Overnight cultures of E. coli BL21(

Overnight cultures of E. coli BL21(DE3) harbouring pET-LipBL and pETLipBL-variant
expression vectors were used to inoculate 50 ml LB
broth supplemented with kanamycin (30 mg ml21
). Cultures were
incubated under aerobic conditions at 37 uC to OD600 0.6, followed
by induction with IPTG (1 mM final concentration) and further
incubation under the same conditions for 3 h at 30 uC. Harvested
cells (7500 g, 10 min, 4 uC) were resuspended in 50 mM Tris/HCl,
pH 8.0. Cells were disrupted by two cycles of sonication for 2 min
followed by two centrifugation steps, first at 5000 g for 1 min (4 uC)
to remove intact cells and cell debris and then at 16 000 g for 10 min
(4 uC) to collect inclusion bodies. The supernatants were used as a
source of intracellular soluble proteins.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมข้ามคืนของ E. coli BL21(DE3) รีวิวสัตว์เลี้ยง-LipBL และ pETLipBL ตัวแปรเวกเตอร์นิพจน์ใช้ฉีด 50 มล.ปอนด์น้ำซุปที่เสริม ด้วยกานามัยซิน (ml21 30 มิลลิกรัม). วัฒนธรรมภายใต้เงื่อนไขแอโรบิกที่ uC 37 ไป OD600 ได้รับการกก 0.6 ตามโดยการเหนี่ยวนำด้วย IPTG (ความเข้มข้นสุดท้าย 1 มม.) และเพิ่มเติมการบ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกันสำหรับ 3 h ที่ 30 uC การเก็บเกี่ยวเซลล์ (7500 กรัม 10 นาที 4 uC) ถูก resuspended ใน 50 มม. ตรี/HClค่า pH 8.0 เซลล์ถูกแทรกแซง ด้วยรอบสองของ sonication สำหรับ 2 นาทีตาม ด้วยสองขั้นตอนหมุนเหวี่ยง แรกที่ 5000 กรัม 1 นาที (4 uC)การลบเซลล์เหมือนเดิมและเศษเซลล์ และ 16 000 g 10 นาที(4 uC) เพื่อรวบรวมร่างกายรวมกัน Supernatants ถูกใช้เป็นแหล่งที่มาของโปรตีนละลายภายในเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ค้างคืนวัฒนธรรมของเชื้อ E. coli BL21 (DE3) เก็บงำสำหรับผู้รักสัตว์ LipBL และ pETLipBL ตัวแปร
เวกเตอร์แสดงออกมาใช้ในการฉีดวัคซีน 50 มล LB
น้ำซุปเสริมด้วยกานามัยซิ (30 มิลลิกรัม ml21
) วัฒนธรรมที่ถูก
บ่มภายใต้เงื่อนไขแอโรบิกที่ 37 UC เพื่อ OD600 0.6 ตาม
โดยการเหนี่ยวนำด้วย IPTG (1 มิลลิเข้มข้นสุดท้าย) และต่อไป
บ่มภายใต้เงื่อนไขเดียวกันเป็นเวลา 3 ชั่วโมงวันที่ 30 UC เก็บเกี่ยว
เซลล์ (7500 กรัม 10 นาที 4 UC) ถูก resuspended ในขนาด 50 มมทริส / HCl,
ค่า pH 8.0 เซลล์ที่ถูกรบกวนด้วยสองรอบ sonication เป็นเวลา 2 นาที
ตามด้วยสองขั้นตอนการหมุนเหวี่ยงครั้งแรกที่ 5000 กรัมเป็นเวลา 1 นาที (4 UC)
เพื่อขจัดเซลล์เหมือนเดิมและเศษของเซลล์และแล้ววันที่ 16 000 กรัมเป็นเวลา 10 นาที
(4 UC) ในการเก็บรวบรวม ร่างกายรวม supernatants ถูกนำมาใช้เป็น
แหล่งที่มาของโปรตีนที่ละลายน้ำภายในเซลล์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของ E . coli BL21 ( DE3 ) กับ lipbl สัตว์เลี้ยงและ petlipbl แปรเวกเตอร์การแสดงออก ถูกใช้เพื่อปลูกฝีปอนด์ 50 มล.น้ำซุปเติมคานามัยซิน ( 30 มิลลิกรัม ml21) วัฒนธรรมคือบ่มภายใต้สภาวะแอโรบิกที่ 37 เป็นต้น เพื่อ od600 0.6 , ตามโดยการเหนี่ยวนำด้วยโปรตีน ( 1 มิลลิเมตรความเข้มข้นสุดท้าย ) และเพิ่มเติมบ่มเพาะภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน 3 H ที่ 30 เป็นต้น . เก็บเกี่ยวเซลล์ ( 7 , 500 กรัม , 10 นาที 4 UC ) resuspended ใน HCl ทริส / 50 มิลลิเมตรpH 8.0 . เซลล์ที่ถูกรบกวนจากสองรอบ sonication เป็นเวลา 2 นาทีตามด้วยสอง 3 ขั้นตอนแรกที่ 5 , 000 กรัม ต่อ 1 นาที ( 4 บริษัท )การเอาเซลล์เหมือนเดิมและเศษเซลล์และที่ 16 000 กรัมต่อ 10 นาที( UC ) เก็บรวมร่าง การ supernatants พบว่าแหล่งของโปรตีนที่ละลายน้ำได้ภายในเซลล์ .