Initially, a rapid method for isola

Initially, a rapid method for isolating of high quality DNA from
spindle leaves of coconut was developed. DNA was extracted from
approximately 1 g of fresh young leaves, collected from field grown
parental plants and crushed in liquid nitrogen. The crushed powder
was added to a tube containing 10 ml pre-heated extraction buffer
(100 mM Tris–HCl, 50 mM NaCl; pH 8.0). To the above, 1 ml of 10%
SDS and 50 l of -mercaptoethanol were added. The mixture was
incubated at 65 ◦C for 1 h with intermittent mixing. An equal volume
of chloroform:isoamyl alcohol mixture (24:1, V/V) was added
after incubation and homogenized by gentle inversion for 20 min
and centrifuged at 10,000 rpm for 20 min at 4 ◦C. The clear aqueous
phase containing the nucleic acid was transferred to a fresh tube
and 2/3rd volume ice-cold isopropanol was added to precipitate
the nucleic acids. It was kept at 4 ◦C for 30 min and DNA pool was
collected in 1.5 ml micro tubes. The pooled DNA was washed thrice
with 70% alcohol. The alcohol was discarded and DNA pellet was
air-dried completely and DNA pellet dissolved in 0.5 ml TE buffer
(10 mM Tris–HCl, pH 8.0 and 1 mM EDTA). RNase (4 l) was added
to the tube and incubated at 37 ◦C for 1 h. After RNase treatment, the
supernatant containing the DNA was extracted with equal volume
of chloroform: isoamyl alcohol (24:1) twice. The purified DNA was
precipitated by adding double the volume of ethanol. The precipitated
DNA was air-dried and dissolved in 0.75 ml TE buffer (10 mM
Tris–HCl, pH 8.0 and 1 mM EDTA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เริ่มต้น วิธีการแยกเอ็นคุณภาพจากอย่างรวดเร็วแกนใบของมะพร้าวได้รับการพัฒนา ดีเอ็นเอที่สกัดจากใบอ่อนสด รวบรวมจากฟิลด์ที่โตประมาณ 1 gพืชหลักและบดในไนโตรเจนเหลว ผงที่บดเพิ่มการประกอบด้วยบัฟเฟอร์ 10 ml สกัดก่อนอุ่นหลอด(100 มม.ตรี – HCl, NaCl 50 มม. ค่า pH 8.0) กับ ml 1 ข้าง 10%มีเพิ่ม SDS และ 50 ลิตร - mercaptoethanol มีส่วนผสมincubated ที่ 65 ◦C สำหรับ h 1 กับผสมไม่ต่อเนื่อง มีปริมาตรเท่ากันส่วนผสมของแอลกอฮอล์คลอโรฟอร์ม: isoamyl (24:1, V/V) ถูกเพิ่มหลังจากบ่ม และ homogenized เป็นกลุ่ม โดยกลับอ่อนโยนสำหรับ 20 นาทีและ centrifuged ที่ 10000 rpm สำหรับ 20 นาทีที่ 4 ◦C อควีชัดเจนขั้นตอนที่ประกอบด้วยกรดนิวคลีอิกถูกถ่ายโอนไปหลอดสดและเพิ่มการ precipitate isopropanol ฉ่ำปริมาณ 2/3กรดนิวคลีอิก มันถูกเก็บไว้ที่ 4 ◦C ใน 30 นาที และมีสระว่ายน้ำดีเอ็นเอรวบรวมในท่อขนาดเล็ก 1.5 ml ดีเอ็นเอรวมไม่ล้างเลยด้วยแอลกอฮอล์ 70% เหล้าถูกละทิ้ง และเป็นเม็ดดีเอ็นเอair-dried อย่างสมบูรณ์ และดีเอ็นเอเม็ดละลายในบัฟเฟอร์ TE 0.5 ml(10 มม.ตรี – HCl ค่า pH 8.0 และ 1 mM EDTA) เพิ่ม RNase (4 ลิตร)กับท่อ และ incubated ที่ ◦C 37 สำหรับ 1 h หลังจาก RNase รักษา การsupernatant ที่ประกอบด้วยดีเอ็นเอถูกแยก ด้วยปริมาณที่เท่ากันของคลอโรฟอร์ม: isoamyl แอลกอฮอล์ (24:1) สองครั้ง ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ได้ตกตะกอน โดยการเพิ่มปริมาตรของเอทานอลคู่ การตกตะกอนดีเอ็นเอ air-dried และละลายในบัฟเฟอร์ TE 0.75 มล. (10 มม.Tris–HCl ค่า pH 8.0 และ 1 mM EDTA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในขั้นต้นวิธีการที่รวดเร็วสำหรับการแยกของดีเอ็นเอที่มีคุณภาพสูงจาก
