Strain Br 114 was classified to the

Strain Br 114 was classified to the Proteus penneri species based

on its ability of phenylalanine deamination and urease production

as well as the lack of ability of mannose and salicine fermentation,

ornithine decarboxylation and indole production. The bacteria

proved to be an S-form in all the performed S-R tests. The cells of

the studied strain did not display pseudoagglutination in aq 0.85%

NaCl and maintained stable suspension after 2-h boiling in a culture

medium. Br 114 also demonstrated an intense swarming growth

ability at the distance of 18, 27, and 28 mm (average 24 mm) from

the place of spot inoculation during 24-h cultivation, expressing

4e5 cycles of consolidation-differentiation. The swarming ability is

considered as one of the virulence factors of Proteus spp. and is

more spectacular in comparison to other bacteria. Like most

frequently studied strains of P. mirabilis,

commonly exhibit this feature. Kwil et al.24 reported that all studied

P. penneri strains presented the swarming growth and as many as

68% of 72 strains at a distance bigger than 30 mm. It was speculated

that the presence of specific constituents in O-antigens and

capsular polysaccharides of Proteus spp. as well as their acidic

character facilitate the movement of bacteria on a solid

surface.11,25,26

Silver stained SDS-PAGE electrophorogram of the P. penneri Br

114 LPS extracted from bacterial mass by the phenol-water

method18 showed fast migrating bands of O-polysaccharide-lack-
ing molecules, as well as slowly migrating bands of high-molecular-
mass species composed of lipid A, core oligosaccharide, and O-
specific polysaccharide (O-antigen) (Fig. 1). Therefore, Br 114 is

recognized as an S-form strain producing the complete LPS

molecules.

Rabbit polyclonal serum against P. penneri Br 114 reacted

strongly in ELISA with the homologous LPS to the titre 1:2,048,000

but no cross reactivity was observed with any of the LPS

23 P. penneri isolates preparations from strains representing all 79 known Proteus spp. O-
serogroups.12 These data suggested the serological uniqueness of

the P. penneri Br 114 O-antigen.

This conclusion was confirmed by the chemical studies of the

P. penneri Br114 O-polysaccharide. A high-molecular-mass poly-
saccharide was isolated by mild acid degradation of the LPS fol-
lowed by GPC of the carbohydrate portion on Sephadex G-50. Sugar

analysis using GLC of the acetylated alditols revealed galactose

(Gal) and N-acetyl-galactosamine (GalNAc) in the ratio 0.9: 1 (de-
tector response), respectively, as well as traces of glucose (Glc). In

addition, glucuronic acid (GlcA) was identified by anion-exchange

chromatography using a sugar analyzer, and amino acid analysis

revealed serine. The D configuration of Gal and GalN and the L

configuration of serine were determined by GLC of the acetylated

(S)-2-octyl glycosides; the D configuration of GlcA was confirmed by

13C NMR spectroscopy (see below). Methylation analysis, including

GLC-MS of the partially methylated alditol acetates, revealed 3-

substituted Gal, as well as terminal, 3-substituted, and 3,4-

substituted GalNAc residues.

The 13C NMR spectrum of the O-polysaccharide (Fig. 2, top)

showed its heterogeneity, which was caused evidently by non-
stoichiometric O-acetylation, as followed by the presence of a

peak for CH3 of an O-acetyl group at dC 21.5 and dH 2.11. O-Deace-
tylation with aq 12% ammonia resulted in a modified poly-
saccharide with NMR spectra typical of a regular polymer

(Tables 1 and 2). Its 13C NMR spectrum (Fig. 2, bottom) showed

signals for five sugar residues, including those for five anomeric

carbons at d 100.3e105.5, four nitrogen-bearing carbons (C-2 of

GalNAc and Ser) at d 52.0e57.8, three N-acetyl groups at

d 23.6e23.8 (Me) and d 175.4e175.7 (CO), and two carboxyl groups:

C-6 of GlcA at d 171.3 and C-1 of Ser at d 176.6. There were no peaks

in the region d 83e88 and, hence, all sugar residues are pyr-
anosidic.27 The 1

inter alia signals for five anomeric protons at d 4.47e5.35 and three

N-acetyl groups at d 2.03e2.08.

