำแร่เติม 0.25 % ( v / v ) แน่นอน
เอทานอล ( 99.9% panreac ) หรือ 025% (v/v) n-hexadecane (99.9%
Sigma-Aldrich) as carbon source. The cells were grown in orbital
shakers (Aralab Lda) at 28 1C and 200 rpm and collected at the end
of the exponential growth phase. After centrifugation, the cells
were washed and ressuspended in phosphate buffer (pH7, 50 mM)
to an optical density (measured at 600 nm) of 1 to standardise the
initial concentration of cells in the assays. To the cell suspension,
a Live/Deads BacLightTM bacterial viability kit from Molecular
Probes (Invitrogen Co.) was added (0.5 L per 500 L of cell
suspension). The kit contains a mixture of SYTOs9 green uorescent nucleic acid stain (which stains all bacteria green) and
propidium iodide (which stains only bacteria with damaged
membranes;เนื่องจากมันช่วยลด sytos 9 uorescence เมื่อพวกเขา
ทั้งปัจจุบันเซลล์ได้ไม่เปื้อนสีแดง )
4.2 . ตัวอย่างลักษณะ
3 วัสดุที่และเหล่านี้คือ : สแตนเลส
AISI 304L , aa1100 โลหะผสมอลูมิเนียมและแผ่นทองแดง เหล่านี้มักใช้วัสดุ
วิศวกรรม รวมทั้งรองรับชิ้นงานขนาดเล็ก . It was intended to produce small size defects of wellknown morphology, with the same shape, a part of a scale factor
concerning the dimensions, good reproducibility, and easy to
measure. Therefore, defects were arti cially produced using a
micro hardness indenter Mitutoyo HM-112 with different loads