แกนใบมะพร้าวได้รับการพัฒนา ดีเอ็นเอที่สกัดจาก
ประมาณ 1 กรัมของใบอ่อนสดที่เก็บรวบรวมจากสนามที่ปลูก
พืชของผู้ปกครองและบดในไนโตรเจนเหลว ผงบด
ถูกบันทึกอยู่ในหลอดบรรจุ 10 มลสารสกัดก่อนอุ่น
(100 มิลลิ Tris-HCl, 50 mM NaCl; ค่า pH 8.0) จากข้างต้นที่ 1 มิลลิลิตร 10%
SDS และ 50? ลิตร? -mercaptoethanol ถูกเพิ่ม ส่วนผสมที่ได้รับการ
บ่มที่อุณหภูมิ 65 ◦Cเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับการผสมสม่ำเสมอ ปริมาณที่เท่ากัน
ของคลอโรฟอร์ม: ส่วนผสมแอลกอฮอล์ isoamyl (24: 1, V / V) ถูกเพิ่มเข้ามา
หลังจากที่บ่มเพาะและหดหายโดยผกผันอ่อนโยนสำหรับ 20 นาที
และหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิ 4 ◦C น้ำที่ชัดเจน
ขั้นตอนที่มีกรดนิวคลีอิกถูกย้ายไปหลอดสด
และ 2 / ปริมาณ 3 isopropanol เย็นถูกบันทึกอยู่ในตะกอน
กรดนิวคลีอิก มันถูกเก็บไว้ที่ 4 ◦Cเป็นเวลา 30 นาทีและสระว่ายดีเอ็นเอถูก
รวบรวมไว้ใน 1.5 มลหลอดไมโคร ดีเอ็นเอ pooled ถูกล้างสามครั้ง
ด้วยแอลกอฮอล์ 70% เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ถูกทิ้งและเม็ดดีเอ็นเอ
อากาศแห้งอย่างสมบูรณ์และเม็ดดีเอ็นเอละลายใน 0.5 มลบัฟเฟอร์ TE
(10 mM Tris-HCl pH 8.0 1 มิลลิ EDTA) RNase (4? ลิตร) ถูกบันทึกอยู่ใน
หลอดและบ่มที่อุณหภูมิ 37 ◦Cเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากการรักษา RNase,
สารละลายที่มีดีเอ็นเอเป็นสารสกัดที่มีปริมาณเท่ากับ
คลอโรฟอร์ม: เครื่องดื่มแอลกอฮอล์ isoamyl (24: 1) เป็นครั้งที่สอง ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ได้รับการ
ตกตะกอนโดยการเพิ่มคู่ปริมาณของเอทานอล ตกตะกอน
ดีเอ็นเออากาศแห้งและละลายใน 0.75 มลบัฟเฟอร์ TE (10 mM
Tris-HCl pH 8.0 1 มิลลิ EDTA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เริ่มต้นเป็นวิธีที่รวดเร็วในการแยกดีเอ็นเอที่มีคุณภาพสูงจาก
แกนใบมะพร้าวได้รับการพัฒนา ดีเอ็นเอจาก
ประมาณ 1 กรัมของใบอ่อนสด ที่รวบรวมได้จากภาคสนามปลูก
ผู้ปกครองพืชและบดในไนโตรเจนเหลว บดผง
คือเพิ่มหลอดบรรจุ 10 ml ก่อนอุ่นใช้สาร
( 100 มม. นอกจากนี้ – HCl , เกลือ ; 50 มม. pH 8.0 ) ไปด้านบน 10 %
1 มิลลิลิตร SDS และ 50 ลิตร  - mercaptoethanol ถูกเพิ่ม ส่วนผสม
อุณหภูมิ 65 ◦ C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง กับแบบผสม มีปริมาณเท่ากับ
คลอโรฟอร์ม : แอลกอฮอล์ในปริมาณส่วนผสม ( 24 : 1 v / v ) คือเพิ่ม
หลังจากบ่มโดยการบดและอ่อนโยนสำหรับ 20 นาทีที่ 10 , 000 รอบต่อนาที
ไฟฟ้าสำหรับ 20 นาทีที่ 4 ◦ C ล้างสารละลาย
เฟสที่ประกอบด้วยกรดนิวคลีอิกถูกส่งไป
หลอดสด2 / 3 ของปริมาณน้ำแข็งเย็นและไอโซโพรพานอล ได้เพิ่มการตกตะกอนกรดนิวคลีอิก
. มันถูกเก็บไว้ที่ 4 ◦ C นาน 30 นาทีและดีเอ็นเอสระว่ายน้ำ 1.5 มิลลิลิตรไมโคร
เก็บในหลอด รวมดีเอ็นเอซักสามครั้ง
ด้วยแอลกอฮอล์ 70% แอลกอฮอล์ถูกทิ้งและเม็ดดีเอ็นเอ
อากาศแห้งอย่างสมบูรณ์และดีเอ็นเอเม็ดละลาย 0.5 ml TE buffer
( 10 มม. นอกจากนี้ – HCl , pH 8.0 และ 1 mM EDTA ) เลส ( 4  L ) เพิ่ม
กับท่อและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสนาน 1 ชั่วโมง หลังจาก◦เลสรักษา
น่านที่มีดีเอ็นเอกับ
ขนาดเท่ากัน คลอโรฟอร์ม : แอลกอฮอล์ในปริมาณ ( 24 : 1 ) สองครั้ง นำดีเอ็นเอ
ตกตะกอนโดยเพิ่มคู่ปริมาณของเอทานอล ตกตะกอน
ดีเอ็นเอเป็นอากาศแห้งและยุบใน TE buffer 0.75 มิลลิลิตร ( 10 mm
ทริส– HCl , pH 8.0 และ 1 mM EDTA )