Each Y. pestis strain was cultured

Each Y. pestis strain was cultured independently in 30 ml BHI
Broth (Brain Heart Infusion, BD-Difco, Sparks, MD) in a sterile 50-
mL conical tube at 30
C (150 rpm) for 36 h, to a density of
approximately 108 CFU/ml, using a New Brunswick Model G24
Incubator (Edison, NJ). The cultures were then sedimented by
centrifugation (1200  g) using a Fisher Scientific Marathon
21000R Centrifuge (Needham Heights, MA). The cell pellets were
then resuspended as a cocktail in 30 mL Butterfield's Phosphate
Buffer (BPB) (Applied Research Institute, Newtown, CT).
One hundred mL (0.1 mL) of the Y. pestis undiluted cocktail was
plated onto duplicate BHIA plates which were then allowed to dry
for approximately 5 min. The agar plates were then exposed to 0.5 J/
cm2 UV-C using the UV-C conveyor as described below.
For experiments using exudates on high density polypropylene
(HDPP) and polyethylene (HDPE) and stainless steel coupons (bead
blasted and electropolished) 0.1mL of Y. pestis cocktailwas pipetted
into 0.9 mL of the sterile food exudates, mixed by vortexing for ca.
10 s, and 0.1 mL transferred to the chilled (4
C) food contact surfaces
and exposed to UV-C as described below. Prior to experimentation
stainless steel coupons were sterilized by autoclaving
while HDPP and HDPE were cleaned with 70% ethanol and then
subjected to 10 J/cm2 UV-C.
Chicken, fish, and beef pieces were inoculated on one side of the
surface with 1.0 mL (ca. 106 CFU/ml), which was then spread on the
food surface (3  3 cm) using a sterile inoculation loop. The inoculated
pieces were allowed to sit in a refrigerator (4
C) for ca. 30
min, and then passed through the conveyor to obtain the required
UV-C doses (0.25, 0.5, 1.0 and 2.0 J/cm2).
Following exposure to UV-C, food samples were placed in sterile
polynylon bags (Uline, Inc., Philadelphia, PA) containing 100ml BPB
and rinsed manually by massaging for ca. 30 s. The solution was
then serially diluted in 9 ml BPB and two 0.1 mL aliquots per
dilution were spread on BHI agar plates (BD-Difco, Sparks, MD). The
plates were then incubated for 3 days at 30
C prior to enumeration
of bacterial colonies. Each experiment was conducted independently
a minimum of 3 times (n ¼ 3).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้องใช้แต่ละ pestis Y. ถูกอ่างอย่างอิสระใน BHI 30 mlซุป (สมองหัวใจคอนกรีต BD-Difco สปาร์ค MD) ในการฆ่าเชื้อ 50-มล.หลอดทรงกรวยที่ 30 C (150 rpm) สำหรับ h 36 เพื่อความหนาแน่นของประมาณ 108 CFU/ml ใช้ลลาจี 24 รูปแบบรัฐนิวบรันสวิกบ่มเพาะวิสาหกิจ (เอดิสัน NJ) วัฒนธรรมได้แล้ว sedimented ด้วยcentrifugation (1200 กรัม) ใช้แบบมาราธอนวิทยาศาสตร์ Fisher21000R เครื่องหมุนเหวี่ยง (Needham ไฮท์ MA) ขี้เซลล์ได้แล้ว resuspended เป็นใน 30 mL Butterfield ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (BPB) (ใช้ สถาบันวิจัย Newtown, CT)มีหนึ่งร้อย mL (0.1 มิลลิลิตร) ของค็อกเทลหัวของ pestis Y.