A member of the Rab B group (NtRab2

A member of the Rab B group (NtRab2) has also been reported to be involved in the regulation of vesicle trafficking between the ER and Golgi bodies in tobacco pollen tubes as again dominant inhibitory mutants of the protein blocked transport of secretory pathway markers (Cheung et al., 2002). GFP-fusions of the protein were located to the Golgi in the tubes but interestingly not in tobacco leaf epidermal cells after introduction of DNA by particle bombardment (Cheung et al., 2002). However, using Agrobacterium-mediated tran- sient expression in tobacco leaves, efficient localisation of GFP-RabB fusions to the Golgi have been demonstrated (Neumann et al., 2003). Homologues of mammalian Rab6 (AtRabH1b & c) have also been located to the plant Golgi, although no definite function has been assigned ( J. Johansen et al., unpublished), whilst Rab 5 homologues have been shown to be involved in the post-Golgi vacuolar pathway but may cycle between the Golgi and a prevacuolar compartment (Bolte et al., 2004; A. M. Kotzer, unpublished).


2. SNAREs at export sites

It is commonly accepted that prior to the fusion of a vesicle with a target membrane, the interaction of a group of membrane proteins, the soluble N-ethyl malemide sensitive factor adaptor proteins (SNAREs) is necessary. Membrane fusion typically requires the interaction of a complex of three SNAREs (t-SNAREs) on the target membrane and one SNARE (v-SNARE) on the donor membrane via conserved coiled-coil domains. The formation of this SNARE complex eventually results in membrane fusion (Bonifacino & Glick,
2004). Different combinations of SNAREs appear to confer specificity on different membrane fusion events within the secretory pathway. For the post Golgi pathway it is often the case that the v- and t-SNAREs interact with a SNAP protein containing two coiled-coil domains ( Bonifacino & Glick, 2004). A large number of SNAREs are found in the arabidopsis genome (Sanderfoot & Raikhel, 1999; Sanderfoot et al., 2000; Blatt & Thiel, 2003) including homologues of those described in other kingdoms that mediate fusion events between the ER and Golgi. These include homologues of Sec22, Bos1, Bet 1 (membrin) and Sed5, which all locate to punctate Golgi-like structures when expressed as GFP fusions (Takeuchi et al.,
2000, L. Châtre et al., unpublished). The mechanisms by which such proteins may operate in a spatially confined export complex (see Section IV.4) is a major challenge in our understanding of ER to Golgi transport in plants.


3. In vivo imaging reveals transport processes

Strong clues as to the nature of ER to Golgi transport have come from the application of fluorescent protein technology. Initial observations of GFP labelled Golgi in tobacco leaves and tobacco BY2 suspension culture cells resulted in two conflicting models of ER to Golgi transport being proposed,

although in neither case was there any experimental data to support the hypotheses. After viral-mediated expression of an ST-GFP construct, Boevink et al. (1998) observed Golgi stacks moving over the tubules of the cortical ER network in tobacco leaf cells. They suggested that the whole of the ER surface may be export competent and the Golgi may simply collect export vesicles in the manner of a vacuum cleaner collecting dirt from a carpet. In contrast Nebenführ et al. (1999)
observed that, in BY2 cells expressing an α-1,2 mannosidase-
GFP construct, the Golgi appeared to show stop-and-go movements. They suggested that Golgi may come to a halt over ER export sites as the result of an unknown signal and the stacks would collect cargo before resuming movement.
The ‘stop and go’ model was apparently reinforced by the work of Brandizzi et al. (2002b) who used fluorescence recov- ery after photobleaching (FRAP) to show that in static Golgi tagged with ST-GFP or an AtERD2-GFP construct recovery of fluorescence in bleached Golgi stacks was relatively rapid (80 – 90% of the prebleach level in 5 mins) indicating trans- port of new fluorescent protein to the Golgi (Fig. 4). This was the first in vivo demonstration of the transport of a protein to the Golgi and as the constructs did not appear to label any compartments downstream of the Golgi it was assumed that new protein was being delivered from the ER. The FRAP technique assumes that recovery of fluorescence due to trans- port of fluorescent molecules into the bleached area must be matched by an equivalent loss of bleached molecules from the same area. Thus, it is likely that the ST-GFP construct is cycling out of the Golgi either back to the ER or to a down- stream compartment. This hypothesis was confirmed by the complete inhibition of fluorescence recovery after energy depletion and a 50% inhibition of recovery after treatment with the secretory inhibitor BFA. In order to carry out these FRAP experiments it was necessary to inhibit Golgi move- ment with actin depolymerising drugs first. Thus, the conclu- sion was made that ER to Golgi transport can take place when Golgi stacks are stationary as proposed by Nebenführ et al. (1999).