The 1

H and 13C NMR spectra of the O-deacetylated poly-
saccharide were assigned using 2D 1

H NMR spectrum of the polysaccharide contained

H,1

H COSY, TOCSY, ROESY,H,13C HSQC, and HMBC experiments. The configurations of the

glycosidic linkages were established by J1,2 coupling constant

values of ~3 Hz for a-Galp (unit C) and 7.3e7.5 Hz for b-GlcpA (unit

D) and b-GalpNAc (units A, B, and E).

The ROESY spectrum showed the following cross-peaks be-
tween the anomeric protons and protons at the linkage carbons: b-
GalNAc A H-1/b-GalNAc B H-3; b-GalNAc B H-1/a-Gal C H-3; a-Gal

C H-1/b-GlcA D H-3; b-GlcA D H-1/b-GalNAc E H-3, and b-GalNAc EH-1/b-GalNAc B H-4 at d 4.47/3.87, 4.61/3.95, 5.35/3.70, 4.67/3.89,

and 5.01/3.71, respectively. Relatively low-field positions of the

signals for C-3 of b-GalNAc B (dC 80.1), a-Gal C (dC 80.0), b-GlcA D (dC

82.1), and b-GalNAc E (dC 82.3) as well as C-4 of b-GalNAc B (dC

76.1), as compared with the corresponding signals in the non-
substituted sugars,28 were in agreement with the mode of the

monosaccharides substitution. The linkages and monosaccharide

sequence were confirmed by an 1

revealed the following correlations between the anomeric protons

and linkage carbons: b-GalNAc A H-1/b-GalNAc B C-3, b-GalNAc B

H-1/a-Gal C C-3, a-Gal C H-1/b-GlcA D C-3, and b-GlcA D H-1/b-
GalNAc E C-3 at d 4.47/80.1, 4.61/80.0, 5.35/82.1, and 4.67/82.3,

respectively.

Localization of serine at the carboxyl group of GlcA was

confirmed by the ROESY experiment on a solution of the O-
deacetylated polysaccharide in a 9:1 H2O/D2O mixture (Fig. 3),

which showed cross-peaks of Ser NH with GlcA H-4 and H-5 at

d 3.84/8.09 and 3.97/8.09, respectively.

As compared with the data of the O-acetylated polysaccharide,

H,13C HSQC spec-
trum of the initial O-polysaccharide was shifted significantly

part of a H-4/C-4 cross-peak of GlcA in the 2D 1

downfield in the 1

(Tables 1 and 2). This displacement was evidently due to a

deshielding effect of the O-acetyl group and defined O-acetylation

of GlcA at position 4. This conclusion was confirmed by upfield

shifts of the signals for the neighbouring carbons of GlcA, C-3 and

C-5, from d 82.1 and 75.8 to d 80.1 and 72.8, respectively (Table 2).

As judged by the ratio of the integral intensities of the signal for H-2

of GlcA and GlcA4Ac at d 3.47 and 3.55, respectively, the degree of

O-acetylation is ~60%.

Therefore, the O-polysaccharide of P. penneri Br 114 has the

structure shown in Fig. 4.

