2.7. Determination of TBARS levels

2.7. Determination of TBARS levels in serum and liver
The levels of TBARS were determined as described above (Section
2.3.1) in hamster sera and liver homogenates.
2.8. Antioxidants enzymes assay in serum and liver
2.8.1. Glutathione peroxidase (GPx)
GPx activity was measured spectrophotometrically at 340 nm using a
technique based on the Flohe´ and Gu¨nzler (1984) procedure, in which
GSH formation is followed by measurement of oxidation of the reduced
form of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) to the
oxidized form, nicotinamide adenine phosphate (NADP+). Final concentrations
in the reaction mixture, in 0.1 mol/l potassium phosphate
buffer (pH 7.0) were 0.2 mmol/l NADPH, 1 mmol/l diethylenetriaminepentaacetic
acid, 1.5 mmol/l reduced glutathione (GSH) and 7.3 · 106 U/
ml reductase glutathione (GR). The reaction was started with 0.12 mmol/l
tert-butyl hydroperoxide (t-BuOOH). GPx activity is expressed as
lmol min1 g1 or ml1
.
2.8.2. Superoxide dismutase (SOD)
SOD activity was measured as described by Paoletti and Mocali
(1972). Samples (25 ll) were added to the reaction mixture containing, at
final concentrations, 100 mmol/l diethanolamine buffer (pH 7.4),
0.14 mmol/l NADPH, 2.27/1.14 mmol/l EDTA/MnCl2 (pH 7.0). The
oxidation of NADPH was started by the addition of 1 mmol/l
b-mercaptoethanol. Oxidation of NADPH was measured spectrophotometrically
at 340 nm. A standard curve for SOD activity was constructed
using SOD from bovine erythrocytes (Sigma, St Louis, MO, USA). One
unit of SOD activity was defined as the amount of the enzyme required to
inhibit the oxidation of NADPH by 50%. SOD activity was expressed in
units per gram of tissue or ml of serum.
2.8.3. Catalase (CAT)
CAT activity was estimated following the method of Aebi (1984). The
reaction was started by the addition of 20 ll of sample in 2 ml of 30 mmol/l
hydrogen peroxide (H2O2) in 50 mmol/l potassium phosphate buffer (pH
7.0). Enzyme units are expressed as mmol/l of consumed H2O2 per min g
or ml.
2.9. Isolated blood vessels and histopathology analysis
After 10 weeks of treatment, animals were euthanized using CO2
chamber and serum samples were taken through heart puncture for biochemical
parameters. The thoracic aorta was rapidly removed, rinsed in
0.9% saline, fixed in 10% buffered formalin, processed for dehydration,
and embedded in paraffin. Five-micron sections were cut transversally on a
glass slide, mounted, rehydrated and stained with Harris hematoxylin/
eosin (H&E).
2.10. Statistical analysis
The data was analyzed using GraphPad Prism V.4 (GraphPad Software,
Inc., San Diego, CA). The statistical significance of differences
between data means was determined by using analysis of variance one way
(ANOVA), followed by post hoc testing by Tukeys test. A value of
P < 0.05 was considered as statistically significant. Results are given as
means ± SD, n = 6. For correlation analysis, Carl Pearson Moment
correlation test was employed.
3. Results
3.1. Antioxidant activity of the T. indica L. extract in vitro
As an initial chemical characterization of the extract, an
HPLC-UV chromatogram was performed. An UV spectra
was obtained for each observed peak in the chromatogram.
All spectra showed a similar absorption pattern, with two
bands of maximum absorption around 230 and 290 nm,
with the exception of the peak at 12.15 min, which comprises
a single band of absorption at 282 nm. These data
suggest the predominance of compounds like flavonoids
that normally occurs as secondary metabolites in plants
by the characteristics absorptions of the A and B bands
(Fig. 1).
The crude tamarind extract was found to be rich in sugars
(70.25 ± 8.56 mg/ml), polyphenols (34.02 ± 2.11 nmol/
ml) and flavonoids (35.51 ± 5.61 lg/ml), the later two
being well known antioxidant agents. The assays for quantification
of these components were all performed in triplicate
in three independent extract preparations.
