Construction of a normal cDNA libra

Construction of a normal cDNA library and EST analysis. Five
microgram of mRNA from vitellogenic ovaries of wild P. monodon
was reversed transcribed and second-stranded synthesized using a
ZAP-cDNA Synthesis and Cloning Kit (BD Biosciences Clontech).
Size-selected cDNAs (>500 bp) were cloned into dephosphorylated
EcoRI/Xho I-digested Uni-ZAP® XR and transfected into E. coli
XL1-Blue MRF'. The lambda library was converted into the
pBluescript library by in vivo excision. Recombinant clones were
selected by a lacZ system following standard protocols (Sambrook
and Russell, 2001). Recombinant clones were randomly selected
from those carrying insert sizes greater than 500 bp (Srisuparbh et al.,
2003). Plasmid DNA was extracted and unidirectionally sequenced
on a MegaBase 1000 automated DNA sequencer (GE Healthcare).
EST clustering and assembly. Nucleotide sequences of ESTs were
compared with those previously deposited in the GenBank using

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ก่อสร้างห้องสมุด cDNA ปกติและวิเคราะห์ EST 5
microgram ของ mRNA จากรังไข่ vitellogenic ของ P. monodon ป่า
ถูกกลับทับ และสองขนสังเคราะห์ใช้เป็น
สังเคราะห์ ZAP cDNA และชุดโคลน (Clontech เวลาออก BD) .
เลือกขนาด cDNAs (> 500 bp) ถูกโคลนเป็น dephosphorylated
ฉันเจ่า Uni-ZAP ® XR EcoRI/Xho และ transfected ใน E. coli
MRF XL1 บลู ' รีแลมบ์ดาแปลง
pBluescript ไลบรารี โดยตอนการผ่าตัดในสัตว์ทดลอง มีโคลน recombinant
เลือกระบบ lacZ ตามโพรโทคอลมาตรฐาน (Sambrook
และ รัสเซล 2001) สุ่มเลือกโคลน recombinant
จาก ดำเนินแทรกขนาดมากกว่า 500 bp (Srisuparbh et al.,
2003) Plasmid DNA ถูกแยก และเรียงลำดับ unidirectionally
ใน MegaBase 1000 อัตโนมัติ DNA sequencer (GE สุขภาพ) .
EST คลัสเตอร์และแอสเซมบลี ลำดับนิวคลีโอไทด์ของ ESTs ถูก
เทียบกับก่อนหน้านี้ ฝากใน GenBank ใช้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สร้างห้องสมุด cDNA ปกติและการวิเคราะห์ 5
ไมโครกรัมของ mRNA จากรังไข่ของกุ้งกุลาดำ vitellogenic ป่า
คือกลับแกะและสองติดสังเคราะห์โดยใช้การสังเคราะห์ cDNA และโคลน
ปะทะชุด ( BD BIOSCIENCES clontech ) .
ขนาด cdnas เลือก ( > 500 BP ) ถูกโคลนเข้าไปใน dephosphorylated
EcoRI / xho i-digested Uni ปะทะและ® 9000 transfected ใน E . coli
xl1 สีฟ้า mrf 'โรงพยาบาลห้องสมุดแปลง
) ห้องสมุด โดยฤทธิ์ในการตัด . โคลนยีนถูก
เลือกโดย lacz ระบบดังต่อไปนี้โปรโตคอลมาตรฐาน ( sambrook
และ Russell , 2001 ) สุ่มเลือกโคลนยีน
จากผู้ที่ถือแทรกขนาดมากกว่า 500 BP (
srisuparbh et al . , 2003 ) พลาสมิดดีเอ็นเอ และ unidirectionally ลำดับ
ใน megabase 1000 มูลค่าของดีเอ็นเอ ( GE Healthcare ) .
EST การจัดกลุ่มและการประกอบ ลำดับนิวคลีโอไทด์ของฐานข้อมูลถูก
เปรียบเทียบกับก่อนหน้านี้ที่ฝากไว้
ขนาดใช้