The O-polysaccharide studied presents a new chemotype

among the known Proteus O-antigen structures. It contains L-serine,

H,13C-HMBC experiment, which

H dimension from d 3.84/73.0 to d 5.08/73.2

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้องใช้ Br 114 ถูกแบ่งไปตามสายพันธุ์ penneri Proteusในความสามารถในการผลิต deamination และยู phenylalanineรวมทั้งการขาดความสามารถของหมักดองของ mannose และ salicineornithine decarboxylation และอินโดลการผลิต แบคทีเรียพิสูจน์ให้ S-รูปแบบในการทดสอบทั้งหมดที่ทำ S-R เซลล์ของพันธุ์ studied ไม่แสดง pseudoagglutination aq 0.85%NaCl และระงับมั่นคงยังคงอยู่หลังจากเดือด 2-h ในวัฒนธรรมสื่อ Br 114 ยังแสดงการเติบโต swarming รุนแรงความสามารถในระยะ 18, 27 และ 28 มม. (เฉลี่ย 24 mm) จากinoculation จุดในระหว่างการเพาะปลูก 24 h สถานแสดงวงจร 4e5 การสร้างความแตกต่างการรวมบัญชี มีความสามารถใน swarmingถือเป็นหนึ่งปัจจัย virulence ของ Proteus โอ และเป็นงดงามมากขึ้น โดยแบคทีเรียอื่น เช่นมากที่สุดมักศึกษาสายพันธุ์ของ P. mirabilisโดยทั่วไปแสดงคุณลักษณะนี้ Kwil et al.24 รายงานที่ศึกษาทั้งหมดสายพันธุ์ P. penneri แสดง swarming เจริญเติบโต และเป็น68% ของ 72 สายพันธุ์ที่ระยะมากกว่า 30 มม. มีการคาดการณ์ที่อยู่ของ constituents เฉพาะใน O antigens และpolysaccharides capsular Proteus โอตลอดจนความเปรี้ยวอักขระอำนวยความสะดวกในการเคลื่อนที่ของแบคทีเรียในของแข็งsurface.11,25,26SDS-เพ electrophorogram ของ P. penneri Br สีเงินLPS 114 ที่สกัดจากแบคทีเรียมวลน้ำวางmethod18 แสดงให้เห็นว่าวงการย้ายอย่างรวดเร็วของ O-polysaccharide-ขาด -ing โมเลกุล เป็นวงดีเป็นช้าโยกย้ายสูง-โมเลกุล-พันธุ์ใหญ่ประกอบด้วยไขมัน A, oligosaccharide หลัก และ O-เฉพาะ polysaccharide (O-ตรวจหา) (Fig. 1) ดังนั้น เป็น Br 114เป็นต้องใช้แบบฟอร์ม S การผลิต LPS สมบูรณ์โมเลกุลเซรั่ม polyclonal กระต่ายกับ P. penneri Br 114 ปฏิกิริยาที่เกิดขึ้นอย่างยิ่งใน ELISA กับ LPS homologous กับ titre 1:2,048,000แต่ไม่เกิดปฏิกิริยาระหว่างถูกตรวจสอบกับ LPSPenneri P. 23 แยกเตรียมจากสายพันธุ์ที่แสดงทั้งหมด 79 รู้จัก Proteus โอ O-เอกลักษณ์สภาวะของ serogroups.12 แนะนำข้อมูลเหล่านี้penneri P. Br 114 O-ตรวจหาข้อสรุปนี้ได้รับการยืนยัน โดยศึกษาสารเคมีP. penneri Br114 O-polysaccharide สูง--มวลโมเลกุลโพลีแบบsaccharide ถูกแบ่งแยกย่อยสลายกรดอ่อน fol LPS ที่-lowed โดย GPC ของส่วนคาร์โบไฮเดรตที่ Sephadex G-50 น้ำตาลวิเคราะห์ใช้ GLC acetylated alditols เปิดเผยกาแล็กโทส(Gal) และ N-acetyl-galactosamine (GalNAc) ในอัตราส่วน 0.9:1 (เดอ-tector การตอบสนอง), ตามลำดับ และร่องรอยของกลูโคส (Glc) ในนอกจากนี้ กรด glucuronic (GlcA) ได้ระบุ anion-แลกเปลี่ยนใช้วิเคราะห์น้ำตาล และกรดอะมิโนวิเคราะห์ chromatographyเปิดเผยแถ การกำหนดค่า D ของกัล และ GalN และ Lตั้งค่าคอนฟิกของแถถูกกำหนด โดย GLC ของการ acetylated(S) -2-octyl glycosides การกำหนดค่า D ของ GlcA ได้รับการยืนยันโดย13C NMR ก (ดูด้านล่าง) ปรับวิเคราะห์ รวมทั้งGLC-MS ของ alditol บางส่วน methylated acetates เปิดเผย 3-เทียบเท่ากัล เช่นเป็นเทอร์มินัล 3 แทน และ 3, 4-เทียบเท่า GalNAc ตกสเปกตรัม NMR 13C ของ O-polysaccharide กิน 2 สูงสุด)พบของ heterogeneity ซึ่งได้เกิดขึ้นอย่างเห็นได้ชัด โดยไม่stoichiometric O-acetylation ไปมาแล้วด้วยก็เป็นการสูงสุดสำหรับ CH3 ของกลุ่ม O acetyl ที่ dC 21.5 และ dH 2.11 O-Deace-tylation กับแอมโมเนีย aq 12% ส่งผลให้การปรับเปลี่ยนโพลี-saccharide กับแรมสเป็คตรา NMR ของพอลิเมอร์ทั่วไป(ตารางที่ 1 และ 2) พบสเปกตรัมของ NMR 13C (Fig. 2 ล่าง)สัญญาณสำหรับตกน้ำตาลห้า รวมถึงการห้า anomericcarbons ที่ d 100.3e105.5, carbons เรืองไนโตรเจน 4 (C-2 ของGalNAc และ Ser) ที่ 52.0e57.8 d, N-acetyl สามกลุ่มที่23.6e23.8 d (Me) และ d 175.4e175.7 (CO), และสองกลุ่ม carboxyl:C-6 GlcA ที่ d 171.3 และ C-1 ของ Ser ที่ d 176.6 มียอดเขาที่ไม่ในภูมิภาค d 83e88 และ จึง ทั้งหมดน้ำตาลตก pyr -anosidic.27 1สัญญาณ inter alia ห้า anomeric โปรตอนที่ d 4.47e5.35 และสามกลุ่ม N-acetyl ที่ d 2.03e2.081H และ 13C แรมสเป็คตรา NMR O deacetylated โพลี-saccharide ถูกกำหนดให้ใช้ 2D 1H NMR สเปกตรัมของ polysaccharide ที่อยู่H, 1ทดลองโค ซี่ H, TOCSY, ROESY, H, 13C HSQC และ HMBC การกำหนดค่าของการลิงค์ glycosidic ได้ก่อตั้ง โดย J1, coupling ค่าคง 2ค่าของ Hz ~ 3 สำหรับ (หน่วย C) ที่ Galp และ 7.3e7.5 Hz สำหรับบี-GlcpA (หน่วยD) และบี-GalpNAc (หน่วย A, B และ E)สเปกตรัม ROESY แสดงให้เห็นว่า สามารถต่อข้ามแห่ง-tween anomeric โปรตอนและโปรตอนที่ carbons เชื่อมโยง: b -GalNAc A H-1/b-GalNAc B H-3 b-GalNAc B H-1/a-Gal C H-3 ได้กัลC H-1/b-GlcA D H-3 b-GlcA D H-1/b-GalNAc E H-3 และ b-GalNAc เอ๊ะ-1/b-GalNAc B H-4 ที่ d 4.47/3.87, 4.61/3.95, 5.35/3.70, 4.67/3.89และ 5.01/3.71 ตามลำดับ ค่อนข้างต่ำฟิลด์ตำแหน่งของการสัญญาณสำหรับ C-3 บีบี