DPPH and superoxide radicals scavenging activities are
present in the extract in a dose-dependent manner, with
Pearson correlation of 0.89 (Fig. 2). The results of
both scavenging activities of the extract were compared
with the reference compound BHT (not shown). BHT presented
61.65% ± 0.3 and 80.29% ± 0.2 of scavenging activities
against DPPH and superoxide, respectively, whereas
the extract, at the concentration of 1 mg/dl, presented
7.31% ± 0.5 and 42.01% ± 3.5 scavenging activities against
DPPH and superoxide, respectively (Fig. 2).
Fe2+/citrate-mediated lipid peroxidation in animal
serum, assessed as TBARS, was inhibited by about 50%
in the presence of 2.5% crude tamarind extract. In the presence
of 5% of the extract the inhibition was almost complete
(Fig. 3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 การกำหนดระดับ TBARS ในซีรั่มและตับ
ระดับของ TBARS ได้รับการพิจารณาตามที่อธิบายไว้ข้างต้น (ข้อ
2.3.1) ในหนูแฮมสเตอร์ซีรั่มและตับ homogenates.
2.8 สารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์ทดสอบในซีรั่มและตับ
2.8.1 กลูตาไธโอน peroxidase (GPx)
กิจกรรม GPx วัด spectrophotometrically ที่ 340 นาโนเมตรโดยใช้
เทคนิคที่อยู่บนพื้นฐานของ Flohe' และGu¨nzler (1984) ขั้นตอนซึ่งใน
GSH การก่อตัวตามด้วยการวัดของการเกิดออกซิเดชันของลด
รูปแบบของ Nicotinamide adenine dinucleotide ฟอสเฟต ( NADPH) กับ
รูปแบบออกซิไดซ์ Nicotinamide adenine ฟอสเฟต (NADP +) ความเข้มข้นของรอบชิงชนะเลิศ
ในการผสมปฏิกิริยาใน 0.1 mol / L โพแทสเซียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) เป็น 0.2 มิลลิโมล / ลิตร NADPH 1 มิลลิโมล / ลิตร diethylenetriaminepentaacetic
กรด 1.5 มิลลิโมล / ลิตรลดลงกลูตาไธโอน (GSH) และ 7.3 · 106 U /
reductase มล. กลูตาไธโอน (GR) ปฏิกิริยาเริ่มต้นด้วย 0.12 มิลลิโมล / ลิตร
tert-butyl hydroperoxide (T-BuOOH) กิจกรรม GPx จะแสดงเป็น
G1 lmol min1 หรือ ML1
.
2.8.2 dismutase superoxide (SOD)
กิจกรรม SOD วัดตามที่อธิบาย Paoletti และ Mocali
(1972) ตัวอย่าง (25 LL) ถูกเพิ่มเข้าไปผสมปฏิกิริยาที่มีที่
มีความเข้มข้นสุดท้าย 100 มิลลิโมล / ลิตร Diethanolamine บัฟเฟอร์ (pH 7.4)
0.14 มิลลิโมล / ลิตร NADPH, 2.27 / 1.14 มิลลิโมล / ลิตร EDTA / MnCl2 (pH 7.0)
ออกซิเดชันของ NADPH เริ่มต้นจากการเพิ่มขึ้นของ 1 มิลลิโมล / ลิตร
B-mercaptoethanol ออกซิเดชันของ NADPH วัด spectrophotometrically
ที่ 340 นาโนเมตร เส้นโค้งมาตรฐานสำหรับกิจกรรม SOD ถูกสร้างขึ้น
โดยใช้ SOD จากเม็ดเลือดแดงวัว (Sigma, St Louis, MO, USA) หนึ่ง
หน่วยของกิจกรรม SOD ถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินของเอนไซม์ที่จำเป็นในการ
ยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ NADPH โดย 50% กิจกรรม SOD ถูกแสดงออกใน
หน่วยต่อกรัมหรือมิลลิลิตรของซีรั่ม.
2.8.3 catalase (CAT)
กิจกรรม CAT เป็นที่คาดกันดังต่อไปนี้วิธีการ Aebi นี้ (1984)
ปฏิกิริยาเริ่มต้นจากการเพิ่มขึ้นของ LL 20 ของกลุ่มตัวอย่างใน 2 มิลลิลิตร 30 มิลลิโมล / ลิตร
ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H2O2) ใน 50 มิลลิโมล / ลิตรบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (pH
7.0) หน่วยเอนไซม์จะแสดงเป็นมิลลิโมล / ลิตร H2O2 บริโภคต่อนาทีกรัม
หรือมล.
