2. Materials and methods2.1. Constr

2. Materials and methods
2.1. Constructs for E. coli transformation
The coding sequence of tomato BHY1 (Ronen et al., 2000) was
cloned between the HindIII and XbaI sites of the plasmid pUC19.
Similarly, the BHY coding sequences from C. zofingiensis, H. pluvialis,
Pantoea ananatis, and Arabidopsis were cloned between the same sites
of pUC19. For co-expression of CrBKT with different BHYs in E. coli,
polycistronic plasmids were constructed by adding a Shine–Dalgarno
(SD) sequence (AGGAGGACAGCC) upstream of the first ATG of CrBKT
(Zhong et al., 2011) which was then inserted between the XbaI and
SacI sites of the BHY-harboring PUC19 plasmids resulting in polycistronic
plasmids. E. coli JM109 carrying pACCAR16ΔcrtX was used as
the host for functional analysis of the cooperation of CrBKT with
various BHYs and tomato BHY1, respectively.
2.2. Constructs for plant transformation
pBI-SlTpCrBKT was derived from pBI121-CRBKT (Zhong et al.,
2011) by replacing the transit peptide sequence of Arabidopsis
RBCS with tomato one (GenBank No. M15236) using PCR-based
cloning techniques. The CrBKT of pBI-SlTpCrBKT was replaced by
HpBHY coding sequence (GenBank No. BD250390) to create pBISlTpHpBHY.
The CaMV35S::SlTpHpBHY::nos cassette was amplified
and inserted in the pBI121-SlTpCRBKT at the ClaI site resulting in
pBI-SlTpHpBHY-SlTpCrBKT.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. โครงสร้างสำหรับการเปลี่ยนแปลงของ E. coliเป็นรหัสลำดับของมะเขือเทศ BHY1 (Ronen และ al., 2000)โคลนระหว่าง HindIII และ XbaI อเมริกา plasmid pUC19ในทำนองเดียวกัน กำหนด BHY ลำดับจาก C. zofingiensis, H. pluvialisPantoea ananatis และ Arabidopsis ถูกโคลนระหว่างไซต์เดียวกันของ pUC19 สำหรับนิพจน์ร่วมของ CrBKT กับ BHYs แตกต่างกันใน E. colipolycistronic plasmids ถูกสร้าง โดยการเพิ่มขัด – Dalgarno(SD) ลำดับ (AGGAGGACAGCC) ต้นน้ำของ ATG แรก CrBKT(จงร้อยเอ็ด al., 2011) ซึ่งถูกแทรกแล้วระหว่าง XbaI และSacI ไซต์ของ plasmids BHY harboring PUC19 ใน polycistronicplasmids PACCAR16ΔcrtX E. coli JM109 กำลังถูกใช้เป็นโฮสต์สำหรับการทำงานวิเคราะห์ของ CrBKT ด้วยBHYs ต่าง ๆ และมะเขือเทศ BHY1 ตามลำดับ2.2. โครงสร้างสำหรับการแปลงพืชpBI SlTpCrBKT รับมาจาก pBI121-CRBKT (จง et al.,2011) โดยการเปลี่ยนลำดับของเพปไทด์ส่งต่อของ ArabidopsisRBCS กับมะเขือเทศหนึ่ง (หมายเลข GenBank M15236) โดยใช้ผลโคลนเทคนิค CrBKT ของ pBI SlTpCrBKT ถูกแทนที่ด้วยHpBHY รหัสลำดับ (เลข GenBank BD250390) เพื่อสร้าง pBISlTpHpBHYเทป CaMV35S::SlTpHpBHY::nos ถูกขยายและแทรกใน SlTpCRBKT pBI121 ที่เว็บไซต์ ClaI ในpBI-SlTpHpBHY-SlTpCrBKT

