Alkaline LysisAlkaline lysis is the

Alkaline Lysis

Alkaline lysis is the method of choice for isolating circular plasmid DNA, or even RNA, from bacterial cells. It is probably one of the most generally useful techniques as is a fast, reliable and relatively clean way to obtain DNA from cells. If necessary, DNA from an alkaline lysis prep can be further purified.
Alkaline lysis depends on a unique property of plasmid DNA. It is able to rapidly anneal following denaturation. This is what allows the plasmid DNA to be separated from the bacterial chromosome.
Typically, you will grow up E coli cells that contain the plasmid you want to isolate, then you will lyse the cells with alkali and extract the plasmid DNA. The cell debris is precipitated using SDS and potassium acetate. This is spun down, and the pellet is removed. Isopropanol is then used to precipitate the DNA from the supernatant, the supernatant is removed, and the DNA is resuspended in buffer (often TE). A mini prep usually yields 5-10 ug. This can be scaled up to a midi prep or a maxi prep, which will yield much larger amounts of DNA (or RNA).
Specific protocols for alkaline lysis differ widely from lab to lab, and even from scientist to scientist. The basic principles behind the procedure, however, are fairly uniform. Here they are:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Lysis ด่างLysis ด่างเป็นวิธีการที่เลือกสำหรับการแยกวงกลม plasmid DNA หรืออาร์เอ็นเอคู่ จากเซลล์แบคทีเรีย มันอาจเป็นหนึ่งเทคนิคเป็นประโยชน์มากที่สุดโดยทั่วไปเป็นวิธีรวดเร็ว เชื่อถือได้ และค่อนข้างสะอาดรับดีเอ็นเอจากเซลล์ ถ้าจำเป็น ดีเอ็นเอจากเตรียมการ lysis ด่างสามารถจะเพิ่มเติมบริสุทธิ์Lysis ด่างขึ้นอยู่กับคุณสมบัติเฉพาะของ plasmid DNA จึงสามารถหลอมแบบต่อ denaturation อย่างรวดเร็ว อะไรให้ plasmid DNA แยกออกจากโครโมโซมแบคทีเรียได้โดยทั่วไป คุณจะเติบโตเซลล์ coli E ที่ประกอบด้วย plasmid ที่คุณต้องการแยก แล้วคุณจะ lyse เซลล์ ด้วยด่าง และสกัด plasmid DNA เศษเซลล์เป็นตะกอนใช้ SDS และโพแทสเซียม acetate นี้จะปั่นลง และเอาเม็ด Isopropanol แล้วใช้ดีเอ็นเอจาก supernatant precipitate, supernatant จะถูกลบออก และดีเอ็นเอเป็น resuspended ในบัฟเฟอร์ (มักติ) เตรียมขนาดเล็กมักจะทำให้ยูจี 5-10 นี้สามารถปรับค่าให้เตรียม midi หรือการเตรียมแม็กซี่ ซึ่งจะได้เงินมากใหญ่ดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอ)โพรโทคอเฉพาะสำหรับ lysis ด่างแตกต่างอย่างกว้างขวางจากห้องปฏิบัติการแล็บ และแม้นักวิทยาศาสตร์กับวิทยาศาสตร์ หลักการพื้นฐานเบื้องหลังขั้นตอน อย่างไรก็ตาม ได้ค่อนข้างสม่ำเสมอ ที่นี่พวกเขาจะ:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อัลคาไลน์สลายสลายอัลคาไลน์เป็นวิธีการของทางเลือกสำหรับการแยกดีเอ็นเอพลาสมิดวงกลมหรือแม้กระทั่งอาร์เอ็นเอจากเซลล์แบคทีเรีย มันอาจจะเป็นหนึ่งในเทคนิคที่มีประโยชน์มากที่สุดโดยทั่วไปเป็นเป็นวิธีที่รวดเร็วและเชื่อถือได้และค่อนข้างสะอาดที่จะได้รับดีเอ็นเอจากเซลล์ ถ้าจำเป็นดีเอ็นเอจากเตรียมสลายด่างสามารถบริสุทธิ์. สลายอัลคาไลน์ขึ้นอยู่กับสถานที่ให้บริการที่เป็นเอกลักษณ์ของพลาสมิดดีเอ็นเอ มันสามารถที่จะสูญเสียสภาพธรรมชาติอย่างรวดเร็วหลอมดังต่อไปนี้ นี่คือสิ่งที่จะช่วยให้พลาสมิดดีเอ็นเอที่จะแยกออกจากโครโมโซมแบคทีเรีย. โดยปกติแล้วคุณจะเติบโตขึ้น E coli เซลล์ที่มีพลาสมิดที่คุณต้องการที่จะแยกแล้วคุณจะ lyse เซลล์ที่มีอัลคาไลและสารสกัดจากพลาสมิดดีเอ็นเอ เศษเซลล์ตกตะกอนใช้ SDS และ acetate โพแทสเซียม นี้จะปั่นลงและเม็ดจะถูกลบออก isopropanol ที่ใช้แล้วเพื่อตกตะกอนดีเอ็นเอจากสารละลายที่ใสจะถูกลบออกและดีเอ็นเอจะ resuspended ในบัฟเฟอร์ (มัก TE) เตรียมมินิมักจะมีอัตราผลตอบแทน 5-10 ไมโครกรัม นี้สามารถปรับขนาดได้ถึงเตรียมสั้นหรือเตรียมแมกซี่ซึ่งจะให้ผลผลิตในปริมาณที่มีขนาดใหญ่ของดีเอ็นเอ (หรืออาร์เอ็นเอ). โปรโตคอลเฉพาะสำหรับการสลายด่างแตกต่างกันมากจากห้องปฏิบัติการไปยังห้องปฏิบัติการและแม้จะมาจากนักวิทยาศาสตร์ที่นักวิทยาศาสตร์ หลักการพื้นฐานที่อยู่เบื้องหลังขั้นตอน แต่มีเหมือนกันอย่างเป็นธรรม นี่พวกเขาคือ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสลายเป็นด่าง

