Human AMSCs were obtained from norm

Human AMSCs were obtained from normal postpartum placenta.
At first, the amnion and villus layer were bluntly separated, and
repeatedly washed with D-Hank’s solution including double resistant
(100 U/ml penicillin, 100 μg/ml streptomycin). After rinsing, amnion
was cut into several 1 mm×1 mm pieces with ophthalmic scissors and
digested at 37°C water bath for about 30 min with the action of 2.5 g/L
trypsin (Gibco). The digestion of amnion was terminated by DMEM
containing 5% calf serum and filtered through 200 mesh cell sieve. The
filtered productions of amnion were digested again in a 37°C water
bath for about 0.5 h with the addition of 1.0 g/L collagens II (Sigma).
Subsequent termination and filtrations were done as the described
above. Finally, harvested cell suspensions were centrifuged at 1000 rpm
for 5 min and the cell pellet was resuspended in low-glucose Dulbecco’s
modified Eagle’s medium (L-DMEM; Hyclone) supplemented with
10% fetal bovine serum (FBS; Hyclone), 1% penicillin-streptomycin
(Invitrogen, USA). They were then plated in 25-cm2 culture flasks at
a density of 106 cells per ml and incubated at 37°C with 5% carbon
dioxide. Medium was changed every 2 days. When the established
adherent cell colonies reached 70% confluence, they were detached
with 2.5 g/L trypsin and replated at a ratio of 1:2 in 25 cm2 flasks.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

amscs ของมนุษย์ที่ได้รับจากปกติหลังคลอดรก.
ตอนแรกน้ำคร่ำและชั้น villus ถูกแยกออกโผงผางและ
ล้างซ้ำด้วยวิธีที่ D-แฮงค์รวมทั้งทนต่อคู่
(100 U / ml penicillin, streptomycin 100 mg / ml) หลังจากล้าง
น้ำคร่ำถูกตัดออกเป็นหลาย 1 มม. × 1 ชิ้น มม. กรรไกรโรคตาและ
ย่อยที่ 37 ° C อาบน้ำประมาณ 30 นาทีกับการกระทำของ 25 g / l
trypsin (GIBCO) การย่อยอาหารของน้ำคร่ำถูกยกเลิกโดย
DMEM ที่มีซีรั่ม 5% ลูกวัวและกรองผ่านกระชอน 200 เซลล์ตาข่าย โปรดักชั่นการกรอง
จากน้ำคร่ำถูกย่อยอีกครั้งใน 37 ° C อาบน้ำ
ประมาณ 0.5 ชั่​​วโมงด้วยนอกเหนือจาก 1.0 g / l คอลลาเจนที่สอง (ซิกม่า).
การเลิกจ้างตามมาและ filtrations ได้ทำตาม
อธิบายข้างต้น ในที่สุด,เก็บเกี่ยวเซลล์สนองถูกหมุนเหวี่ยงที่ 1,000 รอบต่อนาที
เป็นเวลา 5 นาทีและเซลล์เม็ดถูก resuspended ในต่ำกลูโคสของ Dulbecco
ดัดแปลงนกอินทรี (l-DMEM; hyclone) เสริมด้วย
ซีรั่มวัว 10% ทารกในครรภ์ (FBS; hyclone), 1% ยาปฏิชีวนะ streptomycin-
(Invitrogen, USA) พวกเขาถูกชุบแล้วใน 25 cm2 ขวดวัฒนธรรมที่
ความหนาแน่นของ 106 เซลล์ต่อมิลลิลิตรและบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C มีคาร์บอน 5%
ดีออกไซด์ กลางก็เปลี่ยนทุก 2 วัน เมื่อจัดตั้ง
อาณานิคมเซลล์สานุศิษย์ถึงจุดบรรจบ 70% พวกเขาถูกถอดออก
กับ 2.5 g / l trypsin และ replated ในอัตราส่วน 1:2 ใน 25 cm2 ขวด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