ชุบลงบนแผ่น BHIA ซ้ำซึ่งได้รับอนุญาตให้แห้งแล้วสำหรับประมาณ 5 นาที แผ่น agar ได้แล้วสัมผัสกับ 0.5 J /cm2 UV-C ใช้ลำเลียง UV-C ตามที่อธิบายไว้ด้านล่างสำหรับการทดลองใช้ exudates โพรพิลีนความหนาแน่นสูง(HDPP) และเอทิลีน (HDPE) และเหล็กกล้าไร้สนิมคูปอง (ลูกปัดเสียหาย และ electropolished) 0.1 mL ของ Y. pestis cocktailwas pipettedเป็น mL 0.9 ของ exudates ฆ่าเชื้ออาหาร ผสม โดย vortexing สำหรับ ca10 s, 0.1 mL โอนย้ายและการเย็น (4 C) อาหารผิวติดต่อและสัมผัสกับ UV-C ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง ก่อนการทดลองเหล็กกล้าไร้สนิมคูปองถูก sterilized โดย autoclavingในขณะที่ HDPP และ HDPE มีความสะอาด ด้วย 70% เอทานอลและต้อง 10 J/cm2 UV-cไก่ ปลา และชิ้นเนื้อมี inoculated บนด้านหนึ่งของการผิวกับ 1.0 mL (ca. 106 CFU/ml), แล้วที่ถูกแพร่กระจายในอาหารผิว (3 ซม 3) ใช้วน inoculation กอซ ที่ inoculatedชิ้นที่ได้รับอนุญาตให้นั่งอยู่ในตู้เย็น (4 C) สำหรับ ca. 30นาที และผ่านสายพานลำเลียงสามารถที่จำเป็นปริมาณ UV-C (0.25, 0.5, 1.0 และ 2.0 J/cm2)ต่อสัมผัสกับ UV-C ตัวอย่างอาหารถูกเก็บไว้ในกระบอกกระเป๋า polynylon (Uline, Inc. ฟิลาเดลเฟีย PA) ประกอบด้วย 100 มล BPBและ rinsed ด้วยตนเอง โดยการนวดสำหรับ ca 30 s โซลูชั่นแล้ว serially diluted 9 ml BPB และ aliquots 0.1 mL สองต่อเจือจางได้แพร่กระจายใน BHI แผ่น agar (BD-Difco สปาร์ค MD) ที่แผ่นได้แล้ว incubated สำหรับ 3 วันที่ 30 C ก่อนแจงนับของอาณานิคมจากแบคทีเรีย แต่ละการทดลองได้ดำเนินการอย่างอิสระอย่างน้อย 3 ครั้ง (n ¼ 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แต่ละ Y. pestis สายพันธุ์ได้รับการเพาะเลี้ยงเป็นอิสระใน 30 มล. BHI
น้ำซุป (สมองหัวใจ Infusion, BD-Difco ประกาย, MD) ในการฆ่าเชื้อ 50
มิลลิลิตรหลอดรูปกรวยวันที่ 30 องศาเซลเซียส (150 รอบต่อนาที) 36 ชั่วโมงความหนาแน่นของ
ประมาณ 108 CFU / ml โดยใช้นิวบรันรุ่น G24
บ่มเพาะวิสาหกิจ (เอดิสัน, นิวเจอร์ซีย์) วัฒนธรรมที่ถูกตกตะกอนแล้วโดยการหมุนเหวี่ยง (1200? กรัม) โดยใช้ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์มาราธอน 21000R เหวี่ยง (Needham Heights, MA) เม็ดเซลล์ถูกresuspended แล้วเป็นค๊อกเทลใน 30 มิลลิลิตรฟีลของฟอสเฟตบัฟเฟอร์(BPB) (ประยุกต์สถาบันวิจัยนิวทาวน์, CT). หนึ่งร้อยมิลลิลิตร (0.1 มิลลิลิตร) ของ Y. pestis เจือปนค๊อกเทลได้รับการเคลือบลงบนแผ่น BHIA ซ้ำกันซึ่งเป็น ได้รับอนุญาตให้แห้งประมาณ5 นาที แผ่นวุ้นได้สัมผัสแล้วถึง 0.5 J / cm2 UV-C โดยใช้ลำเลียง UV-C ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง. สำหรับการทดลองใช้สารที่หลั่งบนโพรพิลีนความหนาแน่นสูง(HDPP) และเอทิลีน (HDPE) และคูปองสแตนเลส (ลูกปัดเสียหายและเคมีไฟฟ้า) 0.1ml ของ Y. pestis cocktailwas ปิเปตเข้า0.9 มิลลิลิตรของ exudates อาหารผ่านการฆ่าเชื้อผสมโดย vortexing สำหรับแคลิฟอร์เนีย10 วินาทีและ 0.1 มิลลิลิตรย้ายไปที่แช่เย็น (4? C) พื้นผิวที่สัมผัสกับอาหารและการสัมผัสกับรังสีUV-C ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง . ก่อนที่จะมีการทดลองคูปองสแตนเลสได้รับการฆ่าเชื้อโดยการนึ่งฆ่าเชื้อในขณะที่HDPP และ HDPE ถูกทำความสะอาดด้วยเอทานอล 70% และจากนั้นภายใต้10 J / cm2 UV-C. ไก่, ปลา, และชิ้นเนื้อถูกเชื้อในด้านหนึ่งของพื้นผิว1.0 มิลลิลิตร (แคลิฟอร์เนียได้ 106 CFU / ml) ซึ่งได้รับการแพร่กระจายจากนั้นบนพื้นผิวอาหาร(3? 