Streptomyces sp. strain K30 induces

Streptomyces sp. strain K30 induces the formation of an extracellular Lcp (latex-clearing protein) during poly(cis-1,4-isoprene) degradation. To investigate the function of this enzyme in Streptomyces sp. strain K30, the lcp gene was disrupted. This was the first time that the screening for a knock out lcp mutant of Streptomyces sp. strain K30 was successful. The resulting mutant Streptomyces sp. K30_lcpΩKm exhibited reduced growth in liquid mineral salts media containing poly(cis-1,4-isoprene) as the sole carbon and energy source. Additionally, there was no detectable Lcp activity on latex overlay agar plates. When Lcp from Streptomyces sp. strain K30 was heterologously expressed in strains TK23 and TK24 of Streptomyces lividans and a strain of S. erythraea with plasmid pIJ6021::lcp, the recombinant strains acquired the ability to cleave synthetic poly(cis-1,4-isoprene), confirming the involvement of Lcp in initial polymer cleavage. Specific anti-LcpK30 IgGs were employed in Western blot analysis to detect the secretion of Lcp in the supernatant. We have conducted an important experiment to demonstrate Lcp activity using the supernatant of these Lcp-expressing strains in vitro. All three strains obviously secreted a functional Lcp, as indicated by the formation of halo. Functional testing of Lcp with different plasmids in Escherichia coli strains and Pseudomonas strains was, however, not successful.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้องใช้ sp. streptomyces K30 ก่อให้เกิดการก่อตัวของ Lcp extracellular (หักยางโปรตีน) ในระหว่างการสลายตัวของ poly(cis-1,4-isoprene) การตรวจสอบการทำงานของเอนไซม์นี้ใน Streptomyces sp.ต้องใช้ K30 ยีน lcp ระหว่างสองวันนั้น นี้เป็นครั้งแรกที่ตรวจสำหรับเคาะออก lcp mutant ของ Streptomyces sp.ต้องใช้ K30 เสร็จเรียบร้อยแล้ว Mutant ผลลัพธ์ที่จัดแสดง Streptomyces sp. K30_lcpΩKm ลดการเจริญเติบโตในสื่อเกลือแร่ของเหลวที่ประกอบด้วย poly(cis-1,4-isoprene) เป็นแหล่งคาร์บอนและพลังงานแต่เพียงผู้เดียว นอกจากนี้ มีกิจกรรม Lcp ไม่สามารถตรวจสอบได้บนแผ่น agar ซ้อนทับยาง เมื่อ Lcp จาก Streptomyces sp.ต้องใช้ K30 ถูกแสดงในสายพันธุ์ TK23 และ TK24 ของ Streptomyces lividans และต้องใช้ของ S. erythraea มี plasmid pIJ6021::lcp heterologously สายพันธุ์ recombinant มาความสามารถแบะ poly(cis-1,4-isoprene) สังเคราะห์ ยืนยันการมีส่วนร่วมของ Lcp ในพอลิเมอร์เริ่มปริ IgGs LcpK30 ป้องกันการถูกจ้างงานในคืนในตะวันตกตาวิเคราะห์การหลั่งของ Lcp ใน supernatant เราได้ดำเนินการทดลองที่สำคัญแสดงให้เห็นถึงกิจกรรมขณะใช้ supernatant ของเหล่านี้ขณะที่มีการแสดงสายพันธุ์การเพาะเลี้ยง สายพันธุ์ที่สามทั้งหมดอย่างชัดเจน secreted ขณะทำงาน ตามที่ระบุ โดยการก่อตัวของ halo งานทดสอบ Lcp กับ plasmids ต่าง ๆ ใน Escherichia coli