2.3. Enzyme activities of isolated

2.3. Enzyme activities of isolated strains
API ZYM system was used to evaluate the enzyme activities of
isolated strains (Humble, Anna, & Phillips, 1977). b-Gal activity was
measured using the method of Miller (1972). Cells were collected
by centrifugation and resuspended in 1 ml of Z buffer (60 mM
Na2HPO4 7H2O, 40 mM NaH2PO4 H2O, 10 mM KCl, 1 mM MgSO4
7H2O, 50 mM b-mercaptoethanol, pH 7.0), placed on ice and disrupted
by sonication (30 s, 6 times) using a homogenizer (Bandelin,
Berlin, Germany). Disrupted cells were incubated with 200ml of Onitrophenyl-
b-D-galactopyranoside (ONPG) solution (4 mg/ml in A
buffer; K2HPO4 1.05 g, KH2PO4 0.45 g, (NH4)2SO4 0.1 g, Na3-citrate-2
H2O 0.05 g, 100 ml final volume) at 28
C until yellow color
appeared. Reaction was stopped by the addition of 1 M sodium
carbonate. After centrifugation at 12,000g for 10 min, the absorbance
of supernatant was measured at 420 nm and 550 nm.
b-Glu activity was determined by the method of Belancic,
Gunata, Vallier, and Agosin (2003) using p-nitrophenyl-b-D-glucopyranoside
(pNPG) as the substrate. After cells were disrupted by
sonication (30 s, 6 times), b-Glu activity of cell extract was determined
by incubating mixture consisting of 50 ml of pNPG (10 mM),
50 ml of sodium acetate (200 mM, pH 5.5) and 0.1 ml of cell extract
for 15 min at 37
C. The reaction was stopped by the addition of
800 ml of 1 M sodium carbonate. The amount of p-nitrophenol
(pNP) released was measured at 400 nm using a spectrophotometer.
One unit of b-Glu activity was defined as the amount of
enzyme that released 1 mmol of pNP from the substrate per min.
a-Galactosidase (a-Gal) activity was measured by method of
Church, Meyers, and Srinivasan (1980). Cells were disrupted by
sonication (30 s, 6 times). p-nitrophenyl-a-galactopyranoside
(pNPGal) was used as the substrate and the released pNP was
measured at 400 nm a-Glucosidase (a-Glu) activity was measured
by using p-nitrophenyl-a-D-glucopyranoside as the substrate
(Bergmeyer, Grabl, & Walter, 1988). Enzymatic reaction was performed
by mixing 0.9 ml of 1 mM substrate prepared in 50 mM
sodium phosphate buffer (pH 6.5) with 0.1 ml of cell extract and
incubated at 37
C. The amount of pNP released was examined by
measuring absorbance at 400 nm.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. กิจกรรมเอนไซม์แยกสายพันธุ์ระบบ API ZYM ใช้เพื่อประเมินกิจกรรมของเอนไซม์แยกสายพันธุ์ (Humble แอนนา และฟิลลิปส์ 1977) แก้ไขกิจกรรม b Galวัดโดยใช้วิธีของมิลเลอร์ (1972) เซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงและ resuspended ใน 1 มิลลิลิตรของ Z buffer (60 มม.KCl Na2HPO4 7H2O, H2O NaH2PO4 40 มม. 10 มม. MgSO4 1 มม.7H2O, b 50 มม.-mercaptoethanol, pH 7.0), วางบนน้ำแข็ง และหยุดชะงักโดย sonication (30 s ครั้งที่ 6) ใช้ homogenizer (Bandelinเบอร์ลิน เยอรมนี) เซลล์หยุดชะงักได้รับการกก ด้วย 200ml ของ Onitrophenyl-โซลูชัน b-D-galactopyranoside (ONPG) (4 มิลลิกรัม/มิลลิลิตรใน Aบัฟเฟอร์ K2HPO4 1.05 g, KH2PO4 0.45 กรัม, (NH4) 2SO4 0.1 กรัม Na3-ซิเตรต-2H2O ที่ 0.05 กรัม 100 มล.