GalNAc (dC 80.1), ต่อกัล (dC 80.0), C b GlcA D (dC82.1), และบี-GalNAc E (dC 82.3) เป็น C-4 บีบี GalNAc (dC76.1), เป็นเปรียบเทียบกับสัญญาณที่สอดคล้องกันในไม่เทียบเท่าน้ำตาล 28 ที่ยังคงวิธีการmonosaccharides แทน ลิงค์และ monosaccharideลำดับถูกยืนยัน โดย 1เปิดเผยความสัมพันธ์ต่อไปนี้ระหว่างโปรตอน anomericและเชื่อมโยง carbons: b-GalNAc A H-1/b-GalNAc B C-3, b GalNAc BH-1/a-Gal C C-3, a-Gal C H-1/b-GlcA D C-3 และ b-GlcA D H-1/b-GalNAc E C-3 ที่ d 4.47/80.1, 4.61/80.0, 5.35/82.1, 4.67/82.3ตามลำดับแปลของแถที่กลุ่ม carboxyl ของ GlcA ได้ยืนยัน ด้วยการทดสอบ ROESY ในโซลูชันของ O-polysaccharide deacetylated ส่วนผสมของ H2O/D2O 9:1 (Fig. 3),ซึ่งแสดงให้เห็นว่าข้ามยอดเขาของ Ser NH 4 GlcA H และ H-5 ที่d 3.84/8.09 และ 3.97/8.09 ตามลำดับเมื่อเทียบกับข้อมูลของ polysaccharide O acetylatedH, 13 C HSQC ข้อมูลจำเพาะ-trum polysaccharide O ที่เริ่มต้นถูกเปลี่ยนอย่างมีนัยสำคัญส่วน H-4/C-4 ข้ามสูงสุดของ GlcA ในสองมิติ 1downfield ใน 1(ตารางที่ 1 และ 2) ปริมาณกระบอกสูบนี้ได้อย่างเห็นได้ชัดเนื่องการผล deshielding ของกลุ่ม O acetyl และ O acetylation กำหนดของ GlcA ที่ตำแหน่งที่ 4 ข้อสรุปนี้ได้รับการยืนยัน โดย upfieldกะสัญญาณสำหรับ carbons เพื่อนของ GlcA, C-3 และC-5 จาก d 82.1 และ 75.8 การ d 72.8 และ 80.1 ตามลำดับ (ตารางที่ 2)ที่ตัดสิน โดยอัตราการปลดปล่อยก๊าซเป็นสัญญาณสำหรับ H-2GlcA และ GlcA4Ac ที่ d 3.47 และ 3.55 ตามลำดับ ระดับของO acetylation ~ 60% ได้, O-polysaccharide ของ P. penneri Br 114 มีการโครงสร้างที่แสดงใน Fig. 4O-polysaccharide ศึกษาแสดง chemotype ใหม่ระหว่างโครงสร้าง Proteus O-ตรวจหาชื่อดัง ประกอบด้วย L-แถH, 13C-HMBC ทดลอง ซึ่งขนาด H จาก d 3.84/73.0 d 5.08/73.2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สายพันธุ์ Br 114 จำแนกสายพันธุ์ Proteus penneri ตามกับความสามารถในการ deamination phenylalanine และการผลิตยูรีเอสเช่นเดียวกับการขาดความสามารถในการหมักและ mannose salicine, decarboxylation Ornithine และการผลิตที่อินโด เชื้อแบคทีเรียที่พิสูจน์แล้วว่าเป็น S-ในทุกรูปแบบการดำเนินการทดสอบเอสอาร์ เซลล์ของสายพันธุ์ที่ศึกษาไม่ได้แสดงใน pseudoagglutination AQ 0.85% โซเดียมคลอไรด์และการบำรุงรักษาระบบกันสะเทือนที่มีเสถียรภาพหลังจาก 2 ชั่วโมงต้มในวัฒนธรรมกลาง Br 114 นอกจากนี้ยังแสดงให้เห็นถึงการเจริญเติบโตที่ปีนป่ายที่รุนแรงความสามารถในระยะทาง 18, 27, และ 