Plasma membrane from the root and l

Plasma membrane from the root and leaf tissues of broc-coli plants was isolated as described previously. Equal pro-tein amounts (10 g per lane) were loaded for 12% sodiumdodecyl sulphate–polyacrylamide gel electrophoresis (SDS–PAGE)as described previously (Muries et al., 2011). The 42 N-terminalresidues of Arabidopsis PIP1;1 (Kammerloher et al., 1994) (dilu-tion 1:3000) (kindly provided by Schäffner) and an anti-peptideantibody raised against a 17-amino-acid C-terminal peptide of Ara-bidopsis PIP2;1, 2;2, 2;3 (Santoni et al., 2003) (dilution 1:2000) wereused. Goat anti-rabbit IgG, coupled to horseradish peroxidase, was used as the secondary antibody (1:20,000). A chemiluminescentsignal was developed using the West-Pico Super Signal substrate(Pierce, Rockford, IL). The immunoblots were performed on sam-ples from three independent experiments. The intensity of eachband was determined by a GS-800TMcalibrated densitometer (BioRad, Barcelona, Spain). Background correction was performed bysampling membrane regions without spots and averaging their sig-nal. The intensity of each band is the difference between the rawintensity of the protein of interest and the background. The scannedbands were normalised by calculating the ratio relative to the cor-responding Coomassie-stained bands, thus ensuring that differentintensities were not due to differences in the amount of proteinloaded.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พลาสมาเมมเบรนจากเนื้อเยื่อใบและรากของพืชผัก-coli ที่แยกตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ยอดเงินนี้ pro เท่า (10 กรัมต่อเลน) ถูกโหลดสำหรับ sodiumdodecyl 12% ซัลเฟต – polyacrylamide เจ electrophoresis (SDS – หน้า) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Muries et al., 2011) N-terminalresidues 42 ของ Arabidopsis PIP1; 1 (Kammerloher et al., 1994) (สเตรชันแรมดีลู 1:3000) (กรุณาระบุ โดย Schäffner) และการต่อต้าน-peptideantibody ขึ้นกับเพปไทด์ส่งสถานี C 17-อะมิโนกรดของ Ara bidopsis PIP2; 1, 2, 2, 2; 3 (Santoni et al., 2003) wereused (เจือจาง 1:2000) มีใช้ครีมป้องกันกระต่าย IgG ควบคู่กับ horseradish peroxidase เป็นแอนติบอดีรอง (1:20, 000) Chemiluminescentsignal ถูกพัฒนาโดยใช้พื้นผิวสัญญาณซุปเปอร์เวสต์ Pico (เพียร์ซ ร็อคฟอร์ด IL) Immunoblots ได้ดำเนินการในสาม-ples จากการทดลองอิสระ 3 ความเข้มของ eachband ที่ถูกกำหนด โดย densitometer GS 800TMcalibrated (BioRad บาร์เซโลนา สเปน) การแก้ไขพื้นหลังเป็นภูมิภาคเมมเบรน bysampling ดำเนินการ โดยไม่มีจุดและหาค่าเฉลี่ยของ sig nal ความเข้มของแต่ละวงมีความแตกต่างระหว่าง rawintensity ของโปรตีนที่น่าสนใจและพื้น Scannedbands ถูก normalised โดยคำนวณอัตราส่วนสัมพันธ์กับตัวประกอบ ตอบสนองสี Coomassie วง จึง มั่นใจว่า differentintensities ไม่ได้เนื่องจากความแตกต่างจำนวน proteinloaded