More recently the FRAP technique has been refined to per- mit analysis of fluorescence recovery in moving Golgi stacks. By targeting two different fluorescent proteins to the same Golgi stacks it was possible to photobleach with one laser wavelength and observe recovery whilst tracking the individ- ual Golgi stack through fluorescence using the laser line at the second wavelength (Brandizzi & Hawes, 2004; L. daSilva et al., 2004). This proved that ER to Golgi transport can take place whilst the Golgi are motile, whilst confirming that the bleaching process does not destroy the Golgi stack.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สมาชิกของกลุ่ม Rab B (NtRab2) ยังมีการรายงานการมีส่วนร่วมในกฎของเวสิเคิลค้าระหว่างศพ ER และ Golgi ในยาสูบท่อละอองเกสรเป็นสายพันธุ์ลิปกลอสไขอีกหลักของการขนส่งโปรตีนที่ถูกบล็อคของเครื่องหมายทางเดิน secretory (จางและ al., 2002) GFP fusions ของโปรตีนได้ตั้ง Golgi ในหลอด แต่ไม่ใช่เรื่องน่าสนใจ ในเซลล์ epidermal ใบยาสูบหลังจากการแนะนำของดีเอ็นเอ โดยการระดมยิงอนุภาค (จางและ al., 2002) อย่างไรก็ตาม โดยใช้นิพจน์ mediated อโกรแบคทีเรียมทราน-sient ในใบยาสูบ สังคมธุรกิจประสิทธิภาพของ fusions GFP RabB เพื่อ Golgi ที่ได้สาธิต (Neumann et al., 2003) Homologues mammalian Rab6 (AtRabH1b & c) ยังได้ตั้งโรงงาน Golgi ถึงแม้ ว่าฟังก์ชันไม่แน่นอนได้ (J. Johansen et al. ยกเลิกประกาศ) ใน ขณะที่มีการแสดงจะเกี่ยวข้องกับทางเดิน vacuolar โพสต์ Golgi Rab 5 homologues แต่อาจวนระหว่าง Golgi ช่อง prevacuolar (Bolte et al., 2004 A. M. Kotzer ยกเลิกประกาศ)2. sNAREs ที่อเมริกาส่งออกโดยทั่วไปยอมรับว่า ก่อนฟิวชั่นของเวสิเคิลกับเยื่อเป้าหมาย การโต้ตอบของกลุ่มโปรตีนเมมเบรน ละลายเอทิล N malemide ปัจจัยสำคัญอะแดปเตอร์โปรตีน (SNAREs) เป็นสิ่งจำเป็น ฟิวชั่นเมมเบรนโดยทั่วไปต้องการโต้ตอบที่ซับซ้อนของสาม SNAREs (t-SNAREs) บนเยื่อเป้าหมายและบ่วงหนึ่ง (v-บ่วง) บนเยื่อผู้บริจาคผ่านโดเมนนำม้วนคอยล์ ในที่สุดผลการก่อตัวของบ่วงนี้ซับซ้อนในฟิวชั่นเมมเบรน (Bonifacino & Glick2004) การรวมกันของ SNAREs ปรากฏประสาท specificity เยื่อต่าง ๆ ผสมผสานเหตุการณ์ภายในทางเดิน secretory สำหรับการโพสต์ Golgi ทางเดิน มันมักจะเป็นกรณีที่ v - และ t-SNAREs โต้ตอบกับโปรตีน SNAP ที่ประกอบด้วยขดลวดคอยล์สองโด (Bonifacino & Glick, 2004) พบจำนวน SNAREs ในจีโนม arabidopsis (Sanderfoot & Raikhel, 1999 Sanderfoot และ al., 2000 Blatt & Thiel, 2003) รวมถึง homologues ของที่อธิบายไว้ในอาณาจักรอื่น ๆ บรรเทาเหตุการณ์ฟิวชั่นระหว่าง ER และ Golgi ได้แก่ homologues Sec22, Bos1 เดิมพัน 1 (membrin) และ Sed5 ซึ่งทั้งหมดการค้นหากับโครงสร้างเช่น Golgi punctate เมื่อแสดงเป็น GFP fusions (สแมน et al.,2000, L. Châtre et al. ยกเลิกประกาศ) กลไกซึ่งโปรตีนดังกล่าวอาจทำงานในการส่งออกจำกัด spatially (ดูส่วน IV.4) เป็นความท้าทายสำคัญในเราเข้าใจของ ER การคมนาคม Golgi ในพืช3. แสดงถึงการถ่ายภาพที่ในสัตว์ทดลองกระบวนการขนส่งปมที่แข็งแรงเป็นลักษณะของ ER เพื่อขนส่ง Golgi ได้มาจากการประยุกต์ใช้เทคโนโลยีโปรตีนเรืองแสง ข้อสังเกตเบื้องต้นของ GFP มัน Golgi ในใบยาสูบ และยาสูบ BY2 ระงับวัฒนธรรมเซลล์ผลในสองรูปแบบความขัดแย้งของ ER Golgi ขนส่งการนำเสนอ แม้ว่าในทั้งกรณีมีข้อมูลการทดลองสนับสนุนสมมุติฐาน หลังจากไวรัส mediated นิพจน์ของการก่อสร้าง ST GFP, Boevink et al. (1998) สังเกต Golgi กองย้ายไป tubules เครือข่าย ER เนื้อแน่นในเซลล์ใบยาสูบ พวกเขาแนะนำว่า ทั้งผิว ER อาจส่งออกที่เชี่ยวชาญ และ Golgi อาจเก็บอสุจิส่งออกในลักษณะของเครื่องดูดฝุ่นเก็บฝุ่นจากพรมเพียง ในความคมชัด Nebenführ et al. (1999)สังเกตที่ ในเซลล์ BY2 แสดง mannosidase α-1, 2 มี-สร้าง GFP, Golgi ที่ปรากฏจะ แสดงการเคลื่อนไหวหยุด และไป พวกเขาแนะนำว่า Golgi อาจมาชะงักผ่านเว็บไซต์ส่ง ER เป็นผลของสัญญาณไม่รู้จักและกองจะรวบรวมสินค้าก่อนที่จะย้ายการดำเนินการต่อ'หยุด การไป' รุ่นถูกเสริม ด้วยการทำงานของ Brandizzi et al. (2002b) ที่ใช้ fluorescence recov-ery หลังจาก photobleaching (FRAP) แสดงว่า ในสถิต Golgi แท็ก GFP เซนต์หรือ AtERD2 การ GFP สร้างกู้คืน fluorescence ในกอง Golgi เซลได้อย่างรวดเร็วค่อนข้าง เห็นได้ชัด (80 – 90% ของระดับ prebleach ใน 5 นาที) บ่งบอกทรานส์พอร์ตของโปรตีนเรืองแสงใหม่ให้ Golgi (Fig. 4) นี้เป็นการสาธิตในสัตว์ทดลองครั้งแรกของการขนส่งโปรตีนเพื่อการ Golgi และเป็นโครงสร้างไม่ปรากฏการใด ๆ ช่องน้ำของ Golgi มันถูกสันนิษฐานว่า โปรตีนใหม่ถูกจัดส่งจาก ER เทคนิค FRAP สันนิษฐานว่า กู้คืน fluorescence เนื่องจากธุรกรรมท่าเรืองแสงโมเลกุลในบริเวณเซลต้องตรงกัน โดยการสูญเสียเทียบเท่าของโมเลกุลเซลจากพื้นที่เดียวกัน ดังนั้น มีแนวโน้มว่า สร้าง ST GFP เป็นจักรยานจาก Golgi ที่ ไป ER หรือ จะช่องลงกระแส สมมติฐานนี้ถูกยืนยัน โดยยับยั้งการ fluorescence การกู้คืนหลังจากการลดลงของพลังงานที่สมบูรณ์และยับยั้ง 