Cloning and Vector ConstructionGal4

Cloning and Vector Construction

Gal4, PR/Gal4 and PRm/Gal4 sequences were amplified by PCR for the production of the transient expression vectors pcDNA-Gal4, pcDNA-PR/Gal4 and pcDNA-PRm/Gal4, respectively. For this purpose, the constructs pMA236, pHP236 and pHP236m [22] were used as templates together with the Gal4 forward primer with extending HindIII and NotI sites ACGCACGCaagcttgcggccgcccaccATGAAGCTACTGTCTTCTATC and the Gal4 reverse primer with extending SalI site ATAGCTGCGTGCGTGCGTgtcgacttactctttttttgggtttgg. PCR products were digested with HindIII and SalI and ligated into pcDNA™3.1/Zeocin (Invitrogen, Carlsbad CA). pFR-eGFP, modified from pFR-Luc (Stratagene) was kindly provided by Rainer de Martin (University of Vienna).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การโคลนและการก่อสร้างเวกเตอร์GAL4, PR / GAL4 และ PRM / GAL4 ลำดับถูกขยายโดยวิธี PCR สำหรับการผลิตของการแสดงออกชั่วคราวเวกเตอร์ pcDNA-GAL4, pcDNA-PR / GAL4 และ pcDNA-PRM / GAL4 ตามลำดับ เพื่อจุดประสงค์นี้สร้าง pMA236, pHP236 และ pHP236m [22] ถูกนำมาใช้เป็นแม่แบบร่วมกับไพรเมอร์ไปข้างหน้าด้วยการขยาย GAL4 HindIII และเว็บไซต์ Noti ACGCACGCaagcttgcggccgcccaccATGAAGCTACTGTCTTCTATC และไพรเมอร์ GAL4 กลับมีการขยายเว็บไซต์สาลี่ ATAGCTGCGTGCGTGCGTgtcgacttactctttttttgggtttgg ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกย่อยด้วย HindIII และสาลี่และ ligated เข้า pcDNA ™ 3.1 / Zeocin (Invitrogen, Carlsbad CA) PFR-EGFP แก้ไขจาก PFR-Luc (Stratagene) ได้ให้ความกรุณาโดยเรนเนอร์เดอมาร์ติน (มหาวิทยาลัยเวียนนา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การโคลนและการก่อสร้างเวกเตอร์

gal4 , ประชาสัมพันธ์ / gal4 PRM และ / gal4 ลำดับถูกขยายโดยวิธี PCR สำหรับการผลิตของ pcdna-gal4 เวกเตอร์การแสดงออกชั่วคราว pcdna PR / gal4 pcdna PRM และ / gal4 ตามลำดับ สำหรับวัตถุประสงค์นี้ pma236 , โครงสร้าง ,และ php236 php236m [ 22 ] ถูกใช้เป็นแม่แบบ ด้วยกันกับ gal4 ไปข้างหน้าด้วยการรองพื้นและเว็บไซต์ - เก็บไว้ตรงไหนก็ได้ acgcacgcaagcttgcggccgcccaccatgaagctactgtcttctatc และ gal4 ย้อนกลับกับเว็บไซต์ atagctgcgtgcgtgcgtgtcgacttactctttttttgggtttgg การรองพื้นโดย . ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกย่อยด้วย และสาลี่ - และผูกเป็น pcdna ™ 3.1/zeocin ( Invitrogen Carlsbad , CA ) egfp PFR ,ดัดแปลงจาก PFR ลุค ( stratagene ) ได้กรุณาให้โดย Rainer เดอมาร์ติน ( มหาวิทยาลัยเวียนนา )