The exposed Serpin reactive centre

The exposed Serpin reactive centre loop controls the specificity of the serpin proteinase interaction. Mutations within this region have been used to generate novel potentially therapeutic inhibitors. In this study we examine the effect of the serpin scaffold and reactive centre loop length upon the generation of such inhibitors. The reactive centre loop regions, P7-P(3'), of α1-antitrypsin and α1-antichymotrypsin were replaced by the corresponding residues of the viral serpin, Serp1, to form AT/Serp1 and ACT/Serp1, respectively. AT/Serp1 formed SDS stable complexes with a range of proteinases with association rate constants for plasmin, tissue plasminogen activator, urokinase, thrombin and factor Xa of approximately 104 M-1 s-1 and a stoichiometry of inhibition of approximately 1 for all of them. ACT/Serp1, however, formed SDS-stable complexes with only plasmin and thrombin with association rate constant 100-fold slower than AT/Serp1 and an increased stoichiometry of inhibition. The reactive centre loop of ACT/Serp1 is four amino acid residues longer than AT/Serp1. These four additional residues (VETR) were inserted into AT/Serp1 to form AT/Serp1(VETR). AT/Serp1(VETR) formed SDS stable complexes with plasmin, thrombin and tissue plasminogen activator similar to AT/Serp1, however, the association rate constants were 10-fold slower than those observed with AT/Serp1, while the stoichiometry of inhibition remained around 1. These results suggest that the additional reactive centre loop residues effect the rate of initial complex formation by placing the reactive centre loop in a non-ideal conformation. This study demonstrates that both reactive centre loop length and serpin scaffold are important in defining the inhibitory characteristics of a serpin.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วนรอบศูนย์กลางปฏิกิริยา Serpin สัมผัสควบคุมความการโต้ตอบ proteinase serpin พันธุ์ในภูมิภาคนี้มีการใช้ในการสร้างสารยับยั้งอาจรักษานวนิยาย ในการศึกษานี้ เราตรวจสอบผลของนั่งร้าน serpin และความยาววนรอบศูนย์กลางปฏิกิริยาเมื่อมีการสร้างสารยับยั้งดังกล่าว ภูมิภาคศูนย์ปฏิกิริยาห่วง P7-P(3'), α1 antitrypsin และ α1 antichymotrypsin ถูกแทนที่ ด้วยตกของการไวรัส serpin, Serp1 แบบฟอร์มที่สอดคล้องกัน / Serp1 และ ACT/Serp1 ตามลำดับ ที่ / Serp1 เกิด SDS คอมเพล็กซ์เสถียรกับ proteinases มีค่าคงที่อัตราสมาคมสำหรับ plasmin เนื้อเยื่อ plasminogen activator, urokinase, thrombin และคูณ Xa ของประมาณ 104 M-1 s-1 และ stoichiometry การยับยั้งจากประมาณ 1 สำหรับทุกคน อย่างไรก็ตาม ACT/Serp1 รูปแบบคอมเพล็กซ์ SDS มีเสถียรภาพ โดยเฉพาะ plasmin และ thrombin กับความสัมพันธ์ของค่าคงอัตรา 100-fold ช้ากว่า AT / Serp1 และ stoichiometry การเพิ่มขึ้นของยับยั้ง ACT/Serp1 วนศูนย์ปฏิกิริยา 4 กรดอะมิโนตกนานกว่า AT / Serp1 ตกค้างเพิ่มเติมเหล่านี้สี่ (VETR) ถูกแทรกไว้ใน AT / Serp1 แบบฟอร์ม AT/Serp1(VETR) คอมเพล็กซ์มีเสถียรภาพ SDS plasmin, thrombin และเนื้อเยื่อ plasminogen activator คล้ายกับที่เกิดขึ้น AT/Serp1(VETR) / Serp1 อย่างไรก็ตาม ความสัมพันธ์ของค่าคงที่อัตราถูก 10-fold ช้ากว่าผู้สังเกตกับ AT / Serp1 ขณะ stoichiometry ของยับยั้งอยู่ ประมาณ 1 ผลลัพธ์เหล่านี้แนะนำว่า ตกวนรอบศูนย์กลางปฏิกิริยาที่เติมผลอัตราการก่อตัวเริ่มต้นที่ซับซ้อน โดยทำการวนรอบศูนย์กลางปฏิกิริยาในรูปแบบที่ไม่เหมาะ การศึกษานี้แสดงว่า ทั้งสองปฏิกิริยาศูนย์ความยาววนรอบ และ serpin นั่งร้านมีความสำคัญในการกำหนดลักษณะ inhibitory ของ serpin

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สัมผัส Serpin ห่วงศูนย์ควบคุมปฏิกิริยาจำเพาะของการปฏิสัมพันธ์ serpin โปรที่ การกลายพันธุ์ในภูมิภาคนี้ได้ถูกนำมาใช้ในการสร้างสารยับยั้งนวนิยายที่อาจเกิดขึ้นในการรักษา ในการศึกษานี้เราตรวจสอบผลกระทบของนั่งร้าน serpin และระยะเวลาในศูนย์ห่วงปฏิกิริยาเมื่อการสร้างสารยับยั้งการดังกล่าว ภูมิภาคปฏิกิริยาศูนย์ห่วง P7-P (3) ของα1-antitrypsin และα1-antichymotrypsin ถูกแทนที่ด้วยสารตกค้างที่สอดคล้องกันของ serpin ไวรัส Serp1 ในรูปแบบ AT / Serp1 และพระราชบัญญัติการ / Serp1 ตามลำดับ AT / Serp1 รูปแบบ SDS คอมเพล็กซ์มั่นคงกับช่วงของเอนไซม์ที่มีค่าคงที่อัตราสมาคม plasmin เนื้อเยื่อ plasminogen กระตุ้น urokinase, thrombin และปัจจัย Xa ประมาณ 104 M-1 S-1 และปริมาณสารสัมพันธ์ของการยับยั้งการประมาณ 1 สำหรับทั้งหมดของพวกเขา . ACT / Serp1 แต่รูปแบบคอมเพล็กซ์ระบบ SDS-มั่นคงกับ plasmin เท่านั้นและ thrombin มีอัตราคงที่สมาคม 100 เท่าช้ากว่า AT / Serp1 และปริมาณสารสัมพันธ์ที่เพิ่มขึ้นของการยับยั้ง ห่วงศูนย์ปฏิกิริยาของการกระทำ / Serp1 สี่กรดอะมิโนนานกว่า AT / Serp1 สี่เหล่านี้ตกค้างเพิ่มเติม (VETR) ถูกแทรกลงใน AT / Serp1 ในรูปแบบ AT / Serp1 (VETR) AT / Serp1 (VETR) รูปแบบ SDS คอมเพล็กซ์มั่นคงกับ plasmin, thrombin และเนื้อเยื่อ plasminogen Activator คล้ายกับ AT / Serp1 แต่คงอัตราสมาคมเป็น 10 เท่าช้ากว่าที่พบกับ AT / Serp1 ในขณะที่ปริมาณสารสัมพันธ์ของการยับยั้งที่ยังคงอยู่รอบ ๆ 1. ผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่าศูนย์ปฏิกิริยาเพิ่มเติมตกค้างห่วงผลกระทบจากอัตราของการสร้างที่ซับซ้อนเริ่มต้นโดยการวางห่วงศูนย์ปฏิกิริยาในรูปแบบที่ไม่เหมาะ การศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นว่าทั้งสองศูนย์ปฏิกิริยาความยาวห่วงและ serpin นั่งร้านที่มีความสำคัญในการกำหนดลักษณะของการยับยั้ง serpin