Detection of the mecA Gene by Polym

Detection of the mecA Gene by Polymerase Chain Reaction: Bacterial DNA was obtained by the rapid cell lysis method as described by Unal et al (10). For the DNA extraction, 0.1 mL of an overnight culture of bacteria in Mueller-Hinton broth washarvested by centrifuging the broth in a microcentrifuge tube at 16,000×g for 30 seconds. The precipitates were resuspended in 50 μL lysostaphin (100 μg/mL; Sigma) and they were incubated at 37°C for 10 minutes. Following the addition of 50 μL proteinase K (100 μg/mL; Sigma Aldrich) and 150 μL 100 mm Tris (pH 7.5), the suspension was incubated for 10 minutes at 37°C and then boiled for 5 minutes. After centrifugation at 13,000×g for 2 minutes, the supernatant which contained the extracted bacterial DNA was used in the PCR assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตรวจ mecA ยีนโดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส: ดีเอ็นเอจากแบคทีเรียได้รับ โดยวิธีการ lysis เซลล์อย่างรวดเร็วตามที่อธิบายไว้โดย Unal et al (10) การ DNA สกัด 0.1 mL ของวัฒนธรรมการค้างคืนใน washarvested ซุป Mueller Hinton โดย centrifuging ซุปในหลอด microcentrifuge ที่ 16, 000 ซื้อ g 30 วินาที Precipitates ถูก resuspended ใน 50 μL lysostaphin (100 μg/mL ซิกมา) และจะถูก incubated ที่ 37 ° C 10 นาที ต่อการเพิ่ม 50 μL proteinase K (100 μg/mL ซิก Aldrich) และ incubated ในนาทีที่ 37 ° C และจากนั้น ต้ม 5 นาที μL 150 มม. 100 ตรี (pH 7.5), การระงับ หลังจาก centrifugation ที่ 13, 000 ซื้อ g 2 นาที supernatant ซึ่งประกอบด้วยดีเอ็นเอจากแบคทีเรียที่แยกใช้ในทดสอบ PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจหายีน Meca โดย Polymerase Chain Reaction: ดีเอ็นเอแบคทีเรียที่ได้รับโดยวิธีการสลายเซลล์อย่างรวดเร็วตามที่อธิบาย Unal et al, (10) สำหรับการสกัดดีเอ็นเอ 0.1 มิลลิลิตรวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของแบคทีเรียในน้ำซุป Mueller-Hinton washarvested โดยเหวี่ยงน้ำซุปในหลอดไมโครที่ 16,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 วินาที ตกตะกอนถูก resuspended ใน 50 ไมโครลิตร lysostaphin (100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร; ซิก) และพวกเขาได้บ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ต่อไปนี้นอกเหนือจาก 50 ไมโครลิตรโปร K (100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร; ซิกดิช) และ 150 ไมโครลิตร 100 มิลลิเมตร Tris (pH 7.5) การระงับถูกบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียสและต้มแล้วเป็นเวลา 5 นาที หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 13,000 ×กรัมเป็นเวลา 2 นาทีในสารละลายที่มีดีเอ็นเอที่สกัดจากแบคทีเรียที่ใช้ในการทดสอบ PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจสอบของ MECA ยีนโดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส : แบคทีเรียดีเอ็นเอได้โดยการสลายอย่างรวดเร็วเซลล์วิธีตามที่อธิบายไว้โดย Unal et al ( 10 ) การสกัดดีเอ็นเอ 0.1 มิลลิลิตรเป็นวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของแบคทีเรียในน้ำซุป washarvested มุลเลอร์ ฮินตัน ด้วยสารน้ำซุปในหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ที่ 16000 ×กรัมเป็นเวลา 30 วินาทีมีตะกอนถูก resuspended 50 μ L ไลโซ ตฟิน ( 100 μ g / ml ; Sigma ) และพวกเขาถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 10 นาที ต่อไปนี้เพิ่ม 50 μผมโปร K ( 100 μ g / ml ; ซิกม่า Aldrich ) และ 150 μ L 100 มม. ทริส ( pH 7.5 ) , ถูกระงับบ่มเป็นเวลา 10 นาที ที่ 37 ° C และก็ต้มประมาณ 5 นาที หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 13000 ×กรัมเป็นเวลา 2 นาทีและน่าน ซึ่งมีแบคทีเรียสกัดดีเอ็นเอถูกใช้ในการตรวจวิเคราะห์
.