3 ซม.) โดยใช้ห่วงฉีดวัคซีนผ่านการฆ่าเชื้อ เชื้อชิ้นได้รับอนุญาตให้นั่งอยู่ในตู้เย็น (4? C) สำหรับแคลิฟอร์เนีย 30 นาทีและจากนั้นผ่านสายพานลำเลียงที่จะได้รับที่จำเป็นในปริมาณ UV-C (0.25, 0.5, 1.0 และ 2.0 J / cm2). หลังจากการสัมผัสกับรังสี UV-C ตัวอย่างอาหารถูกวางไว้ในการฆ่าเชื้อถุงpolynylon (ULINE, Inc , Philadelphia, PA) ที่มี 100ml BPB และล้างด้วยตนเองโดยการนวดสำหรับแคลิฟอร์เนีย 30 วินาที วิธีการแก้ปัญหาได้แล้วปรับลดลำดับ 9 มล. BPB และสอง 0.1 มิลลิลิตร aliquots ต่อการลดสัดส่วนที่ถูกแพร่กระจายบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อBHI (BD-Difco ประกาย, MD) แผ่นถูกบ่มแล้วเป็นเวลา 3 วันวันที่ 30 องศาเซลเซียสก่อนที่จะมีการแจงนับอาณานิคมของแบคทีเรีย การทดลองแต่ละคนได้รับการดำเนินการอย่างเป็นอิสระอย่างน้อย 3 ครั้ง (n ¼ 3)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แต่ละสายพันธุ์ Y pestis เลี้ยงอย่างอิสระใน BHI broth ( infusion 30 ml
หัวใจสมอง BD difco , ประกายไฟ , MD ) ในงาน 50 -
ml หลอดทรงกรวยที่ 30
C ( 150 รอบต่อนาที ) สำหรับ 36 ชั่วโมง , ความหนาแน่นของ
ประมาณ 108 CFU / ml โดยใช้แบบจำลอง g24
บรุนซ์ใหม่เครื่องฟักไข่ ( เอดิสัน , นิวเจอร์ซีย์ ) วัฒนธรรมเป็น sedimented โดย
3 ( 1200  กรัม ) โดยใช้
มาราธอนฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์21000r เครื่องหมุนเหวี่ยง ( เป็น Heights , MA ) เซลล์เม็ดถูก
แล้ว resuspended เป็นค็อกเทลในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ของบัตเตอร์ฟิลด์
30 ml ( BPB ) สถาบัน วิจัยประยุกต์ Newtown , CT ) .
100 ml ( 0.1 ml ) ของค็อกเทลเจือปน Y
pestis ถูกชุบใส่จาน bhia ซ้ำซึ่งได้รับอนุญาตแล้วให้แห้ง
ประมาณ 5 นาทีวุ้นแผ่นแล้วตาก 0 J /
CM2 รังสียูวี ซีโดยใช้สายพานลำเลียง รังสียูวี ซีตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง .
สำหรับการทดลองใช้สารที่หลั่งในความหนาแน่นสูง
โพรพิลีน ( hdpp ) และ polyethylene ( HDPE ) และคูปองสแตนเลส ( ลูกปัด
สามารถ electropolished ) 0.1ml ของ Y pestis cocktailwas pipetted
เป็น 0.9 ml ของสารที่หลั่งอาหารปลอดเชื้อ ผสมด้วย vortexing สำหรับ CA .
10 วินาที และ 0.1 ml ย้ายไปแช่เย็น ( 4
C )
พื้นผิวสัมผัสอาหารและสัมผัสกับรังสียูวี ซีตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง ก่อนทดลอง
สแตนเลสคูปองถูกฆ่าเชื้อโดยอัตราส่วนโฟกัส
ในขณะที่ hdpp และ HDPE สะอาดด้วยแอลกอฮอล์ 70% แล้ว
ภายใต้ 10 J / cm2 ไก่ ปลา uv-c.
, และชิ้นเนื้อปลูกเชื้อบนด้านหนึ่งของ
ผิว 1.0 มิลลิลิตร ( ประมาณ 106 cfu / ml ) ซึ่งก็กระจาย บน
อาหารผิว ( 3  3 เซนติเมตร ) โดยใช้ห่วงการเป็นหมันการปลูกเชื้อ
ชิ้นได้รับอนุญาตให้นั่งในตู้เย็น ( 4
องศาเซลเซียสประมาณ 30
มิน แล้วผ่านสายพานลำเลียงเพื่อให้ได้ปริมาณที่ต้องการ
รังสียูวี ซี ( 0.25 , 0.5 , 1.0 และ 2.0 J / cm2 ) .
ต่อไปนี้การสัมผัสกับรังสียูวี ซี , ตัวอย่างอาหารถูกวางไว้ในถุงปลอดเชื้อ
( polynylon uline , อิงค์ , Philadelphia , PA ) บรรจุ 100ml BPB
และล้างด้วยตนเองโดย massaging สำหรับประมาณ 30 วินาที ในสารละลาย
แล้วอนุกรม 9 มล. เจือจางใน BPB และสอง 0.1 มิลลิลิตรต่อการกระจายอยู่เฉยๆ
วุ้น BHI แผ่น BD difco , ประกายไฟ , MD )
แผ่นแล้วบ่มเชื้อเป็นเวลา 3 วัน ที่ 30
C ก่อนแจง
จากอาณานิคม แต่ละการทดลองอิสระ
อย่างน้อย 3 ครั้ง ( n ¼ 3 )