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เมมเบรนพลาสม่าจากรากและเนื้อเยื่อใบของพืช Broc-coli ที่แยกได้ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ จำนวนเงินเท่ากับโปรเทียน (10 กรัมต่อเลน) ถูกโหลด 12% ข่าวคราวซัลเฟต polyacrylamide sodiumdodecyl (SDS-PAGE) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Muries et al., 2011) 42 N-terminalresidues ของ PIP1 Arabidopsis 1 (dilu-การ 1: 3000) (ให้ความกรุณาโดย Schaffner) และต่อต้าน peptideantibody ขึ้นกับ 17 กรดอะมิโนเปปไทด์ C-ขั้ว (Kammerloher et al, 1994). Ara-bidopsis PIP2; 1, 2 2 2 3 (เจือจาง 1: 2000) (Santoni et al, 2003). wereused แพะ IgG ต่อต้านกระต่ายคู่กับ peroxidase พืชชนิดหนึ่งที่ถูกนำมาใช้เป็นแอนติบอดี้ที่สอง (1: 20,000) chemiluminescentsignal ได้รับการพัฒนาโดยใช้สารตั้งต้นที่เวสต์ปิโกซูเปอร์สัญญาณ (เพียร์ซ, ฟอร์ด, IL) immunoblots ได้ดำเนินการใน sam-Ples จากสามทดลองที่เป็นอิสระ ความเข้มของ eachband ถูกกำหนดโดย GS-800TMcalibrated densitometer (BioRad, บาร์เซโลนา, สเปน) แก้ไขประวัติความเป็นมาที่ได้ดำเนินการ bysampling ภูมิภาคเมมเบรนโดยไม่ต้องจุดและค่าเฉลี่ย sig-NAL ของพวกเขา ความรุนแรงของแต่ละกลุ่มแตกต่างระหว่าง rawintensity ที่ของโปรตีนที่น่าสนใจและพื้นหลัง scannedbands ถูกปกติโดยการคำนวณอัตราส่วนเทียบกับครตอบสนองวงดนตรี Coomassie เปื้อนจึงมั่นใจได้ว่า differentintensities ไม่ได้เนื่องจากความแตกต่างในจำนวน proteinloaded

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พลาสมาเมมเบรนจากรากและใบของพืชที่แยกได้จากเนื้อเยื่อ broc ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ยอดโปรเตียนเท่ากับ ( 10  กรัมต่อ เลน ) เป็น 12 % โหลด sodiumdodecyl ซัลเฟต ( SDS - polyacrylamide gel electrophoresis ( หน้า ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( muries et al . , 2011 ) 42 n-terminalresidues ของ Arabidopsis pip1 ; 1 ( kammerloher et al . , 1994 ) ( dilu tion 13000 ) ( กรุณาให้ขอราคาและ ffner ) และการต่อต้าน peptideantibody ยกกับกรดอะมิโนเปปไทด์ของ Ara 17 ซึ่ง bidopsis pip2 1 2 2 2 3 ( Santoni et al . , 2003 ) ( เจือจาง 1:2000 ) โดย . กลุ่มต่อต้าน กระต่าย แพะ คู่กับ horseradish peroxidase แอนติบอดีที่ใช้รอง ( 1:20000 ) เป็น chemiluminescentsignal ถูกพัฒนาขึ้นโดยใช้ West Pico Super สัญญาณพื้นผิว ( เพียซร็อกฟอร์ด , อิลลินอยส์ ) การ immunoblots จำนวน ples สามจากสามการทดลองที่เป็นอิสระ ความเข้มของ eachband ถูกกำหนดโดย gs-800tmcalibrated เครื่อง ( biorad , บาร์เซโลนา , สเปน ) แก้ไขพื้นหลังแสดง bysampling เยื่อภูมิภาคโดยไม่ต้องจุด และเฉลี่ยของซิกนัล .ความเข้มของแต่ละวง คือ ความแตกต่างระหว่าง rawintensity ของโปรตีนที่น่าสนใจและพื้นหลัง การ scannedbands ถูกบันทึกโดยการคำนวณอัตราส่วนเมื่อเทียบกับสินค้าเหล่านี้น่าจะเป็นการเปรอะเปื้อนวง จึงมั่นใจได้ว่า differentintensities ไม่ได้เนื่องจากความแตกต่างในจํานวน proteinloaded .