2.5. Enzyme assaysRandomly selected

2.5. Enzyme assays
Randomly selected potato slices were collected at 0, 3, 6, 9, 12 days after fresh cut and frozen immediately by liquid nitrogen. The samples were then grinded with liquid nitrogen into frozen powder by an analytic mill (IKA A11 basic; IKA Werke GmbH & Co. KG, Staufen, Germany), and stored at −80 °C until used. PPO activity was analysed based on the method described by Galeazzi, Sgarbieri, and Constantinides (1981). One g of frozen powder was homogenized with 4 mL of phosphate buffer (pH 7.0) and 0.1 g insoluble polyvinylpolypyrrolidone (PVPP), centrifuged at 10,000×g for 15 min at 4 °C, and the supernatant was used for analysis. The reactive mixture consisted of 0.1 ml of enzyme extracts, 2 ml of 200 mM phosphate buffer (pH 6.8) and 0.5 mL of 20 mM catechol solution. Enzyme activity was measured by the increase in absorbance at 410 nm. One unit of enzyme activity was defined as the increase in absorbance of 0.01 per min under assay conditions. PPO activity was expressed as unit of activity per mg protein per h. Protein content was measure as described by ( Bradford, 1976) from the same extraction buffer at pH 7.0.

PAL activity was measured as previously described by Martinez-Tellez and Lafuente (1997), with slight modifications. 1 g frozen powder described as above PPO assay was homogenized with 4 mL of 50 mM borate buffer (pH 8.5), centrifuged at 10,000×g for 15 min at 4 °C. 2 ml buffer (pH 8.5) and 1 ml of 20 mM l-phenylalanine was added to two individual tubes, 0.3 ml of enzyme solution (from supernatant) was added to one of the tubes and 0.3 ml water was added to the other tube. Absorbance at 290 nm was measured twice (before and after reaction tubes were incubated at 40 °C for 1 h). One unit of PAL activity was defined as the amount of enzyme produced as an increase of 0.01 absorbance units in 1 h. PAL activity was expressed as unit of activity per mg protein per h.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5. เอนไซม์ assaysสุ่มเลือกมันฝรั่งชิ้นถูกเก็บรวบรวมที่ 0, 3, 6, 9, 12 วันหลังสดตัด และแช่แข็ง ด้วยไนโตรเจนเหลวทันที ตัวอย่างได้แล้วบด ด้วยไนโตรเจนเหลวในผงแช่แข็งโดยมีโรงงานวิเคราะห์ (IKA A11 พื้นฐาน IKA Werke GmbH & Co. KG, Staufen เยอรมนี), และเก็บไว้ที่ −80 ° C จนกว่าจะใช้ กิจกรรม PPO ถูกนำมาวิเคราะห์ตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย Galeazzi, Sgarbieri และ Constantinides (1981) หนึ่งกรัมของผงแช่แข็งถูก homogenized กับ 4 mL ของฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ 0.1 กรัมละลาย polyvinylpolypyrrolidone (PVPP), ผลิตภัณฑ์ที่ 10, 000 × g สำหรับ 15 นาทีที่อุณหภูมิ 4 ° C และ supernatant ที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ ส่วนผสมปฏิกิริยาประกอบด้วยสารสกัดจากเอนไซม์ 0.1 ml, 2 มล. 200 มม.ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) และ 0.5 mL ของโซลูชัน catechol 20 มม. เอนไซม์โดยวัดจากการเพิ่มขึ้นของค่าที่ 410 nm หน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นค่าของ 0.01 ต่อนาทีภายใต้สภาวะการทดสอบที่เพิ่มขึ้น PPO กิจกรรมได้แสดงออกเป็นกิจกรรมต่อมิลลิกรัมโปรตีนต่อ h. ปริมาณโปรตีนหน่วย วัดตามที่อธิบายไว้ โดย (แบรดฟอร์ด 1976) จากเดิมแยกบัฟเฟอร์ที่ pH 7.0กิจกรรม PAL โดยวัดตามที่เคย อธิบายไว้ โดยมาร์ติเน Tellez และ Lafuente (1997), การแก้ไขเล็กน้อย 1 กรัมแช่แข็งผงอธิบายไว้ ตามด้านบน PPO ทดสอบถูก homogenized กับ 4 mL 50 มม. borate บัฟเฟอร์ (pH 8.5), ผลิตภัณฑ์ที่ 10, 000 × g 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส 2 ml บัฟเฟอร์ (pH 8.5) 1 มล.ของ 20 มม. l-phenylalanine ถูกหลอดละสอง 0.3 ml ของสารละลายเอนไซม์ (จาก supernatant) ถูกเพิ่มลงในท่อ และหลอดอื่น ๆ ถูกน้ำ 0.3 มิลลิลิตร ค่าที่ 290 nm โดยวัดสองครั้ง (ก่อน และ หลังปฏิกิริยาหลอดได้รับการกกที่ 40 ° C สำหรับ 1 h) หนึ่งหน่วยกิจกรรม PAL ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิตเพิ่มขึ้น 0.01 ค่าหน่วยกิจกรรม PAL 1 h. ถูกแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อมิลลิกรัมโปรตีนต่อชม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 เอนไซม์
สุ่มเลือกชิ้นมันฝรั่งถูกเก็บที่ 0, 3, 6, 9, 12 วันหลังจากตัดสดและแช่แข็งทันทีโดยไนโตรเจนเหลว ตัวอย่างถูกบดแล้วด้วยไนโตรเจนเหลวเป็นผงแช่แข็งจากโรงงานวิเคราะห์ (IKA A11 พื้นฐาน IKA Werke GmbH & Co. KG, Staufen, เยอรมนี) และเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนใช้ กิจกรรม PPO วิเคราะห์ตามวิธีการอธิบายโดย Galeazzi, Sgarbieri และ Constantinides (1981) หนึ่งกรัมผงแช่แข็งทำให้เป็นเนื้อเดียวกันมี 4 มลฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) และ 0.1 กรัม polyvinylpolypyrrolidone ที่ไม่ละลายน้ำ (PVPP) หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสและสารละลายที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ ส่วนผสมประกอบด้วยปฏิกิริยา 0.1 มล. ของสารสกัดจากเอนไซม์ 2 มิลลิลิตร 200 มิลลิฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 6.8) และ 0.5 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหา catechol 20 มิลลิเมตร กิจกรรมของเอนไซม์โดยวัดจากการเพิ่มขึ้นของการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกกำหนดเป็นเพิ่มขึ้นในการดูดกลืนแสงของต่อนาที 0.01 ภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรม PPO ถูกแสดงออกมาเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อโปรตีนมิลลิกรัมต่อชั่วโมง ปริมาณโปรตีนเป็นตัวชี้วัดตามที่อธิบาย (แบรด, 1976) จากบัฟเฟอร์สกัดเดียวกันที่ pH 7.0