ปริมาตรสุดท้าย) ที่ 28 C จนถึงสีเหลืองปรากฏ หยุดปฏิกิริยา โดยการเติมโซเดียม 1 Mคาร์บอเนต หลังจากหมุนเหวี่ยงที่ 12,000g 10 นาที ค่าการของ supernatant โดยวัดที่ 420 nm และ 550 nmกิจกรรม b Glu ถูกกำหนด โดยวิธีการของ BelancicGunata, Vallier และ Agosin (2003) โดยใช้ p-nitrophenyl-b-D-glucopyranoside(pNPG) เป็นพื้นผิว หลังจากที่เซลล์ถูกแทรกแซงด้วยsonication (30 s ครั้งที่ 6), กำหนดกิจกรรม b Glu ของเซลล์สารสกัดจากโดย incubating ส่วนผสมที่ประกอบด้วย pNPG (10 mM), 50 มล.50 ml ของโซเดียมอะซิเต (200 มม. ค่า pH 5.5) และ 0.1 มล.สารสกัดจากเซลล์15 นาทีที่ 37 c หยุดปฏิกิริยา โดยการเติม800 มล.ของ 1 M โซเดียมคาร์บอเนต จำนวน p-nitrophenolการเผยแพร่ (pNP) ซึ่งวัดได้ 400 nm ใช้สเปคหนึ่งหน่วยกิจกรรม b Glu ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่นำออกใช้ 1 โมลของ pNP จากพื้นผิวต่อนาทีกิจกรรม (เป็น Gal) เป็น Galactosidase โดยวัดจากวิธีการคริสตจักร ริสเมเยอร์ส และ Srinivasan (1980) เซลล์ถูกแทรกแซงด้วยsonication (30 s ครั้งที่ 6) p nitrophenyl a galactopyranoside(pNPGal) ใช้เป็นสารตั้งต้น และ pNP ที่ออกมาคือวัดที่ 400 nm (เป็น Glu) เป็น Glucosidase กิจกรรมซึ่งวัดได้โดยใช้ p-nitrophenyl-a-D-glucopyranoside เป็นพื้นผิว(Bergmeyer, Grabl และ วอลเตอร์ 1988) ทำปฏิกิริยาเอนไซม์โดยการผสม 0.9 ml ของพื้นผิว 1 มม.ใน 50 มม.แยกโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.5) กับ 0.1 มล.ของเซลล์ และรับการกกที่ 37 c จำนวน pNP ออกถูกตรวจสอบโดยวัดค่าที่ 400 nm

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.3 เอนไซม์ของสายพันธุ์ที่แยก
ระบบ API ZYM ถูกใช้ในการประเมินผลการทำงานของเอนไซม์ของ
สายพันธุ์ที่แยก (ฮัมเบิล, แอนนาและฟิลลิป, 1977) กิจกรรม B-Gal ถูก
วัดโดยใช้วิธีการของมิลเลอร์ (1972) เซลล์ที่ถูกเก็บรวบรวม
โดยการหมุนเหวี่ยงและ resuspended ใน 1 มิลลิลิตรของ Z บัฟเฟอร์ (60 มิลลิ
Na2HPO4 7H2O, 40 มิลลิเมตร NaH2PO4 H2O 10 มิลลิ KCl 1 มิ MgSO4
7H2O, ขนาด 50 มม B-mercaptoethanol ค่า pH 7.0) ที่วางอยู่บนน้ำแข็งและกระจัดกระจาย
โดย sonication (30 s, ครั้งที่ 6) โดยใช้ homogenizer A (Bandelin,
เบอร์ลิน, เยอรมนี) เซลล์หยุดชะงักถูกบ่มกับ 200ml ของ Onitrophenyl-
BD-galactopyranoside (ONPG) วิธีการแก้ปัญหา (4 mg / ml ใน บริษัท A
บัฟเฟอร์; K2HPO4 1.05 กรัม, KH2PO4 0.45 กรัม (NH4) 2SO4 0.1 กรัม, na3-citrate-2
H2O 0.05 กรัม 100 เล่มสุดท้ายมล.) วันที่ 28 องศาเซลเซียสจนสีเหลือง
ปรากฏ ปฏิกิริยาก็หยุดโดยนอกเหนือจาก M 1 โซเดียม
คาร์บอเนต หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 12,000g เป็นเวลา 10 นาที, ดูดกลืนแสง
ของสารละลายวัดที่ 420 นาโนเมตรและ 550 นาโนเมตร.
กิจกรรม Glu B ถูกกำหนดโดยวิธีการ Belancic ที่
Gunata, Vallier และ Agosin (2003) โดยใช้ P-Nitrophenyl-BD- glucopyranoside
(pNPG) เป็นสารตั้งต้น หลังจากที่เซลล์ถูกรบกวนด้วย
sonication (30 s, ครั้งที่ 6), B-Glu กิจกรรมของสารสกัดจากเซลล์ถูกกำหนด
โดยการบ่มส่วนผสมประกอบด้วย 50 มล pNPG (10 มิลลิเมตร)
50 มล. ของโซเดียมอะซิเตท (200 มิลลิเมตรมีค่า pH 5.5) และ 0.1 มล. ของสารสกัดจากเซลล์
เป็นเวลา 15 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่มของ
800 มล. 1 เมตรโซเดียมคาร์บอเนต ปริมาณของ P-nitrophenol
(PnP) ออกวัดที่ 400 นาโนเมตรโดยใช้สเปก.
หนึ่งหน่วยของกิจกรรม B-Glu ถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินของ
เอนไซม์ที่ปล่อยออกมา 1 มิลลิโมลของ PNP จากพื้นผิวต่อนาที.
