Quantitative PCR for Determination

Quantitative PCR for Determination of Copy Number
Immediately prior to induction at OD600 0.2, 1 mL of cell culture was collected and
centrifuged at 16,000g for 1 min. The cell pellet was resuspended in 100 μL of deionized
Lennen et al. Page 4
Biotechnol Bioeng. Author manuscript; available in PMC 2013 November 19.
NIH-PA Author Manuscript NIH-PA Author Manuscript NIH-PA Author Manuscript
water. One microliter of resuspended cell pellet was used directly as the template in a
quantitative PCR (qPCR) reaction with Maxima™ SYBR green/fluorescein qPCR master
mix (Fermentas, Glen Burnie, MD). Primers 24 and 25 were used for BTE amplification,
and primers 26 and 27 for chromosomal ompA amplification. SYBR Green fluorescence
was monitored with a Bio-Rad CFX96 optical reaction module (Bio-Rad, Hercules, CA).
Threshold cycle (Ct
) values were calculated by Bio-Rad CFX Manager software.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

PCR เชิงปริมาณสำหรับการกำหนดจำนวนสำเนาทันทีก่อนที่ OD600 การเหนี่ยวนำ 0.2, 1 mL ของเซลล์ถูกรวบรวม และcentrifuged ที่ 16000 g ใน 1 นาที เม็ดเซลล์ถูก resuspended ใน μL 100 ของ deionizedLennen et al. หน้า 4Biotechnol Bioeng ผู้เขียนฉบับ มีในเอ็ม 2013 19 พฤศจิกายนNIH PA ผู้เขียนฉบับ NIH PA ผู้เขียนฉบับ NIH PA ผู้เขียนฉบับน้ำ ใช้หนึ่งไมโครลิตรของเซลล์ resuspended เม็ดโดยตรงเป็นต้นแบบในการปฏิกิริยา PCR (qPCR) เชิงปริมาณ ด้วยแมก™ SYBR green/fluorescein qPCR หลักผสม (Fermentas เกล็นเบอร์นี่ MD) ใช้สำหรับขยาย BTE ไพรเมอร์ 24 และ 25และไพรเมอร์ที่ 26 และ 27 สำหรับขยาย ompA ของโครโมโซม Fluorescence SYBR Greenได้ตรวจสอบกับโมดูปฏิกิริยาแสง CFX96 ราษฎร์ไบโอ (Bio Rad เฮอร์คิวลิส แคลิฟอร์เนีย)วงจรจำกัด (Ct) มีคำนวณค่า โดย Bio Rad CFX จัดการซอฟต์แวร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

PCR
เชิงปริมาณเพื่อการกำหนดจำนวนการคัดลอกทันทีก่อนที่จะเหนี่ยวนำที่OD600 0.2, 1
มิลลิลิตรของการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมและหมุนเหวี่ยงที่16,000g เวลา 1 นาที ตะกอนเซลล์ที่ถูก resuspended ใน 100 ไมโครลิตรของ deionized
et Lennen อัล หน้า 4
Biotechnol Bioeng ที่เขียนด้วยลายมือผู้เขียน; ที่มีอยู่ในพีเอ็มซี 19 พฤศจิกายน 2013
NIH-PA ผู้เขียนต้นฉบับ NIH-PA ผู้เขียนต้นฉบับ NIH-PA
ผู้เขียนต้นฉบับน้ำ หนึ่งไมโครลิตรของตะกอนเซลล์ resuspended
ถูกนำมาใช้โดยตรงเป็นแม่แบบในการที่ปริมาณPCR (qPCR) ทำปฏิกิริยากับแม็กซิม่า™ SYBR สีเขียว / fluorescein ต้นแบบ qPCR
ผสม (Fermentas, เกลนเบอร์นี, MD) ไพรเมอร์ 24 และ 25 ถูกนำมาใช้สำหรับการขยาย BTE,
และไพรเมอร์ 26 และ 27 สำหรับโครโมโซมขยาย OMPA SYBR เรืองแสงสีเขียวได้รับการตรวจสอบด้วย Bio-Rad CFX96 โมดูลปฏิกิริยาแสง (Bio-Rad ดาวแคลิฟอร์เนีย). รอบเกณฑ์ (กะรัต) ค่านี้จะถูกคำนวณจาก Bio-Rad CFX ซอฟแวร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทคนิคเชิงปริมาณสำหรับการกำหนดจำนวนสำเนา
ทันทีก่อนที่จะเหนี่ยวนำที่ od600 0.2 1 มิลลิลิตร เพาะเลี้ยงเซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมและระดับที่ 1 นาที
16000g เซลล์เม็ดเป็น resuspended 100 μล. คล้ายเนื้อเยื่อประสาน
lennen et al . หน้า 4
biotechnol bioeng . ต้นฉบับผู้เขียน ; ใช้ได้ใน PMC 2013 19 พฤศจิกายน .
nih-pa เขียนต้นฉบับ nih-pa ผู้เขียนต้นฉบับ nih-pa เขียนต้นฉบับ
น้ำ1 ไมโครลิตร resuspended เซลล์เม็ดถูกใช้โดยตรงเป็นแม่แบบใน
เทคนิคเชิงปริมาณ ( qpcr ) ปฏิกิริยากับแม็กซิม่า™ SYBR กรีน / ี่ผสมอาจารย์
qpcr ( fermentas Glen Burnie , MD ) ไพรเมอร์ 24 และ 25 ตามลำดับเพื่อเพิ่มจำนวน และชนิด BTE , 26 และ 27
ริสูงสุด amplification . SYBR สีเขียวเรืองแสง
ถูกตรวจสอบด้วยไบโอ ราด cfx96 ปฏิกิริยาแสงโมดูล ( Bio RAD ,Hercules , CA ) .
วัฏจักรธรณี ( CT
) ค่าที่คำนวณด้วยไบโอ ราด cfx
ผู้จัดการซอฟต์แวร์