กิจกรรม PAL วัดตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้โดยมาร์ติเน Tellez และ Lafuente (1997) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย 1 กรัมผงแช่แข็งที่อธิบายไว้ข้างต้น PPO ทดสอบทำให้เป็นเนื้อเดียวกันมี 4 มิลลิลิตรขนาด 50 มม borate บัฟเฟอร์ (pH 8.5) หมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส 2 มิลลิลิตรบัฟเฟอร์ (pH 8.5) และ 1 มิลลิลิตร 20 มิลลิเมตร L-phenylalanine ถูกบันทึกอยู่ในสองหลอดแต่ละ 0.3 มล. ของการแก้ปัญหาการทำงานของเอนไซม์ (จากใส) ถูกบันทึกอยู่ในหนึ่งของหลอดและ 0.3 มล. น้ำถูกเพิ่มเข้าไปในท่ออื่น ๆ การดูดกลืนแสงที่ 290 นาโนเมตรวัดสองครั้ง (ก่อนและหลังการเกิดปฏิกิริยาหลอดถูกบ่มที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง) หนึ่งหน่วยของกิจกรรม PAL ถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิตกับการเพิ่มขึ้นของหน่วยงานในการดูดกลืนแสง 0.01 1 ชั่วโมง กิจกรรม PAL ถูกแสดงออกมาเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อโปรตีนมิลลิกรัมต่อชั่วโมง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 ตรวจเอนไซม์สุ่มเลือกจำนวนชิ้นมันฝรั่งที่ 0 , 3 , 6 , 9 , 12 วัน หลังจากตัดสดและแช่แข็งทันทีด้วยไนโตรเจนเหลว จำนวนแล้วบดด้วยไนโตรเจนเหลวแช่แข็งโดยการบดผงในการวิเคราะห์ ( Ika Ika A11 พื้นฐาน werke GmbH & Co . KG , Staufen , เยอรมนี ) , และเก็บไว้ที่− 80 ° C จนใช้ กิจกรรมของเอนไซม์ PPO วิเคราะห์ตามวิธีที่อธิบายไว้โดย galeazzi sgarbieri , และ constantinides ( 1981 ) หนึ่งกรัมของผงบดแช่แข็ง 4 มิลลิลิตร ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) และ 0.1 กรัม ละลายน้ำ polyvinylpolypyrrolidone ( pvpp ) ที่ระดับ 10 , 000 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ° C และนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ ผสมสีจำนวน 0.1 มิลลิลิตรเอนไซม์สกัด 2 มิลลิลิตร 200 มิลลิเมตร ( ฟอสเฟตบัฟเฟอร์พีเอช 6.8 ) และ 0.5 มิลลิลิตรของสารละลายแคติคอล 20 มิล กิจกรรมของเอนไซม์ถูกวัดโดยการเพิ่มค่าการดูดกลืนแสงที่ 410 นาโนเมตร หนึ่งหน่วยของเอนไซม์ถูกนิยามในฐานะที่เป็นเพิ่มค่า 0.01 ต่อนาทีภายใต้เงื่อนไขการทดสอบ กิจกรรมของเอนไซม์ PPO จะแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อโปรตีนมิลลิกรัมต่อชั่วโมง โปรตีนคือวัดตามที่อธิบายไว้โดย ( แบรดฟอร์ด , 1976 ) จากเดิมใช้สารพีเอช 7.0 .กิจกรรมเพื่อนวัดก่อนหน้านี้เป็น อธิบาย โดย มาร์ติเนซ เทลเลส และ lafuente ( 1997 ) ที่มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย 1 กรัมผงตามที่อธิบายไว้ข้างต้นแช่แข็ง PPO assay เป็นโฮโมด้วย 4 ml 50 มม. บอเรตบัฟเฟอร์ pH 8.5 ) , ระดับที่ 10 × G สำหรับ 15 นาทีที่ 4 ° C 2 ml บัฟเฟอร์ pH 8.5 ) และ 1 มิลลิลิตรของฟีนิลอะลา 20 มิลลิเมตร เพิ่มไปสองหลอดละ 0.3 มิลลิลิตรของสารละลายเอนไซม์ ( จาก น่าน ) ก็เป็นหนึ่งในท่อและ 0.3 มล. เติมน้ำหลอดอื่น ๆ การดูดกลืนแสงที่ 290 nm วัดสองครั้ง ( ก่อนและหลังหลอดปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 40 องศา C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ) หน่วยหนึ่งของกิจกรรมเพื่อนถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่ผลิตเพิ่มขึ้น 0.01 หน่วยการดูดกลืนแสงใน 1 ชั่วโมง เพื่อน กิจกรรม จะแสดงเป็นหน่วยของกิจกรรมต่อโปรตีนมก. ต่อชม.