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 สร้างการเปลี่ยนแปลงสำหรับอีโคไล
ลำดับการเข้ารหัสของ BHY1 มะเขือเทศ (Ronen et al., 2000) ได้รับการ
โคลนระหว่าง HindIII และเว็บไซต์ XbaI ของพลาสมิด pUC19.
ในทำนองเดียวกัน BHY เข้ารหัสลำดับจาก zofingiensis ซีเอช pluvialis,
Pantoea ananatis และ Arabidopsis ถูกโคลนระหว่างเว็บไซต์เดียวกัน
ของ pUC19 เพื่อร่วมแสดงออกของ CrBKT กับ BHYs แตกต่างกันในเชื้อ E. coli,
พลาสมิด polycistronic ถูกสร้างขึ้นโดยการเพิ่ม Shine-Dalgarno
(SD) ลำดับ (AGGAGGACAGCC) ต้นน้ำของ ATG แรกของ CrBKT
(Zhong et al., 2011) ซึ่งได้รับการแทรกแล้ว ระหว่าง XbaI และ
เว็บไซต์ของ SACI BHY-เก็บงำพลาสมิด PUC19 ผลใน polycistronic
พลาสมิด E. coli JM109 แบกpACCAR16ΔcrtXถูกใช้เป็น
เจ้าภาพการวิเคราะห์การทำงานของความร่วมมือของ CrBKT กับ
BHYs ต่างๆและ BHY1 มะเขือเทศตามลำดับ.
2.2 สำหรับการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างของพืช
pBI-SlTpCrBKT ได้มาจาก pBI121-CRBKT (Zhong et al.,
2011) โดยการเปลี่ยนลำดับการขนส่งของเปปไทด์ Arabidopsis
RBCs กับมะเขือเทศ (GenBank ฉบับที่ M15236) โดยใช้วิธี PCR ที่ใช้
เทคนิคการโคลนนิ่ง CrBKT ของ pBI-SlTpCrBKT ถูกแทนที่โดย
ลำดับการเข้ารหัส HpBHY (GenBank หมายเลข BD250390) เพื่อสร้าง pBISlTpHpBHY.
CaMV 35S ต่อ SlTpHpBHY :: :: เทป Nos ถูกขยาย
และแทรกอยู่ใน pBI121-SlTpCRBKT ที่เว็บไซต์ CLAI ผลใน
pBI-SlTpHpBHY- SlTpCrBKT

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างใน E . coli
รหัสลำดับของ bhy1 มะเขือเทศ ( Ronen et al . , 2000 )
- xbai โคลนระหว่างและเว็บไซต์ของ puc19 พลาส .
ส่วน bhy เขียนลำดับจาก zofingiensis , H . สีเขียว
pantoea , ananatis และ Arabidopsis ถูกโคลนระหว่างเว็บไซต์เดียวกัน
ของ puc19 . การแสดงออกของ crbkt CO กับ bhys ที่แตกต่างกันใน(
polycistronic ) ถูกสร้างขึ้นโดยการเพิ่มเงา–แดลการ์โน่
( SD ) ลำดับ ( aggaggacagcc ) upstream ของ ATG แรกของ crbkt
( Zhong et al . , 2011 ) ซึ่งถูกแทรกระหว่าง xbai
ซาซิและเว็บไซต์ของ bhy harboring puc19 พลาสที่เกิดใน polycistronic
พลาส . E . coli ที่มีแบก paccar16 Δ CRTX ใช้
โฮสต์สำหรับการวิเคราะห์การทำงานของความร่วมมือของ crbkt ด้วย
bhys ต่างๆและ bhy1 มะเขือเทศ ตามลำดับ
2.2 . โครงสร้างสำหรับการเปลี่ยนแปลง
พืช pbi sltpcrbkt ได้มาจาก pbi121 crbkt ( Zhong et al . ,
2011 ) โดยการเปลี่ยนลำดับของการขนส่งเปปไทด์ Arabidopsis
rbcs กับมะเขือเทศหนึ่ง ( ขนาดไม่ m15236 ) โดยใช้เทคนิค PCR
โคลนจาก การ crbkt ของ pbi sltpcrbkt
แทนลำดับรหัส hpbhy ( ขนาดไม่ bd250390 ) เพื่อสร้าง pbisltphpbhy .
: : : : camv35s sltphpbhy NOS เทปถูกขยาย
และแทรกอยู่ใน pbi121 sltpcrbkt ที่ clai เว็บไซต์ส่งผล
pbi sltphpbhy sltpcrbkt .