9. Estimate the density and viabili

9. Estimate the density and viability of protoplasts using a haemocytometer by staining the protoplasts with fluorescein
diacetate (FDA). Add some amount of the stock solution of FDA to the protoplast medium to obtain the final concentration
of 0.01% (w/v).
10. Incubate protoplasts with FDA for 30 min, then view the protoplasts under confocal laser scanning microscope (CLSM)
with 10Â objective. Set the excitation wavelength of the argon ion laser to 488 nm, and the dual regions of detection
between 505–530 nm and 650–730 nm. Viable protoplasts exhibited green fluorescence, accompanied with red
autofluorescence of chloroplasts Fig. 1. Count the total number of protoplasts within the red fluorescence field. Observe
10 different views for calculating the average viability.
11. Calculate the viability by dividing the total number of protoplasts by that of viable protoplasts. Perform three times
independent calculation, and record the average value as the protoplast yield.The microscopic pictures of protoplasts are
shown in Fig. 1.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

9. ประเมินความหนาแน่นและชีวิตของโปที่ใช้แบบ haemocytometer ย้อมสีโปกับ fluorescein diacetate (FDA) เพิ่มจำนวนบางโซลูชันหุ้นของ FDA protoplast สื่อเพื่อให้ได้ความเข้มข้น final 0.01% (w/v)10. ฟักโปกับ FDA 30 นาที แล้วดูโปภายใต้เลเซอร์ confocal สแกนกล้องจุลทรรศน์ (CLSM) มีวัตถุประสงค์ 10Â ตั้งค่าความยาวคลื่นในการกระตุ้นของเลเซอร์ไอออนอาร์กอน 488 nm และภาคสองของการตรวจสอบ 505-530 nm และ 730 คะแนน-650 nm โปได้จัดแสดง fluorescence สีเขียว มีสีแดง autofluorescence ของ chloroplasts Fig. 1 นับจำนวนของโปใน field fluorescence สีแดง สังเกต 10 มุมมองต่าง ๆ สำหรับการคำนวณนี้เฉลี่ย11. ชีวิตที่คำนวณ โดยการหารจำนวนโปโดยที่ได้โป ทำสามครั้ง คำนวณเป็นอิสระ และบันทึกค่าเฉลี่ยเป็นจาก protoplast ผลตอบแทนมีรูปภาพด้วยกล้องจุลทรรศน์ของโป แสดงใน Fig. 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

9. ประมาณการความหนาแน่นและมีศักยภาพในการเพาะเลี้ยงโดยใช้สไลด์นับเม็ดเลือดโดยการย้อมสี protoplasts กับชั้น uorescein
diacetate (FDA) เพิ่มปริมาณของบางแก้ปัญหาสต็อกขององค์การอาหารและยาไปยังสื่อที่จะได้รับโปรโตพลาเข้มข้น NAL ในสาย
0.01% (w / v).
10 ฟัก protoplasts กับองค์การอาหารและยาเป็นเวลา 30 นาทีแล้วดู protoplasts ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ confocal เลเซอร์สแกน (CLSM)
กับ 10A วัตถุประสงค์ ตั้งค่าความยาวคลื่นกระตุ้นของไอออนอาร์กอนเลเซอร์ 488 นาโนเมตรและมีพื้นที่ที่สองของการตรวจสอบ
ระหว่าง 505-530 นาโนเมตรและ 650-730 นาโนเมตร protoplasts ทำงานได้แสดง uorescence ชั้นสีเขียว, สีแดงพร้อมกับ
รถยนต์ชั้น uorescence ของคลอโรพลารูป 1. นับจำนวนรวมของ protoplasts ภายใน uorescence ชั้นสีแดงไฟไหม้ไฟ สังเกต
10 มุมมองที่แตกต่างกันสำหรับการคำนวณมีชีวิตเฉลี่ย.
11 คำนวณการมีชีวิตโดยการหารจำนวนรวมของ protoplasts โดยที่ protoplasts ทำงานได้ ดำเนินการสามครั้ง
การคำนวณอิสระและบันทึกค่าเฉลี่ยเป็นโปรโตพลา yield.The ภาพกล้องจุลทรรศน์ protoplasts จะ
แสดงในรูป 1

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

9 . การประเมินความหนาแน่นและความมีชีวิตของเอนไซม์ที่ใช้ haemocytometer โดยการย้อมเซลล์ด้วยfl uorescein
ได ซิเตท ( FDA ) เพิ่มปริมาณหุ้นโซลูชั่นของ FDA เพื่อจำนวนเพื่อให้ได้ความเข้มข้นปานกลางจึงนาล
0.01 % ( w / v )
10 บ่มเอนไซม์กับ FDA สำหรับ 30 นาทีแล้วดูว่าเซลล์ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ด้วยเลเซอร์ ( clsm )
กับ 10 Âวัตถุประสงค์ ตั้งค่าและความยาวคลื่นของเลเซอร์อาร์กอนไอออนเพื่อ nm 488 และภูมิภาค ด้วยการตรวจจับ
ระหว่าง 505 – 530 nm 650 – 730 นาโนเมตร ได้พบว่า uorescence flสีเขียว พร้อม uorescence อัตโนมัติflแดง
ของคลอโรพลาสต์รูปที่ 1 การนับจำนวนเซลล์ภายในสีแดงfl uorescence จึงละมั่ง . สังเกต
10 มุมมองที่แตกต่างกันสำหรับการคำนวณความมีชีวิตเฉลี่ย .
11 คำนวณความอยู่รอดโดยการหารจำนวนโปรโตพลาสต์จากที่ได้พบ . ดำเนินการสามครั้ง
อิสระในการคำนวณและบันทึกค่าเฉลี่ยตามจำนวนผลผลิต รูปภาพกล้องจุลทรรศน์ของโปรโตพลาสต์จะแสดงในรูปที่ 1






.