28 มิลลิเมตร (เฉลี่ย 24 มิลลิเมตร) จากสถานที่ของการฉีดวัคซีนจุดในช่วงการเพาะปลูกตลอด 24 ชั่วโมงแสดงรอบ 4e5 ของการรวม-ความแตกต่าง ความสามารถในการจับกลุ่มจะถือเป็นหนึ่งในปัจจัยที่รุนแรงของเอสพีพี Proteus และเป็นที่น่าตื่นเต้นมากขึ้นเมื่อเทียบกับเชื้อแบคทีเรียอื่น ๆ ชอบมากที่สุดสายพันธุ์ที่พบบ่อยของการศึกษา mirabilis พีทั่วไปแสดงคุณลักษณะนี้ Kwil et al.24 รายงานว่าทุกการศึกษาพี สายพันธุ์ penneri นำเสนอการเจริญเติบโตและการปีนป่ายมากที่สุดเท่าที่68% จาก 72 สายพันธุ์ที่ระยะทางขนาดใหญ่กว่า 30 มิลลิเมตร มันได้รับการคาดการณ์ว่าการปรากฏตัวขององค์ประกอบที่เฉพาะเจาะจงใน O-แอนติเจนและpolysaccharides capsular ของเอสพีพี Proteus เช่นเดียวกับที่เป็นกรดของพวกเขาตัวละครที่อำนวยความสะดวกในการเคลื่อนไหวของแบคทีเรียในของแข็งsurface.11,25,26 สีเงินสี electrophorogram SDS-PAGE ของพี penneri Br 114 LPS สกัดจากมวลแบคทีเรียโดยฟีนอลน้ำmethod18 วงดนตรีที่แสดงให้เห็นว่าการโยกย้ายอย่างรวดเร็ว O-polysaccharide-lack- ไอเอ็นจีโมเลกุลเช่นเดียวกับการโยกย้ายช้าของวงดนตรีที่สูง molecular- ชนิดมวลประกอบด้วยไขมัน, oligosaccharide หลักและ O- polysaccharide เฉพาะ (O-แอนติเจน) (รูปที่ 1). ดังนั้น Br 114 จะได้รับการยอมรับในฐานะที่เป็นสายพันธุ์ S-รูปแบบการผลิตที่สมบูรณ์ LPS โมเลกุล. กระต่ายกับซีรั่มโพลีพี penneri Br 114 ปฏิกิริยามั่นในวิธี ELISA กับ LPS คล้ายคลึงกัน titre ที่ 1: 2,048,000 แต่ไม่มีปฏิกิริยาข้ามสังเกตเห็นใด ๆ LPS 23 พี penneri เตรียมแยกจากสายพันธุ์ที่เป็นตัวแทนที่รู้จักกันทั้งหมด 79 เอสพีพี Proteus O- serogroups.12 ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นเอกลักษณ์ทางภูมิคุ้มกันของพี penneri Br 114 O-แอนติเจน. ข้อสรุปนี้ได้รับการยืนยันจากการศึกษาทางเคมีของพี penneri Br114 O-polysaccharide โพลีสูงโมเลกุลมวลsaccharide ที่แยกได้จากการย่อยสลายกรดอ่อน ๆ ของ LPS ไปนี้lowed โดย GPC ส่วนคาร์โบไฮเดรตใน Sephadex G-50 น้ำตาลโดยใช้การวิเคราะห์ของ GLC alditols acetylated เปิดเผยกาแลคโต(สาว) และ N-acetyl-galactosamine (GalNAc) ในอัตราส่วน 0.9: 1 (de- ตอบสนอง Tector) ตามลำดับเช่นเดียวกับร่องรอยของกลูโคส (Glc) ในนอกจากนี้ glucuronic กรด (GlcA) ที่ถูกระบุโดยการแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโดยใช้การวิเคราะห์น้ำตาลและการวิเคราะห์กรดอะมิโนเผยซีรีน การกำหนดค่า D ของสาวและ GalN และ L การกำหนดค่าของซีรีนได้รับการพิจารณาโดย GLC ของ acetylated (S) ไกลโคไซด์ -2-octyl; การกำหนดค่าของ D GlcA รับการยืนยันจากสเปคโทร 13C NMR (ดูด้านล่าง) การวิเคราะห์ methylation รวมทั้งGLC-MS ของอะซีเตท alditol แอลกอฮอล์บางส่วนเผย 3 สาวแทนเช่นเดียวกับมินัล 3 แทนและ 3,4- แทนตกค้าง GalNAc. 