A-Galactosidase (ก -Gal) กิจกรรมโดยวัดจากวิธีการของ
คริสตจักรเมเยอร์สและ Srinivasan (1980) เซลล์ที่ถูกรบกวนด้วย
sonication (30 s, ครั้งที่ 6) P-Nitrophenyl-a-galactopyranoside
(pNPGal) ถูกนำมาใช้เป็นสารตั้งต้นและปล่อย PnP ถูก
วัดที่ 400 นาโนเมตร-glucosidase (a-Glu) กิจกรรมวัด
โดยใช้ P-Nitrophenyl-AD-glucopyranoside เป็นสารตั้งต้น
(Bergmeyer, Grabl และวอลเตอร์ 1988) ปฏิกิริยาของเอนไซม์ที่ได้ดำเนินการ
โดยการผสม 0.9 มิลลิลิตร 1 มิลลิตั้งต้นเตรียมในขนาด 50 มม
โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.5) 0.1 มล. ของสารสกัดจากเซลล์และการ
บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ปริมาณของ PnP ที่ปล่อยออกมาได้รับการตรวจสอบโดย
การวัดการดูดกลืนแสงที่ 400 นาโนเมตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 กิจกรรมของเอนไซม์ที่แยกสายพันธุ์ระบบ zym API ประเมินผลกิจกรรมเอนไซม์ของแยกสายพันธุ์ ( ต้อย แอนนา และ ฟิลลิป , 1977 ) กิจกรรม b-gal คือวัดโดยใช้วิธีมิลเลอร์ ( 1972 ) เซลล์มีการรวบรวมโดย 3 ใน 1 มิลลิลิตร และ resuspended Z บัฟเฟอร์ ( 60 มม.na2hpo4 7h2o , h2o nah2po4 40 mM KCl 10 มิล 1 มิล MgSO4 ใ7h2o b-mercaptoethanol , 50 มม. , pH 7.0 ) , วางไว้บนน้ำแข็ง และกระจัดกระจายโดย sonication ( 30 , 6 ครั้ง ) ใช้ ( bandelin Homogenizer ,เบอร์ลิน , เยอรมนี ) รบกวนเซลล์ถูกบ่มกับ 200ml onitrophenyl - ของb-d-galactopyranoside ( onpg ) สารละลาย ( 4 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรในบัฟเฟอร์ ; k2hpo4 1.05 กรัม kh2po4 0.45 กรัม ( NH4 ) 2so4 na3-citrate-2 0.1 กรัมH2O 0.05 กรัม ปริมาตรสุดท้าย 100 ml ) ที่ 28 C จนถึงสีเหลืองปรากฏ ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเติมโซเดียม 1 ม.คาร์บอเนต หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 12000g เป็นเวลา 10 นาที นของที่นำถูกวัดที่ 420 nm และ 550 นาโนเมตรกิจกรรม b-glu ถูกกำหนดโดยวิธีการ belancic ,gunata vallier , และ agosin ( 2003 ) โดยใช้ p-nitrophenyl-b-d-glucopyranoside( pnpg ) เป็นสับสเตรท หลังจากเซลล์ถูกรบกวนโดยsonication ( 30 , 6 ครั้ง ) b-glu กิจกรรมของเซลล์ สารสกัดถูกกำหนดโดยการแช่ประกอบด้วย 50 มิลลิลิตร ผสม pnpg ( 10 มม. )50 กรัมของโซเดียมอะซิเตต ( 200 มม. , pH 5.5 ) และ 0.1 มิลลิลิตร สารสกัดจากเซลล์15 นาที ที่ 37 องศาเซลเซียส ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยนอกเหนือจาก800 มิลลิลิตร โซเดียม คาร์บอเนต 1 M . จำนวน p-nitrophenol( PNP ) ออกวัดที่ 400 nm ใช้วัสดุหน่วยหนึ่งของกิจกรรม b-glu ถูกกำหนดเป็นจำนวนเอนไซม์ที่ปล่อยออกมาจากพื้นผิวของ PNP 1 มิลลิโมลต่อนาทีa-galactosidase ( a-gal ) กิจกรรมถูกวัดโดยวิธีของโบสถ์ เมเยอร์ส และ srinivasan ( 1980 ) เซลล์ที่ถูกรบกวนโดยsonication ( 30 , 6 ครั้ง ) p-nitrophenyl-a-galactopyranoside( pnpgal ) ถูกใช้เป็นฐานรองและเผยแพร่ PNG คือวัดที่ 400 nm a-glucosidase ( a-glu ) กิจกรรมวัดโดยใช้ p-nitrophenyl-a-d-glucopyranoside เป็น พื้นผิว( bergmeyer grabl , และ , วอลเตอร์ , 1988 ) ปฏิกิริยาของเอนไซม์ที่ถูกแสดงโดยผสม 0.9 ml ( 1 มม. ที่เตรียมไว้ใน 50 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.5 ) 0.1 มิลลิลิตรและสารสกัดจากเซลล์บ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ปริมาณของ PNP ออกตรวจสอบโดยวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 400 นาโนเมตร