Genomic integration of the T-DNA re

Genomic integration of the T-DNA region
Putative transgenic pea plants expressingcry1Acgene for insect
resistance and bargene as a plant selectable marker gene were
developed throughAgrobacteriumtransformation. Selective regeneration and maintenance of the developed putative transgenic
shoots were done on medium supplemented with PPT. Based on
the described procedure (Section 2.1), a minimum 7–9 months
were required to get the putative transgenic shoots ready for micrografting.In vitro putative transgenic shoots from more than
65 clones out of 2500 explants were recovered by micro-grafting
and analyzed using PCR and Southern blotting. PCR analysis was
done for all recovered putative transgenic shoots while Southern
blotting was done for few selected lines.
The results of PCR analysis using cry 1 Ac andbargene specific
primers (Fig. 3a and b) indicated the genomic integration of the
T-DNA region and thereby the transgenic nature of the regenerated
in vitro plants. Further PCR analysis of the subsequent generations
(T1–T4) indicated the stable inheritance of the introduced
transgenes to the next generations (Fig. 3c and d). The result of
Southern blot analysis using DIG labeled non-radioactive cry1Ac
probe showed a single copy for two clones (DqR and DN) and five
copies for seven clones (A9R, B3, BR, C1, C4, C5 and CR) (Fig. 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รวม genomic T DNA ภาคถั่วเหลืองถั่ว putative expressingcry1Acgene พืชสำหรับแมลงต้านทานและ bargene เป็นยีนเครื่องหมายเลือกโรงงานthroughAgrobacteriumtransformation พัฒนา มาตรการฟื้นฟูและการบำรุงรักษาการพัฒนา putative ถั่วเหลืองทำถ่ายภาพบนกลางเสริม ด้วยใช้ PPT. บนอธิบายขั้นตอน (หัวข้อ 2.1), อย่างน้อย 7-9 เดือนถูกต้องเพื่อเตรียมถ่ายภาพถั่วเหลือง putative micrograftingการเพาะเลี้ยงยอดถั่วเหลือง putative จากมากกว่าโคลน 65 จาก 2500 explants ได้กู้ โดย grafting ไมโครและวิเคราะห์โดยใช้ PCR และ blotting วิธีภาคใต้ วิเคราะห์ PCR ได้ทำทั้งหมดกู้คืน putative ถั่วเหลืองถ่ายภาพในขณะที่ภาคใต้blotting วิธีทำสำหรับบรรทัดที่เลือกไม่ผลของการใช้ PCR วิเคราะห์ร้องไห้ 1 Ac andbargene เฉพาะไพรเมอร์ (Fig. 3a และ b ระบุรวม genomic ของภูมิภาค T-ดีเอ็นเอ และทำลักษณะของการ regenerated ถั่วเหลืองการเพาะเลี้ยงพืช วิเคราะห์ PCR ต่อรุ่นต่อมา(T1-T4) ระบุเสถียรภาพที่สืบทอดของการนำtransgenes กับรุ่นถัดไป (Fig. 3c และ d) ผลของการคืนในตาภาคใต้วิเคราะห์ใช้ DIG ป้าย cry1Ac ไม่กัมมันตภาพโพรบพบสำเนาเดียวสำหรับสองโคลน (DqR และ DN) และห้าสำหรับโคลนเจ็ด (A9R, B3, BR, C1, C4, C5 และ CR) (Fig. 3

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บูรณาการจีโนมของพืชดัดแปรพันธุกรรม ซึ่ง กฟภ. เขต t-dna

expressingcry1acgene ให้ต้านทานแมลงและพืช bargene เป็นยีนเครื่องหมายคัดเลือกและพัฒนา throughagrobacteriumtransformation
. การเลือกและการดูแลรักษา พัฒนาพันธุกรรมกรดอะมิโน
ยอดเสร็จบนอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วยน้ำทะเล โดย
อธิบายขั้นตอน ( 2.1 ส่วน )อย่างน้อย 7 – 9 เดือน
ต้องได้รับการแสดงออกยีนยิงพร้อม micrografting . ในหลอดทดลองซึ่งจำลองยิงมากกว่า
65 โคลนออกจากเนื้อเยื่อที่ถูกกู้คืนจากไมโครกราฟต์ 2500
และวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้วิธี PCR และ Southern blotting . การวิเคราะห์ PCR คือ
ทำเพื่อกู้คืนทั้งหมดซึ่งจำลองยิงในขณะที่ภาคใต้
blotting วิธีทำไปบรรทัดที่เลือกไม่กี่ .
ผลของการวิเคราะห์ PCR โดยใช้ primers จำเพาะร้องไห้ 1 AC andbargene
( รูปที่ 3A และ B แบบบูรณาการจีโนมของ
t-dna ภูมิภาคและงบลักษณะพันธุกรรมของกลับมา
ในหลอดทดลองพืช การวิเคราะห์ดีเอ็นเอเพิ่มเติม ต่อมารุ่น
( T1 ( T4 ) พบมรดกที่มั่นคงของแนะนำ
transgenes ไปยังคนรุ่นต่อไป ( รูปที่ 3 C และ D ) ผลของ
Southern blot การวิเคราะห์ใช้ขุดป้ายไม่ cry1ac
ตรวจสอบกัมมันตรังสีพบสำเนาเดียวสำหรับสองสายพันธุ์ ( และ dqr DN ) 5
เล่ม 7 โคลน ( a9r , B3 , ห้องนอน , C1 , C4 , C5 และ CR ) ( รูปที่ 3