การสลายเป็นด่างเป็นวิธีการของทางเลือกสำหรับการแยกพลาสมิดดีเอ็นเอรูปวงกลม หรือแม้แต่ RNA จากแบคทีเรียเซลล์ มันเป็นหนึ่งในเทคนิคที่มีประโยชน์มากที่สุดโดยทั่วไปเป็น รวดเร็ว เชื่อถือได้ และค่อนข้างสะอาด วิธีการได้รับดีเอ็นเอจากเซลล์ ถ้าจำเป็น ดีเอ็นเอจากเตรียมผลิตอัลคาไลน์สามารถเพิ่มเติมให้บริสุทธิ์ การสลาย
ด่างขึ้นอยู่กับคุณสมบัติที่เป็นเอกลักษณ์ของพลาสมิดดีเอ็นเอมันสามารถหลอม ( อย่างรวดเร็วต่อไปนี้ . นี่คือสิ่งที่ช่วยให้ดีเอ็นเอดีเอ็นเอจะถูกแยกออกจากโครโมโซมแบคทีเรีย .
โดยปกติคุณจะเติบโตขึ้นและเซลล์ที่มีพลาสมิดที่คุณต้องการแยก ก็จะทำให้เซลล์ด้วยด่างและสารสกัดดีเอ็นเอพลาสมิด เศษเซลล์จะตกตะกอนโดยใช้ SDS และโพแทสเซียมอะซิเทต นี้จะปั่นลงและเม็ดจะถูกเอาออก ไอโซโพรพานอลแล้วใช้ตกตะกอนดีเอ็นเอจากนำ , นำออก , และ ดีเอ็นเอ จะ resuspended ในบัฟเฟอร์ ( มักจะเท ) มิเตรียมโดยปกติผลผลิต 5-10 ไมโครกรัม . นี้สามารถปรับขนาดขึ้นเพื่อ MIDI หรือแมกซี่เตรียมเตรียม ซึ่งจะให้ผลผลิตในปริมาณขนาดใหญ่มากของ DNA หรือ RNA ) .
โปรโตคอลที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการสลายเป็นด่างแตกต่างกันอย่างกว้างขวางจากแล็บกับแล็บและแม้แต่นักวิทยาศาสตร์กับนักวิทยาศาสตร์ หลักการพื้นฐานที่อยู่เบื้องหลังกระบวนการ อย่างไรก็ตาม ค่อนข้างสม่ำเสมอ ที่นี่พวกเขาจะ :