MATERIALS AND METHODSProtein Purifi

MATERIALS AND METHODS
Protein Purification. Approximately 4 x 1010 cells were
grown to confluence in roller bottles, and cell lysates were
prepared as described (5). The supernatant was loaded onto a
QAE Sephadex column equilibrated with 10 mM Tris HCl (pH
7.4). The column was extensively washed with the equilibrating
buffer, and the RNA binding protein was eluted with a NaCl
gradient of 0-1.5 M in 500 ml. The presence ofthe RNAbinding
protein in the chromatography fractions was monitored by
RNA gel-shift assay with a radiolabeled synthetic RNA representing
the RV 3' (+)-SL sequence (Fig. 1) transcribed from a
DNA template as described (5). The active fractions were
pooled, concentrated in the presence of polyethylene glycol
(Mr, 20,000), and dialyzed overnight against 10 mM Tris HCl
(pH 7.4).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการ
โปรตีนบริสุทธิ์ ประมาณ 4 x 1,010 เซลล์ถูก
เติบโตขึ้นไปบรรจบในขวดลูกกลิ้งและ lysates เซลล์ได้
เตรียมตามที่อธิบายไว้ (5) ใสถูกโหลดลงในคอลัมน์
qae Sephadex equilibrated 10 มม. hcl tris (ph
7.4) คอลัมน์ถูกล้างอย่างกว้างขวางกับ equilibrating
กันชนและ RNA โปรตีนถูกชะด้วย nacl
ลาด 0-15 เมตรใน 500 มล. การปรากฏตัว ofthe rnabinding
โปรตีนในเศษส่วนโคได้รับการตรวจสอบโดย
RNA ทดสอบเจลกะกับอาร์เอ็นเอสังเคราะห์รังสีที่เป็นตัวแทน
ลำดับ RV 3 '() sl (รูปที่ 1) คัดลอกจาก
ดีเอ็นเอแม่แบบตามที่อธิบายไว้ (5 ) เศษส่วนที่ใช้งานอยู่
pooled เข้มข้นในการปรากฏตัวของคอลลีน
(mr, 20,000),และ dialyzed ค้างคืนกับ 10 มิลลิเมตร hcl​​ tris
(ph 7.4)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
ทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีน ประมาณ 4 x 1010 เซลล์ถูก
โตบรรจบในขวดลูกกลิ้ง และ lysates เซลล์
เตรียมพร้อมอธิบาย (5) Supernatant ถูกโหลดไป
คอลัมน์ QAE Sephadex equilibrated กับทริสเรทติ้ง HCl 10 มม. (ค่า pH
7.4) คอลัมน์ถูกล้างอย่างกว้างขวาง ด้วยการ equilibrating
บัฟเฟอร์ และโปรตีนรวมอาร์เอ็นเอมี eluted กับ NaCl เป็น
ไล่ระดับ 0-15 เมตรในขนาด 500 มล. ของ RNAbinding
โปรตีนเศษ chromatography ถูกตรวจสอบโดย
ทดสอบกะเจอาร์เอ็นเอ ด้วยการ radiolabeled สังเคราะห์อาร์เอ็นเอแสดง
RV 3 ()-ลำดับ SL (Fig. 1) ทับศัพท์จากการ
แม่แบบดีเอ็นเอเป็นอธิบาย (5) ส่วนใช้งานอยู่ได้
ทางถูกพู เข้มข้นในต่อหน้าของ polyethylene glycol
(Mr, 20000), และค้างคืนกับ 10 มม.
(pH 7.4) HCl ตรี dialyzed

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอกสารวิธีทำน้ำบริสุทธิ์
โปรตีนและ. ประมาณ 4 x 1010 เซลล์เป็น
เติบโตไปบรรจบของแม่น้ำทั้งสองสายในขวดนมลูกกลิ้งและ lysates เซลล์เป็น
เตรียมเช่นที่อธิบายไว้( 5 ) supernatant นั้นจะถูกโหลดเข้าสู่คอลัมน์ sephadex
qae equilibrated ที่พร้อมด้วย 10 บริษัททริสเรทติ้งจำกัด HCL มม.( PH
7.4 ) คอลัมน์ที่มีต่อด้วยเนื่องจาก
buffer ที่โปรตีนและมีผลผูกพัน rna ได้ eluted พร้อมด้วยการไล่ระดับสี NaCl
ของ 0-15 ม.ใน 500 มล. ที่ Download rnabinding
โปรตีนใน chromatography เพียงเศษเสี้ยววินาทีก็ตรวจสอบโดย
rna เจล - Shift สอบด้วย radiolabeled ทำจากเส้นใยสังเคราะห์ rna เป็นตัวแทน
ซึ่งจะช่วยให้รถ RV 3 '() - C (รูปที่ 1 )ถอดสคริปต์จากเทมเพลต
ดีเอ็นเอตามที่อธิบายไว้( 5 ). ใช้งานได้เพียงเศษเสี้ยววินาที
ซึ่งจะช่วยเป็นกระจุกตัวอยู่ในกลุ่มที่มีอยู่ของ ผลิตภัณฑ์ เอ็มอีจี
(นาย 20 , 000 )dialyzed และพักค้างคืนจากบริษัททริสเรทติ้งจำกัด HCL / 10 มม.
( PH 7.4 )