The hydrolysis of the fluorogenic p

The hydrolysis of the fluorogenic peptides Z-FR-MCA, Z-LRMCA
and Z-RR-MCA (Calbiochem, La Jolla, CA, USA) by purified S.
levis peptidase was continuously monitored in a Hitachi F-2500
spectrofluorimeter by measuring fluorescence at lex = 380 nm and
lem = 460 nm. Approximately 20 mM of purified enzyme were
added to 0.1 M sodium acetate, pH 5.5, containing 2.5 mM DTT
(1.0 ml final volume) and incubated for 3 min at 37 8C. The
substrates were then added at different concentrations and thecatalytic activity was monitored. The apparent second-order rate
constant Kcat/Km was determined under pseudo first-order conditions,
in which [S]Km. Determinations were performed with
different substrate concentrations and calculated using nonlinear
regression data analysis with the aid of the GraFit program
(Leatherbarrow, 2001). The molar concentration of the S. levis
cysteine proteinase was determined by active site titration with E-
64 inhibitor (

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การย่อยสลายของเปปไทด์ fluorogenic Z-FR-เอ็ม Z-LRMCA
และ Z-RR-เอ็ม (Calbiochem, La Jolla, CA, USA) โดยบริสุทธิ์เอส
เลวิส peptidase คือการตรวจสอบอย่างต่อเนื่องในฮิตาชิ F-2500
spectrofluorimeter โดยการวัดการเรืองแสง ที่ lex = 380 นาโนเมตรและ
LEM = 460 นาโนเมตร ประมาณ 20 มิลลิเอนไซม์บริสุทธิ์ถูก
เพิ่มเข้าไปใน 0.1 M acetate โซเดียมค่า pH 5.5 ที่มี 2.5 มิลลิ DTT
(1.0 มล. ปริมาณสุดท้าย) และบ่มเป็นเวลา 3 นาทีที่ 37 8C
พื้นผิวที่ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วที่ความเข้มข้นแตกต่างกันและกิจกรรม thecatalytic คือการตรวจสอบ อัตราที่สองคำสั่งที่ชัดเจน
คง Kcat / กมถูกกำหนดภายใต้เงื่อนไขหลอกครั้งแรกที่สั่งซื้อ
ที่ [S] กิโลเมตร พิจารณาดำเนินการด้วย
ความเข้มข้นของสารตั้งต้นที่แตกต่างกันและการคำนวณโดยใช้การไม่เชิงเส้น
การวิเคราะห์ข้อมูลการถดถอยด้วยความช่วยเหลือของโปรแกรม Grafit
(Leatherbarrow, 2001) ความเข้มข้นของโมลของเอสเลวิส
โปร cysteine ​​ถูกกำหนดโดยการไทเทรตเว็บไซต์ที่ใช้งานกับ E-
64 ยับยั้ง (

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การย่อยสลายของ fluorogenic z-fr-mca เปปไทด์ , และ z-lrmca
z-rr-mca ( calbiochem , La Jolla , CA , USA ) โดยบริสุทธิ์ S .
Levis ลูกเต้าคือการติดตามอย่างต่อเนื่องใน ฮิตาชิ f-2500
spectrofluorimeter โดยการวัดการเรืองแสงที่เล็กซ์ = 380 nm และ
เล็ม = 460 nm . ประมาณ 20 มม. ของเอนไซม์บริสุทธิ์ถูก
เพิ่ม 0.1 โมลาร์โซเดียมอะซิเตต , pH 5.5 , ประกอบด้วย
DTT 2.5 มม. ( 1เล่มสุดท้าย 0 มิลลิลิตร ) และบ่มเป็นเวลา 3 นาทีที่ 37 8C .
) จึงเพิ่มกิจกรรมและที่ความเข้มข้นต่าง ๆ thecatalytic ถูกตรวจสอบ . อัตราคงที่ kcat
ที่สองปรากฏ / km ถูกกำหนดภายใต้เงื่อนไขความเทียม
ที่ [ S ]  km การใช้พื้นผิวที่แตกต่างกันและคำนวณความเข้มข้นด้วย

ใช้ไม่เป็นเชิงเส้นขั้นตอนการวิเคราะห์ข้อมูลด้วยความช่วยเหลือของโปรแกรม grafit
( leatherbarrow , 2001 ) ความเข้มข้นโดยโมลของ S . Levis
ซีสเตอีนโปรถูกกำหนดโดยการไทเทรตเว็บไซต์ที่ใช้งานกับ E -
64 ใช้