50% ของการฟื้นตัวหลังการรักษาด้วยสารยับยั้ง secretory BFA การดำเนินการทดลอง FRAP เหล่านี้ ได้จำเป็นต้องยับยั้ง Golgi ย้ายติดขัด ด้วยยา depolymerising แอกตินครั้งแรก ดังนั้น conclu-sion ทำที่ ER เพื่อ Golgi ขนส่งสามารถทำได้เมื่อกอง Golgi เครื่องเขียนตามที่เสนอโดย Nebenführ et al. (1999)เมื่อเร็ว ๆ นี้ เทคนิค FRAP ได้รับไปวิเคราะห์ต่อ mit กู้ fluorescence ในกอง Golgi ย้าย โดยการกำหนดเป้าหมายสองโปรตีนเรืองแสงแตกต่างกันกับกองของ Golgi เดียวมันสามารถ photobleach กับความยาวคลื่นของเลเซอร์หนึ่ง และสังเกตกู้ขณะติดตาม individ ual Golgi กองผ่าน fluorescence ใช้เส้นเลเซอร์ที่ความยาวคลื่นที่สอง (Brandizzi & Hawes, 2004 L. ฎะซิลวา et al., 2004) นี้พิสูจน์ว่า ER การ Golgi ขนส่งสามารถทำได้ขณะ Golgi มี motile ขณะที่ยืนยันว่า กระบวนการฟอกสีทำลายกอง Golgi

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สมาชิกของกลุ่มใน Rab B (NtRab2) ยังได้รับรายงานว่าจะมีส่วนร่วมในการควบคุมของการค้าระหว่างตุ่มร่างกาย ER และกอลไจในหลอดเกสรยาสูบเป็นอีกครั้งกลายพันธุ์ที่โดดเด่นของการยับยั้งโปรตีนที่ถูกปิดกั้นการขนส่งของเครื่องหมายทางเดินหลั่ง (Cheung และ al., 2002) GFP Fusions ของโปรตีนที่ถูกตั้งอยู่ในกอลไจหลอด แต่ที่น่าสนใจไม่ได้อยู่ในเซลล์ของใบยาสูบผิวหนังหลังจากการแนะนำของดีเอ็นเอโดยการทิ้งระเบิดของอนุภาค (Cheung et al., 2002) อย่างไรก็ตามการใช้ Agrobacterium พึ่งแสดงออก tran- sient ในใบยาสูบที่มีประสิทธิภาพของการแปล Fusions GFP-Rabb เพื่อกอลไจได้รับการแสดงให้เห็นถึง (นอยมันน์ et al., 2003) homologues ของ Rab6 เลี้ยงลูกด้วยนม (AtRabH1b & c) ยังได้รับการตั้งอยู่ทางกอลไจพืชแม้ว่าจะไม่มีฟังก์ชั่นที่แน่นอนได้รับมอบหมาย (เจฮันเซน et al., ที่ไม่ได้เผยแพร่) ในขณะที่กระต่าย 5 homologues ได้รับการแสดงที่จะมีส่วนร่วมในการโพสต์ ทางเดินกอลไจ vacuolar แต่อาจวงจรระหว่างกอลไจและช่อง prevacuolar (โบลท์และคณะ, 2004;. AM Kötzer, ไม่ถูกเผยแพร่). 2 ถักทอที่เว็บไซต์การส่งออกเป็นที่ยอมรับกันทั่วไปว่าก่อนที่จะมีความหลากหลายของถุงที่มีเยื่อหุ้มเซลล์เป้าหมายปฏิสัมพันธ์ของกลุ่มโปรตีนที่ละลายน้ำ N-เอทิล malemide ปัจจัยที่มีความสำคัญโปรตีนอะแดปเตอร์ (ถักทอ) เป็นสิ่งที่จำเป็น ฟิวชั่นเมมเบรนมักจะต้องทำงานร่วมกันของความซับซ้อนของสามถักทอ (เสื้อถักทอ) ในเยื่อหุ้มเซลล์เป้าหมายและหนึ่งบ่วง (V-บ่วง) ในเมมเบรนบริจาคผ่านป่าสงวนโดเมนขดม้วน การก่อตัวของความซับซ้อนบ่วงนี้ส่งผลในที่สุดฟิวชั่นเมมเบรน (Bonifacino และกลิก, 2004) ชุดที่แตกต่างกันของถักทอปรากฏเพื่อให้คำปรึกษาเฉพาะเจาะจงเกี่ยวกับเหตุการณ์ที่ฟิวชั่นเมมเบรนที่แตกต่างกันในทางเดินหลั่ง สำหรับทางเดินกอลไจโพสต์มันมักจะเป็นกรณีที่ V- และเสื้อถักทอโต้ตอบกับโปรตีน SNAP มีสองโดเมนขดม้วน (Bonifacino และกลิก, 2004) จำนวนมากของถักทอที่พบในจีโนมของ Arabidopsis (Sanderfoot & Raikhel 1999;. Sanderfoot et al, 2000; Blatt & ธิลล์ 2003) รวมทั้ง homologues ของผู้ที่อธิบายไว้ในราชอาณาจักรอื่น ๆ ที่เป็นสื่อกลางในเหตุการณ์ที่เกิดขึ้นระหว่างฟิวชั่น ER และกอลไจ เหล่านี้รวมถึง homologues ของ Sec22, Bos1, เดิมพัน 1 (membrin) และ Sed5 ซึ่งทั้งหมดเพื่อหา punctate โครงสร้างกอลไจเหมือนเมื่อแสดงเป็นฟิวชั่น GFP (Takeuchi et al., 2000 ลิตรChâtre et al., ที่ไม่ได้เผยแพร่) กลไกโดยที่โปรตีนดังกล่าวอาจดำเนินการในการส่งออกถูกคุมขังสันนิฐานที่ซับซ้อน (ดูมาตรา IV.4) เป็นความท้าทายที่สำคัญในการทำความเข้าใจของเราที่จะเอ่อกอลไจขนส่งในพืช. 3 ในการถ่ายภาพเผยให้เห็นร่างกายกระบวนการขนส่งเบาะแสแข็งแกร่งตามธรรมชาติของ ER ที่จะกอลไจขนส่งได้มาจากการประยุกต์ใช้เทคโนโลยีโปรตีนเรืองแสง สังเกตเริ่มต้นของ GFP ติดป้ายกอลไจในใบยาสูบและยาสูบ BY2 เซลล์แขวนลอยผลในสองรูปแบบที่ขัดแย้งกันของกอลไจ ER เพื่อการขนส่งที่ถูกนำเสนอแต่ในกรณีไม่ได้มีข้อมูลการทดลองใด ๆ ที่จะสนับสนุนสมมติฐาน หลังจากที่การแสดงออกของไวรัสพึ่งของโครงสร้าง ST-GFP, Boevink และคณะ (1998) สังเกตกอลไจกองย้ายไปท่อของเครือข่าย ER เยื่อหุ้มสมองในเซลล์ใบยาสูบ พวกเขาชี้ให้เห็นว่าทั้งพื้นผิว ER อาจจะส่งออกมีความสามารถและกอลไจก็อาจจะเก็บรวบรวมถุงส่งออกในลักษณะของเครื่องดูดฝุ่นเก็บรวบรวมสิ่งสกปรกออกจากพรม ในทางตรงกันข้ามNebenführและคณะ (1999) พบว่าในเซลล์ BY2 แสดงα-1,2 mannosidase- สร้าง GFP, กอลไจดูเหมือนจะแสดงให้หยุดและไปเคลื่อนไหว พวกเขาชี้ให้เห็นว่ากอลไจอาจมาหยุดอยู่เหนือสถานที่การส่งออก ER เป็นผลมาจากสัญญาณที่ไม่รู้จักและสแต็คจะเก็บสินค้าก่อนที่จะกลับมาทำงานการเคลื่อนไหว. 'หยุดและไป' รูปแบบเป็นคอนกรีตที่เห็นได้ชัดจากการทำงานของ Brandizzi และคณะ (2002b) ซึ่งใช้ ery เรืองแสง recov- หลังจาก photobleaching (FRAP) แสดงให้เห็นว่าในกอลไจคงติดแท็กด้วย ST-GFP หรือ AtERD2-GFP สร้างการฟื้นตัวของการเรืองแสงในกองกอลไจฟอกขาวค่อนข้างอย่างรวดเร็ว (80 - 90% ของระดับ prebleach ใน 5 นาที) แสดงให้เห็นปล่อยก๊าซเรือนกระจกของโปรตีนเรืองแสงใหม่เพื่อกอลไจ (รูปที่ 