2.9 บางแห่งหลอดเลือดและการวิเคราะห์จุลพยาธิวิทยา
หลังจาก 10 สัปดาห์ของการรักษาสัตว์ที่ถูกฆ่าเพื่อเก็บเนื้อเยื่อโดยใช้ CO2
หอการค้าและซีรั่มถูกนำตัวอย่างผ่านการเจาะหัวใจชีวเคมี
พารามิเตอร์ เส้นเลือดทรวงอกถูกลบออกอย่างรวดเร็วล้างใน
0.9% น้ำเกลือแก้ไขใน 10% ฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ประมวลผลสำหรับการคายน้ำ
และฝังตัวอยู่ในพาราฟิน ส่วนห้าไมครอนถูกตัด transversally บน
สไลด์แก้วติด rehydrated และย้อมด้วยสี hematoxylin แฮร์ริส /
Eosin (H & E).
2.10 การวิเคราะห์ทางสถิติ
วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ปริซึม GraphPad V.4 (GraphPad ซอฟแวร์
อิงค์, San Diego, CA) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติของความแตกต่าง
ระหว่างข้อมูลวิธีที่ถูกกำหนดโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางหนึ่ง
(ANOVA) ตามด้วยการโพสต์เฉพาะกิจการทดสอบโดยการทดสอบ Tukeys ค่า
P <0.05 ได้รับการพิจารณาเป็นนัยสำคัญทางสถิติ ผลที่จะได้รับเป็น
วิธี± SD, N = 6 สำหรับการวิเคราะห์ความสัมพันธ์คาร์ลเพียร์สัน
ทดสอบความสัมพันธ์เป็นลูกจ้าง.
3 ผลการค้นหา
3.1 ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจาก T. indica L. ในหลอดทดลอง
ในฐานะที่เป็นลักษณะทางเคมีเบื้องต้นของสารสกัดที่
chromatogram HPLC-UV ได้ดำเนินการ สเปกตรัมรังสียูวี
ที่ได้รับในแต่ละจุดสูงสุดตั้งข้อสังเกตใน chromatogram ได้.
สเปกตรัมทั้งหมดแสดงให้เห็นว่ารูปแบบการดูดซึมที่คล้ายกันกับสอง
วงดนตรีของการดูดซึมสูงสุดรอบ 230 และ 290 นาโนเมตร
มีข้อยกเว้นของจุดสูงสุดที่ 12.15 นาทีซึ่งประกอบด้วย
วงเดียวของการดูดซึม ที่ 282 นาโนเมตร ข้อมูลเหล่านี้
ชี้ให้เห็นความเด่นของสารประกอบเช่น flavonoids
ที่ปกติเกิดขึ้นเป็นสารทุติยภูมิในพืช
โดยลักษณะการดูดซึมของวงดนตรีที่ A และ B
(รูปที่ 1)..
สารสกัดมะขามดิบถูกพบว่าเป็นที่อุดมไปด้วยน้ำตาล
(70.25 ± 8.56 mg / มล.), โพลีฟีน (34.02 ± 2.11 nmol /
ml) และ flavonoids (35.51 ± 5.61 LG / ml) หลังจากนั้นทั้งสอง
เป็นที่รู้จักกันดีตัวแทนสารต้านอนุมูลอิสระ ตรวจสำหรับปริมาณ
ขององค์ประกอบเหล่านี้ได้ดำเนินการทั้งหมดในเพิ่มขึ้นสามเท่า
ในสามการเตรียมสารสกัดอิสระ.
DPPH และ superoxide อนุมูลกิจกรรมการขับที่มี
อยู่ในสารสกัดในลักษณะปริมาณขึ้นอยู่กับ
เพียร์สันสัมพันธ์ 0.89 (รูปที่. 2) ผลที่ได้จาก
กิจกรรมทั้งการขับของสารสกัดที่ได้มาเปรียบเทียบ
กับสารบาทอ้างอิง (ไม่แสดง) บาทนำเสนอ
61.65% ± 0.3 และ 80.29% ± 0.2 กิจกรรมการขับ
กับ DPPH และ superoxide ตามลำดับในขณะที่
สารสกัดที่เข้มข้น 1 mg / dL นำเสนอ
7.31% ± 0.5 และ 42.01% ± 3.5 กิจกรรมการขับกับ
DPPH และ superoxide ตามลำดับ (รูปที่. 2).