AMSCs มนุษย์ได้รับจากปกติหลังคลอดรก.
ครั้งแรก ชั้น amnion และ villus ได้พูดคั่น และ
ซ้ำล้าง ด้วยโซลูชั่น D แฮงก์รวมทั้งคู่ทน
(100 U/ml ยาเพนนิซิลลิน 100 μg/ml streptomycin) หลังจากล้าง amnion
ตัดเป็นชิ้น 1 มม. × 1 มม.หลาย ด้วยกรรไกร ophthalmic และ
เจ่าที่ 37° C น้ำอาบน้ำประมาณ 30 นาทีมีการดำเนินการ 25 g/L
ทริปซิน (Gibco) การย่อยอาหารของ amnion ถูกยกเลิก โดย DMEM
ประกอบด้วยเซรั่มลูก 5% และกรองผ่านตะแกรงตาข่าย 200 เซลล์
ผลิตกรองของ amnion ถูกต้องอีกครั้งในน้ำ 37° C
อาบน้ำประมาณ 0.5 h แห่ง collagens 1.0 g/L II (ซิกมา) .
จ้าง Subsequent และ filtrations ทำอธิบายไว้
ข้างบน สุดท้าย เซลล์ harvested ฟโรถูก centrifuged ที่ 1000 รอบต่อนาที
5 นาทีและเซลล์ เม็ดถูก resuspended ในกลูโคสต่ำดุลเบกโก
แก้ไขของอินทรีกลาง (L-DMEM Hyclone) เสริมด้วย
รั่มวัว 10% และทารกในครรภ์ (FBS Hyclone), ยาเพนนิซิลลิน-streptomycin 1%
(Invitrogen, USA) พวกเขาถูกชุบในน้ำวัฒนธรรม 25 cm2 ที่
ความหนาแน่นของ 106 เซลล์ต่อมล. และ incubated ที่ 37° C กับคาร์บอน 5%
ไดออกไซด์ สื่อมีการเปลี่ยนแปลงทุก 2 วัน เมื่อการสร้าง
อาณานิคมนฤมลเซลล์ถึง 70% บรรจบ พวกเดี่ยว
กับทริปซิน 2.5 g/L และ replated ในอัตราส่วน 1:2 ใน 25 cm2 นำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มนุษย์ amscs ได้จากรกสามารถคลานปกติ.
ในครั้งแรกชั้น amnion villus และได้ทำให้หายหิวแยกออกจากกันและ
ซ้ำหลายครั้งด้วย D - เข็ดของโซลูชันรวมถึงอย่างไรสืบเนื่องกันดับเบิลคลิก
( 100 U / ML 100 ไมโครกรัม/ยาซทเรพโทะไม - ซินมล.) หลังจากล้างทำความสะอาดแท้งก์ amnion
ก็ถูกตัดออกไปในหลายแห่ง 1 มม. x 1 มม.เป็นชิ้นเล็กชิ้นน้อยพร้อมด้วยกรรไกรหยอดตาและ
ย่อยที่ 37 ° C น้ำในอ่างประมาณ 30 นาทีพร้อมด้วยการดำเนินการของ 25 G / L
trypsin ( gibco ) ระบบย่อยอาหารของ amnion ก็สิ้นสุดลงโดย dmem
ประกอบด้วยเจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์ลูกวัว 5% และที่กรองผ่านตะแกรง 200 เซลล์ตาข่าย ที่กรองแล้ว
ซึ่งจะช่วยให้การผลิตของ amnion อยู่บ้างนิดหน่อยอีกครั้งในที่ 37 ° C น้ำ
อ่างอาบน้ำสำหรับเกี่ยวกับ 0.5 ชั่วโมงด้วยการเพิ่ม 1.0 กรัม/ L collagens II ( Six Sigma )..
ใน ภายหลัง และการยุติการใช้งาน filtrations ก็ทำตามที่อธิบายไว้
ทางด้านบน ในที่สุดเก็บเกี่ยวเซลล์ suspensions เป็น centrifuged ที่ 1000 รอบต่อนาที
สำหรับ 5 นาทีและบริการข้อมูลของสถานีฐานเป็นเม็ด resuspended ในระดับต่ำ - กลูโคส dulbecco ' s
แก้ไข Eagle ของขนาดกลาง( L - dmem ; hyclone )และเสริมด้วย
ซึ่งจะช่วยเฝ้าระวังและติดตามสัญญาณชีพทารกวัวอีก 10% เจลมาสก์มอยเจอร์ไรเซอร์( FBS สำหรับผู้ป่วยเบาหวาน; hyclone ), 1% อย่างไรสืบเนื่อง - ยาซทเรพโทะไม - ซิน
( invitrogen , USA ) พวกเขาเป็นตัวเสียบเคลือบทองในใบลูกปืนหลาย 25 - 2 ซ.ม.ทางวัฒนธรรมที่มีความหนาแน่น
106 เซลล์ต่อมิลลิลิตรและ incubated ใน C 37 ° C พร้อมด้วย 5% คาร์บอน
ตามมาตรฐานแล้วก๊าซ. มีขนาดกลางได้รับการเปลี่ยนทุกๆ 2 วัน เมื่ออาณาจักรเซลล์พรรคพวกขึ้น
มาถึง 70% ที่บรรจบของแม่น้ำก็หลุดออกมาด้วย
2.5 replated และ trypsin / L G ในอัตราส่วน 1 : 2 ใน 25 ซม. 2 ใบลูกปืนหลาย