4). นี่เป็นครั้งแรกในการสาธิตร่างกายของการขนส่งของโปรตีนที่จะกอลไจและสร้างไม่ปรากฏว่าป้ายช่องใดปลายน้ำของกอลไจสันนิษฐานว่าโปรตีนใหม่ที่ถูกส่งมาจาก ER เทคนิค FRAP อนุมานว่าการฟื้นตัวของการเรืองแสงเนื่องจากทรานส์พอร์ตของโมเลกุลเรืองแสงเข้ามาในพื้นที่ฟอกขาวจะต้องจับคู่โดยการสูญเสียเทียบเท่าของโมเลกุลฟอกขาวจากพื้นที่เดียวกัน ดังนั้นจึงเป็นไปได้ว่าสร้าง ST-GFP คือการขี่จักรยานออกมาจากกอลไจทั้งกลับไปที่ ER หรือช่องกระแสลง สมมติฐานนี้ได้รับการยืนยันโดยการยับยั้งที่สมบูรณ์ของการกู้คืนการเรืองแสงหลังจากการสูญเสียพลังงานและการยับยั้ง 50% ของการกู้คืนหลังการรักษาด้วยสารยับยั้งการหลั่ง BFA เพื่อที่จะดำเนินการทดลองเหล่านี้ FRAP มันเป็นสิ่งจำเป็นในการยับยั้งการกอลไจมูฟ ment กับยาเสพติด depolymerising โปรตีนแรก ดังนั้นสรุปไซออนถูกสร้างขึ้นมาเพื่อที่ ER กอลไจขนส่งสามารถใช้สถานที่เมื่อกองกอลไจนิ่งที่เสนอโดยNebenführและคณะ (1999). เมื่อเร็ว ๆ นี้เทคนิค FRAP ได้รับการขัดเกลาทำการรับการวิเคราะห์ mit ของการกู้คืนการเรืองแสงในการเคลื่อนย้ายกองกอลไจ โดยการกำหนดเป้าหมายสองโปรตีนเรืองแสงแตกต่างกันเพื่อกอลไจเดียวกันกองมันเป็นไปได้ที่จะมีความยาวคลื่น photobleach หนึ่งเลเซอร์และสังเกตการกู้คืนในขณะที่การติดตาม individ- UAL กอลไจสแต็คผ่านการเรืองแสงโดยใช้เส้นเลเซอร์ที่มีความยาวคลื่นที่สอง (Brandizzi & ฮาร์เวส, 2004; ลิตร Dasilva et al., 2004) นี้พิสูจน์ให้เห็นว่า ER เพื่อกอลไจขนส่งสามารถใช้สถานที่ในขณะที่กอลไจมีความเคลื่อนไหวในขณะที่ยืนยันว่ากระบวนการฟอกขาวไม่ทำลายสแต็คกอลไจ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สมาชิกของ RAB กลุ่ม B ( ntrab2 ) ยังได้รับการรายงานที่จะมีส่วนร่วมในการควบคุมการค้าระหว่างประเทศไทยและร่างกายในหลอดเกสร ER กอลจิยาสูบเป็นอีกเด่นเจริญพันธ์ของโปรตีนขนส่งพบเครื่องหมายกั้นทางเดิน ( Cheung et al . , 2002 )GFP fusions ของโปรตีนอยู่ในกอลจิในท่อแต่น่าสนใจในเซลล์ตรงใบยาสูบหลังจากเข้าร่วมดีเอ็นเอโดยเครื่องยิง ( Cheung et al . , 2002 ) อย่างไรก็ตาม การใช้ Agrobacterium ( Tran - sient การแสดงออกในใบยาสูบ , การแปลที่มีประสิทธิภาพของ GFP แร็บ fusions กับโกลจิได้แสดงให้เห็น ( Neumann et al . , 2003 )ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมใน rab6 ( atrabh1b & C ) นอกจากนี้ยังมีอยู่ในพืชกอลจิ ถึงแม้ว่าไม่มีแน่นอน หน้าที่ที่ได้รับมอบหมาย ( J . Johansen et al . , พิมพ์ ) , ในขณะที่รับ 5 ในได้รับการแสดงที่จะเกี่ยวข้องกับการโพสต์ กอลจิ vacuolar เส้นทางแต่อาจรอบระหว่างกอลจิและช่อง prevacuolar ( โบลต์ และ al . , 2004 ; A . M . kotzer unpublished ) ,