Fe2 + / citrate พึ่งเกิด lipid peroxidation ในสัตว์
เซรั่ม, การประเมินเป็น TBARS ถูกยับยั้งโดยประมาณ 50%
ในการปรากฏตัวของสารสกัดจากมะขามดิบ 2.5% บริษัท เดอะ ในการปรากฏตัว
ของ 5% ของสารสกัดยับยั้งได้เกือบเสร็จสมบูรณ์แล้ว
(รูปที่. 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . การกำหนดระดับปกติในเลือดและตับระดับปกติเป็นตามที่อธิบายไว้ข้างต้น ( มาตรา2.3.1 ) ในเซราหนูแฮมสเตอร์และ homogenates ตับ2.8 . สารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์ในเลือดและตับ การทดสอบ2.8.1 . กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส ( GPX )กิจกรรม ณ วัดนี้ GPX 340 นาโนเมตรโดยใช้เทคนิคที่ใช้ใน flohe ใหม่และกูตั้ง nzler ( 1984 ) ขั้นตอน ซึ่งการสร้างกลุ่มตามด้วยการวัดปฏิกิริยาออกซิเดชันลดลงรูปแบบของปูใบ้ ( nadph ) ไปที่จากรูป นิโคตินาไมด์อะดีนีนฟอสเฟต ( nadp + ) และสุดท้ายในปฏิกิริยาที่ผสมใน 0.1 mol / L โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) 0.2 มิลลิโมล / ลิตร nadph 1 มิลลิโมล / ลิตร diethylenetriaminepentaaceticกรด , 1.5 มิลลิโมล / ลิตร ลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) และ 7.3 ด้วย 106 U /มลกลูต้าไธโอนรีดักเทส ( GR ) ปฏิกิริยาเริ่มต้นกับ 0.12 mmol / ltert butyl hydroperoxide ( t-buooh ) กิจกรรม GPX จะแสดงเป็นlmol min1 G1 หรือ ml1.2.8.2 . Superoxide Dismutase ( SOD )กิจกรรมสดวัดตามที่อธิบายไว้โดย เปาเลทติ และ โมคาลิ( 1972 ) ตัวอย่าง ( 25 จะ ) มีการเพิ่มส่วนผสมที่มีปฏิกิริยาที่สุดท้ายที่ความเข้มข้น 100 มิลลิโมล / ลิตรไดเอทาโนลามีนบัฟเฟอร์ pH 7.4 )0.14 มิลลิโมล / ลิตร nadph 2.27/1.14 mmol / L , EDTA / mncl2 ( pH 7.0 ) ที่ออกซิเดชันของ nadph เริ่มต้น โดยการเพิ่ม 1 มิลลิโมล / ลิตรb-mercaptoethanol . ออกซิเดชันของ nadph วัดนี้คือที่ 340 นาโนเมตร เส้นโค้งมาตรฐานสำหรับกิจกรรมสดก่อสร้างการใช้เม็ดเลือดแดงสดจากวัว ( Sigma , เซนต์ หลุยส์ โม สหรัฐอเมริกา ) หนึ่งหน่วยกิจกรรมสดถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ ต้องยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ nadph 50% กิจกรรมสดถูกแสดงในหน่วยต่อกรัมเนื้อเยื่อหรือมล. ซีรั่ม2.8.3 . คะตะเลส ( แมว )กิจกรรมแมวประมาณตามวิธีของ aebi ( 1984 ) ที่ปฏิกิริยาเริ่มต้นโดยการเพิ่มของ 20 จะตัวอย่างใน 2 มล. 30 mmol / lไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ( H2O2 ) 50 มิลลิโมล / ลิตรโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH7.0 ) เอนไซม์หน่วยแสดงเป็นมิลลิโมล / ลิตรใช้ H2O2 ต่อ มินจีหรือมล.2.9 . แยกเส้นเลือดและพยาธิวิทยาการวิเคราะห์หลังจาก 10 