สายพันธุ์และสายพันธุ์ Pseudomonas ได้ อย่างไรก็ตาม ไม่ประสบความสำเร็จ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Streptomyces SP สายพันธุ์ K30 ก่อให้เกิดการก่อตัวของสาร LCP (โปรตีนน้ำยางล้าง) ในระหว่างโพลี (CIS-1,4-isoprene) การย่อยสลาย ในการตรวจสอบการทำงานของเอนไซม์ใน Streptomyces เอสพี K30 ความเครียดยีน lc พีที่ถูกรบกวน นี่เป็นครั้งแรกที่การตรวจคัดกรองสำหรับเคาะออกกลายพันธุ์ของเชื้อ Streptomyces lc พีเอสพี K30 สายพันธุ์ที่ประสบความสำเร็จ กลายพันธุ์ที่เกิด Streptomyces SP K30_lcpΩKmแสดงการเจริญเติบโตที่ลดลงในเกลือแร่สื่อของเหลวที่มีโพลี (CIS-1,4-isoprene) เป็นคาร์บอนและแหล่งพลังงาน นอกจากนี้ไม่มีกิจกรรม LCP ที่ตรวจพบบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อซ้อนทับยาง เมื่อ LCP จาก Streptomyces SP สายพันธุ์ K30 ได้แสดงออก heterologously ในสายพันธุ์ TK23 และ TK24 ของ Streptomyces lividans และสายพันธุ์ของเอสพลาสมิดที่มี erythraea pIJ6021 :: lc พี, สายพันธุ์ที่ได้มา recombinant ความสามารถในการยึดสังเคราะห์โพลี (CIS-1,4-isoprene) ยืนยันการมีส่วนร่วม LCP ของความแตกแยกในลิเมอร์เริ่มต้น เฉพาะต่อต้าน LcpK30 IgGs ถูกใช้ในการวิเคราะห์ดวงตะวันในการตรวจสอบการหลั่งของ LCP ในใส เราได้ดำเนินการทดสอบที่สำคัญแสดงให้เห็นถึงกิจกรรม LCP ใช้สารละลายเหล่านี้สายพันธุ์ LCP-แสดงในหลอดทดลอง ทั้งสามสายพันธุ์ที่เห็นได้ชัดหลั่งทำงาน LCP ตามที่ระบุโดยการก่อตัวของรัศมี การทดสอบการทำงานของ LCP กับพลาสมิดที่แตกต่างกันใน Escherichia coli สายพันธุ์และสายพันธุ์ Pseudomonas ได้ แต่ไม่ประสบความสำเร็จ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Streptomyces sp . สายพันธุ์ K30 ก่อให้เกิดการสะสมของ LCP ภายนอกเซลล์ ( โปรตีนล้างน้ำยางพอลิ cis-1,4-isoprene ) ) ในระหว่างการย่อยสลาย เพื่อศึกษาการทำงานของเอนไซม์นี้ใน Streptomyces sp . สายพันธุ์ K30 , LCP ยีนถูกหยุดชะงัก นี่เป็นครั้งแรกที่การคัดกรองเคาะออกของ Streptomyces sp . สายพันธุ์ K30 LCP กลายพันธุ์ที่ประสบความสำเร็จ Streptomyces sp . สายพันธุ์ที่เกิดขึ้นk30_lcp Ω km มีการเจริญในน้ำเกลือแร่สื่อที่มีพอลิ cis-1,4-isoprene ) เป็นแหล่งคาร์บอนและแหล่งพลังงาน นอกจากนี้ ยังมีกิจกรรมที่ไม่ได้ 12 ยางหุ้มวุ้นแผ่น เมื่อจาก Streptomyces sp . สายพันธุ์ LCP K30 heterologously แสดงออกในสายพันธุ์ของ Streptomyces lividans และ tk23 tk24 และสายพันธุ์ของ S . erythraea กับพลาสมิด pij6021 12 : : ,สายพันธุ์ที่ได้รับความสามารถในการแยกยีนโพลีสังเคราะห์ ( cis-1,4-isoprene ) ยืนยันการมีส่วนร่วมของท่าเรือแหลมฉบังในรองพอลิเมอร์เบื้องต้น iggs anti-lcpk30 เจาะจง สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ Western blot พบการหลั่งของท่าเรือแหลมฉบังในน่าน .เราได้ทำการทดลองที่สำคัญแสดงให้เห็นถึงกิจกรรม LCP ใช้นำของเหล่านี้ LCP แสดงสายพันธุ์ที่เลี้ยงในอาหาร ทั้ง 3 สายพันธุ์ที่เห็นได้ชัดที่มีหน้าที่เป็น 12 , ตามที่ระบุโดยการก่อตัวของ Halo การทดสอบของ LCP ด้วยพลาสมิดที่แตกต่างกันใน Escherichia coli สายพันธุ์และสายพันธุ์ของถูก แต่ไม่ประสบความสำเร็จ