2บ่วงที่เว็บไซต์

มันส่งออกเป็นที่ยอมรับกันโดยทั่วไปว่า ก่อนการรวมตัวของเวสิเคิลที่มีเป้าหมายสร้างปฏิสัมพันธ์ของกลุ่มของโปรตีนเมมเบรน , ละลาย n-ethyl malemide อะแดปเตอร์ที่มีโปรตีน ( บ่วง ) เป็นปัจจัยจำเป็นโดย ฟิวชั่น โดยทั่วไปจะต้องใช้ปฏิสัมพันธ์ที่ซับซ้อนของสามบ่วง ( t-snares ) บนเยื่อเป้าหมายและบ่วง ( v-snare ) ในการบริจาคผ่านขดม้วนเยื่อเพื่อโดเมน การก่อตัวของบ่วงซับซ้อนในที่สุดผลในแบบฟิวชั่น ( bonifacino & Glick
2004 )ชุดค่าผสมที่แตกต่างกันของบ่วงปรากฏให้มีความจำเพาะต่อเหตุการณ์ฟิวชั่นเมมเบรนที่แตกต่างกันภายในทางเดินบางๆ . สำหรับการโพสต์กอลจิ ทางเดินมันมักจะเป็นกรณีที่ว่า V - t-snares โต้ตอบกับ snap โปรตีนที่มีสองขดขดโดเมน ( bonifacino & Glick , 2004 ) จํานวนของบ่วง พบในจีโนม Arabidopsis ( sanderfoot & raikhel , 1999 ;sanderfoot et al . , 2000 ; แบลตต์&ธีล , 2003 ) รวมทั้งในนั้นอธิบายไว้ในอาณาจักรอื่น ๆที่เป็นฟิวชั่นและเหตุการณ์ระหว่าง ER กอลจิ . เหล่านี้รวมถึงในของ sec22 bos1 , เดิมพัน , 1 ( membrin ) และ sed5 ซึ่งตั้งอยู่ punctate กอลจิ เช่นเดียวกับโครงสร้างเมื่อแสดงเป็น GFP fusions ( ทาเคอุจิ et al . ,
2000 ลิตร Ch â tre et al . , พิมพ์ )กลไกซึ่งโปรตีนดังกล่าวอาจจะใช้งานในเชิงพื้นที่จำกัดการส่งออกที่ซับซ้อน ( ดูมาตรา iv.4 ) คือความท้าทายหลักในความเข้าใจของเราเอ้อ กอลจิการลำเลียงในพืช


3 ในการถ่ายภาพโดยเผยการขนส่งกระบวนการ

ปมแข็งแรงเป็นลักษณะของ ER กอลจิการขนส่งที่จะได้มาจากการประยุกต์ใช้เทคโนโลยีโปรตีนเรืองแสงข้อสังเกตเบื้องต้นของ GFP ในใบยาสูบและบุหรี่ติดป้าย กอลจิ by2 ระงับเซลล์ก่อให้เกิดวัฒนธรรมสองรุ่นที่ขัดแย้งกันของ ER กอลจิขนส่งถูกเสนอ

ถึงแม้ไม่ใช่กรณีที่มีข้อมูลใด ๆที่สนับสนุนสมมติฐาน หลังจากที่ไวรัสผ่านการแสดงออกของ st-gfp สร้าง boevink et al .( 1998 ) พบกอลจิกองย้ายผ่านท่อ ของเปลือกเป็นเครือข่ายในเซลล์ของใบยาสูบ พวกเขาชี้ให้เห็นว่าทั้ง ER พื้นผิวอาจจะส่งออกที่เชี่ยวชาญและกอลจิอาจเก็บเล็กส่งออกในลักษณะของเครื่องดูดฝุ่นเก็บสิ่งสกปรกจากพรม ในทางตรงกันข้าม nebenf ü HR et al . ( 1999 )
สังเกตว่าในเซลล์ by2 expressing แอลฟา -
2 สำหรับGFP สร้าง , กอลจิปรากฏเพื่อแสดงและหยุดไปเคลื่อนไหว พวกเขาแนะนำว่า กอลจิ อาจชะงักไปเอ้อส่งออกเว็บไซต์ผลของสัญญาณที่ไม่รู้จักและกองเก็บสินค้า ก่อนจะเริ่มเคลื่อนไหว .