สัปดาห์ของการรักษา , สัตว์ euthanized โดยใช้คาร์บอนไดออกไซด์ตัวอย่างห้องและเซรั่ม ถ่ายเจาะหัวใจผ่านทางชีวเคมีพารามิเตอร์ หลอดเลือดแดงใหญ่ในช่องอกเป็นอย่างรวดเร็วลบล้างใน0.9% น้ำเกลือ ถาวรใน 10% ฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ ประมวลผลสำหรับอาการขาดน้ำและฝังตัวในพาราฟิน 5 ไมครอน ส่วนที่ถูกตัด transversally บนกระจกสไลด์ ติดได้ทำการ รีไฮเดรทม และย้อมด้วยสีย้อม / แฮร์ริสโอซิน ( H & E )2.10 . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ graphpad ปริซึม v.4 ( graphpad ซอฟต์แวร์ ,อิงค์ , San Diego , CA ) ความแตกต่างทางสถิติของระหว่างแปลว่าข้อมูลถูกกำหนดโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว( ANOVA ) การทดสอบ 2 กลุ่มตามโพสต์โดยการทดสอบ ค่าของp < 0.05 เป็นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ผลที่ได้รับ เช่นหมายถึง± SD , N = 6 การวิเคราะห์สหสัมพันธ์เพียร์สัน ขณะที่ คาร์ลการทดสอบสถิติที่ใช้3 . ผลลัพธ์3.1 . ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ T . indica L . สารในหลอดทดลองเป็นลักษณะทางเคมีเบื้องต้นของสารสกัด ,hplc-uv โครมากำหนด มี UV สเปกตรัมได้สำหรับแต่ละพบสูงสุดในโครมา .ทั้งหมดนี้มีรูปแบบคล้ายกับการดูดซึม กับสองวงดนตรีของการดูดซึมสูงสุดประมาณ 230 และ 290 นาโนเมตรด้วยข้อยกเว้นของยอดที่ 12.15 นาที ซึ่งประกอบไปด้วยวงเดียวของการดูดซึมที่ 282 nm . ข้อมูลเหล่านี้แนะนำให้ความเด่นของสารประกอบ เช่น ฟลาโวนอยด์ที่ปกติเกิดขึ้น เช่น สารทุติยภูมิในพืชโดยลักษณะของ A และ B วงโมล่า( รูปที่ 1 )มะขามสกัด พบว่าอุดมไปด้วยน้ำตาล( 70.25 ± 8.56 mg / ml ) , โพลีฟีนอล ( ใช± 2.11 nmol /มิลลิลิตร ) และฟลาโวนอยด์ ( 35.51 ± 6.73 LG / ml ) ต่อมา สองเป็นสารต้านอนุมูลอิสระที่รู้จักกันดีตัวแทน หรือสำหรับปริมาณขององค์ประกอบเหล่านี้ทั้งหมดถูกดำเนินการทั้งสามใบ3 การเตรียมแยกอิสระและการจัดกิจกรรม dpph ซุปเปอร์อนุมูลปัจจุบัน สารสกัดในลักษณะปิดกั้นด้วยสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์เท่ากับ 0.89 ( รูปที่ 2 ) ผลลัพธ์ของทั้งการจัดกิจกรรมของสารสกัดเปรียบเทียบกับอ้างอิงสาร BHT ( ไม่แสดง ) งานนำเสนอ61.65 % ± 0.3 และ 0.2 % ± 80.29 ของการกิจกรรมและกับ dpph ซุปเปอร์ ตามลำดับ ในขณะที่สารสกัดที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / เดซิลิตร , นำเสนอ7.31 % ± 0.5 และ 42.01 % ± 3.5 การจัดกิจกรรมต่อต้านdpph และซุปเปอร์ ตามลำดับ ( รูปที่ 2 )fe2 + / ซิเตรต ( lipid peroxidation ในสัตว์เซรั่ม , ประเมินเป็นปกติ คือ ประมาณ 50% , ยับยั้งในการปรากฏตัวของสารสกัดมะขามดิบ 2.5 % ต่อหน้า5% สารสกัดยับยั้งได้เกือบสมบูรณ์( รูปที่ 3 )