To investigate the relative sensiti

To investigate the relative sensitivity, linearity, and signal stability of three different luminescent cytotoxicity assays, Jurkat cells were suspended in fresh RPMI 1640 with 10% FBS at a density of 100,000 cells/ml. The pool was divided into two equal fractions. One fraction was treated by mild sonication to cause cytotoxicity (impaired membrane integrity). Cell membrane damage was initiated using a Branson Microtip Sonifier (Model 450) using a 30% duty cycle for 20 pulses at a microtip limit of 4 (of 10). After treatment, less than 5% of the cells remained unstained and viable by trypan blue exclusion and microscopic examination. The other fraction was left untreated to represent the experimental contribution of normal viable cells. The two pools were subsequently blended in various proportions to represent viabilities from 100–0% (conversely, cytotoxicities from 0–100%). Each sample blend was added to plates in replicate 100μl volumes (10,000 cell equivalents/well). Toxi-Light® BioAssay Kit, aCella-Tox™, and CytoTox-Glo™ Cytotoxicity Assay reagents were prepared and added as directed by supporting technical literature from the manufacturers. After 30 seconds of mixing at 500 RPM on an orbital shaker (Ika-Schüttler MTS-4 S2, Wilmingon, NC), the plates were incubated at 23°C in a Me’Cour (Waltham, MA, U.S.A) water-jacketed plate incubator and luminescence measured using a BMG Labtech FluoStar™ (Offenburg, Germany) 15 and 60 minutes after the reagents were added.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สัมพันธ์ไว แบบดอกไม้ และสัญญาณเสถียร assays cytotoxicity luminescent แตกต่างกันสาม เซลล์ Jurkat ได้ชั่วคราวในสด RPMI 1640 10% FBS ที่ความหนาแน่นของ 100000 เซลล์/ml สระว่ายน้ำถูกแบ่งออกเป็นสองส่วนเท่ากัน เศษส่วนหนึ่งได้รับการรักษา โดย sonication อ่อนทำ cytotoxicity (เมมเบรนความสมบูรณ์) ความเสียหายของเซลล์เมมเบรนถูกเริ่มใช้ที่แบรนสัน Microtip Sonifier (รุ่น 450) ใช้กับวงจรภาษี 30% กะพริบ 20 ที่จำนวน microtip 4 (จาก 10) หลังการรักษา น้อยกว่า 5% ของเซลล์ที่ยังคงทำงานได้ โดยแยก trypan blue และตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ และ unstained ส่วนอื่น ๆ ที่เหลือไม่ถูกรักษาเพื่อแสดงผลทดลองของเซลล์ทำงานปกติ สองสระว่ายน้ำได้มาผสมในสัดส่วนต่าง ๆ ถึง viabilities จาก 100 – 0% (ในทางกลับกัน cytotoxicities จาก 0 – 100%) ผสมแต่ละอย่างถูกเพิ่มลงในไดรฟ์ข้อมูลการ replicate 100μl (เทียบเท่า 10000 เซลล์ดี) แผ่น ชุดไฟ Toxi ® BioAssay, aCella - Tox ™ และ reagents CytoTox Glo ™ Cytotoxicity วิเคราะห์ถูกเตรียม และเพิ่ม โดยสนับสนุนวรรณกรรมจากผู้ผลิต หลังจาก 30 วินาทีของผสมที่ 500 RPM ในเชคเกอร์การโคจร (S2 Ika-Schüttler MTS-4, Wilmingon, NC), แผ่นถูก incubated ที่ 23° C ใน incubator แผ่น water-jacketed Me'Cour (Waltham, MA, U.S.A) และวัดโดยใช้™ BMG Labtech FluoStar (Offenburg เยอรมนี) 15 luminescence และ 60 นาทีหลังจาก reagents เพิ่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อตรวจสอบความไวญาติเชิงเส้นและสัญญาณเสถียรภาพของสามการตรวจพิษเรืองแสงที่แตกต่างกันเซลล์ Jurkat ถูกระงับใน RPMI สด FBS 1640 กับ 10% ที่อัตราความหนาแน่น 100,000 เซลล์ / มิลลิลิตร สระว่ายน้ำแบ่งออกเป็นสองเศษส่วนที่เท่ากัน ส่วนหนึ่งได้รับการรักษาโดย sonication อ่อนที่จะทำให้เกิดความเป็นพิษ (เมมเบรนที่มีความบกพร่องสมบูรณ์) ความเสียหายของเยื่อหุ้มเซลล์ได้ริเริ่มขึ้นโดยใช้แบรนสัน Microtip Sonifier (รุ่น 450) โดยใช้รอบการทำงาน 30% เป็นเวลา 20 พัลส์ที่ จำกัด microtip 4 (10) หลังจากการรักษาน้อยกว่า 5% ของเซลล์ยังคงไม่มีรอยเปื้อนและทำงานโดยการยกเว้นสีฟ้า Trypan และตรวจด้วยกล้องจุลทรรศน์ ส่วนอื่น ๆ ที่ได้รับการรักษาที่ถูกทิ้งให้เป็นตัวแทนของผลงานการทดลองของเซลล์ทำงานได้ตามปกติ สระว่ายน้ำทั้งสองได้รับการผสมต่อมาในสัดส่วนที่แตกต่างกันเพื่อเป็นตัวแทนของ viabilities 100-0% (ตรงกันข้าม cytotoxicities 0-100%) ผสมผสานแต่ละตัวอย่างถูกบันทึกอยู่ในแผ่นซ้ำในปริมาณ100μl (เทียบเท่า 10,000 เซลล์ / กัน) Toxi-Light®ชีวภาพชุด Acella-Tox ™และ CytoTox-Glo ™ Cytotoxicity น้ำยา Assay ได้จัดทำและเสริมเป็นผู้กำกับโดยการสนับสนุนทางเทคนิควรรณกรรมจากผู้ผลิต หลังจาก 30 วินาทีของการผสมที่ 500 รอบต่อนาทีบนเครื่องปั่นโคจร (Ika-Schüttlerเอ็มทีเอ S2-4, Wilmingon, NC) แผ่นที่ถูกบ่มที่ 23 องศาเซลเซียสใน Me'Cour (เคมบริดจ์สหรัฐอเมริกา) แผ่นน้ำเสื้อ ศูนย์บ่มเพาะและเรืองแสงวัดโดยใช้ BMG Labtech FluoStar ™ (Offenburg, เยอรมนี) 15 และ 60 นาทีหลังจากที่สารเคมีที่ถูกเพิ่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ เป็นเส้นตรง และเสถียรภาพของสัญญาณของทั้งสามต่างเรืองแสงหรือ jurkat เซลล์ , เซลล์ RPMI 1640 หยุดชั่วคราวในสดชื่นกับ FBS 10% ในอัตราความหนาแน่น 100000 เซลล์ / มล. สระว่ายน้ำแบ่งเป็นสองเท่าเศษส่วน หนึ่งส่วนรักษาอ่อน sonication ก่อให้เกิดเซลล์ ( membrane ความบกพร่อง )ทำลายเยื่อหุ้มเซลล์ เป็นโครงการที่ใช้ microtip sonifier แบรนสัน ( รุ่น 450 ) ใช้รอบหน้าที่ 30 % 20 กะพริบที่ microtip วงเงิน 4 ( 10 ) หลังจากการรักษาน้อยกว่า 5% ของเซลล์ยังคงไม่มีรอยเปื้อนและทำงานได้โดยไตรแพนสีฟ้ายกเว้นกล้องจุลทรรศน์ . ส่วนอื่นก็ไม่ถูกรักษาซ้ายเพื่อแสดงผลงานการทดลองเซลล์ทำงานได้ปกติประเภทสอง จัดการผสมในสัดส่วนต่างๆ เพื่อแสดง viabilities จาก 100 - 0 % ( ในทางกลับกัน cytotoxicities จาก 0 - 100 % ) แต่ละตัวอย่างผสมเติมแผ่นทำซ้ำ 100 μ L ) ( 10 , 000 เซลล์เทียบเท่า / ดี ) toxi แสง®ไม่ acella ™ทอกซ์ , ชุดcytotox Glo ™พิษสารเคมีและวิธีเตรียมและเพิ่มเป็นกำกับโดยสนับสนุนวรรณกรรมทางเทคนิคจากผู้ผลิต หลังจาก 30 วินาทีของการผสม 500 รอบต่อนาที ในเครื่องปั่นโคจร ( Ika Sch ü ttler mts-4 S2 wilmingon , NC ) , แผ่นอุณหภูมิ 23 ° C ใน me'cour ( วอลแทม , MA , สหรัฐอเมริกา) น้ำ Jacketed จานฟักไข่และเรืองแสงวัดใช้ BMG labtech fluostar ™ ( Offenburg , Germany ) 15 นาทีและ 60 นาทีหลังจากสารเคมีถูกเพิ่ม