' หยุดและไปแบบเห็นได้ชัด เสริม โดยการทำงานของ brandizzi et al .( 2002b ) ที่ใช้โดยธุรกิจหลังจากหาย photobleaching ( VDO ) เพื่อแสดงให้เห็นว่าในสถิต กอลจิ ติดแท็กด้วย st-gfp หรือ aterd2 GFP สร้างการกู้คืนของการฟอกขาวในกอลจิกองค่อนข้างรวดเร็ว ( 80 – 90% ของ prebleach ระดับใน 5 นาที ) แสดงทรานส์ - ท่าเรือแห่งใหม่ไปยังกอลจิ ( รูปโปรตีนเรืองแสง 4 )นี้เป็นครั้งแรกโดยการสาธิตของการขนส่งของโปรตีนที่เป็นโครงสร้างและกอลจิไม่ปรากฏฉลากช่องล่องของกอลจิ มันถือว่าเป็นโปรตีนใหม่ที่ถูกส่งมาจาก ERใช้ Frap สันนิษฐานว่าเนื่องจากการฟื้นตัวของการทรานส์ - พอร์ตของโมเลกุลเรืองแสงในพื้นที่ฟอกต้องถูกจับคู่โดยเทียบเท่าการสูญเสียโมเลกุลฟอกขาวจากพื้นที่เดียวกัน ดังนั้น จึงเป็นโอกาสที่ st-gfp สร้างเป็นจักรยานของกอลจิ ให้กลับไปที่ ER หรือลง - กระแสช่อง .สมมุติฐานนี้ได้รับการยืนยันโดยการยับยั้งการหลังจากการสมบูรณ์ของการกู้คืนพลังงานและ 50% ยับยั้งการฟื้นตัวหลังการรักษาด้วย BFA inhibitor พบ . เพื่อดำเนินการเหล่านี้ VDO การทดลองมันเป็นสิ่งที่จำเป็นเพื่อยับยั้งกอลจิย้าย ment กับ actin ดีพอลิเมอร์ไรซิ่งยาก่อน ดังนั้นการ conclu - ไซออนาว่า เอ้อ กอลจิการขนส่งสามารถใช้สถานที่เมื่อกองกอลจิเป็นเครื่องเขียนที่เสนอโดย nebenf ü HR et al . ( 2542 ) .
มากขึ้นเมื่อเร็ว ๆนี้เทคนิค VDO ที่ได้รับการขัดเกลาเพื่อต่อการวิเคราะห์ - MIT ของเรือง การกู้คืนในย้ายกอง กอลจิ .โดยเป้าหมายสองโปรตีนเรืองแสงแตกต่างกันไปกองกอลจิ เดียวกัน มันเป็นไปได้ที่จะ photobleach ด้วยเลเซอร์ความยาวคลื่นและสังเกตการกู้คืนในขณะที่ติดตาม individ - UAL กอลจิกองผ่านเรืองแสงการใช้เลเซอร์ที่มีความยาวคลื่น 2 เส้น ( brandizzi &ฮาวส์ , 2004 ; L / N เดซิลวา et al . , 2004 ) นี้พิสูจน์แล้วว่า เอ้อ กอลจิการขนส่งสามารถใช้สถานที่ในขณะกำลังเคลื่อนที่ กอลจิ ,ขณะที่ยืนยันว่ากระบวนการฟอกไม่ทำลายกอลจิ

สแต็ค