13C NMR สเปกตรัมของ O-polysaccharide (รูปที่ 2 บน) แสดงให้เห็นถึงความแตกต่างของมันซึ่งมีสาเหตุมาอย่างเห็นได้ชัดโดยไม่stoichiometric O-acetylation เป็นตามด้วยการปรากฏตัวของยอด CH3 ของกลุ่ม O-acetyl ที่ DC 21.5 และ DH 2.11 O-Deace- tylation กับแอมโมเนีย AQ 12% ส่งผลให้มีการปรับเปลี่ยนโพลีsaccharide กับ NMR สเปกตรัมแบบฉบับของพอลิเมอปกติ(ตารางที่ 1 และ 2) 13C NMR สเปกตรัมของมัน (รูปที่ 2. ด้านล่าง) แสดงให้เห็นสัญญาณห้าตกค้างน้ำตาลรวมทั้งผู้ที่ห้า anomeric ก๊อบปี้ที่ d 100.3e105.5 สี่คาร์บอนไนโตรเจนแบริ่ง (C-2 ของGalNAc และ Ser) ที่ d 52.0e57 8 สามกลุ่ม N-acetyl ที่d 23.6e23.8 (Me) และ d 175.4e175.7 (CO) และทั้งสองกลุ่ม carboxyl: C-6 GlcA งที่ 171.3 และ C-1 ของ Ser งที่ 176.6 มียอดเขาที่ไม่มีอยู่ในภูมิภาค d 83e88 และดังนั้นตกค้างน้ำตาลทั้งหมดเป็น pyr- ​​anosidic.27 1 อนึ่งสัญญาณห้าโปรตอน anomeric ที่ d 4.47e5.35 สามกลุ่ม N-acetyl ที่ d 2.03e2.08 1 H และ 13C NMR สเปกตรัมของโอเซลโพลีsaccharide ที่ได้รับมอบหมายโดยใช้ 2D 1 H NMR สเปกตรัมของ polysaccharide ที่มีเอช 1 H โคซี่, TOCSY, ROESY, H, 13C HSQC และทดลอง HMBC การกำหนดค่าของการเชื่อมโยง glycosidic ถูกจัดตั้งขึ้นโดยการมีเพศสัมพันธ์อย่างต่อเนื่อง J1,2 ค่า ~ 3 เฮิรตซ์สำหรับ-Galp (หน่วย C) และ 7.3e7.5 เฮิร์ตซ์สำหรับ B-GlcpA (หน่วยD) และ B-GalpNAc (หน่วย A, B . และ E) สเปกตรัม ROESY แสดงให้เห็นยอดเขาข้ามต่อไปโดยสลับทวีโปรตอน anomeric และโปรตอนที่ก๊อบปี้เชื่อมโยง: B- GalNAc H-1 / b-B GalNAc H-3; B-B GalNAc H-1 / C Gal-H-3; Gal- C H-1 / b-D GlcA H-3; B-D GlcA H-1 / b-E GalNAc H-3 และข GalNAc EH-1 / B-B GalNAc H-4 d 4.47 / 3.87, 4.61 / 3.95, 5.35 / 3.70, 4.67 / 3.89, และ 5.01 / 3.71 ตามลำดับ ตำแหน่งที่ค่อนข้างต่ำด้านการส่งสัญญาณสำหรับ C-3 ของข GalNAc B (DC 80.1) Gal-C (DC 80.0) ข GlcA D (DC 82.1) และ B-GalNAc E (DC 82.3) ในขณะที่ รวมทั้ง C-4 ของข GalNAc B (DC 76.1) เมื่อเทียบกับสัญญาณที่สอดคล้องกันในที่ไม่ใช่น้ำตาลแทน 28 อยู่ในข้อตกลงกับโหมดของการทดแทน monosaccharides เชื่อมโยงและโมโนแซ็กคาไรด์ลำดับได้รับการยืนยันจาก 1 เปิดเผยความสัมพันธ์ดังต่อไปนี้ระหว่างโปรตอน anomeric ก๊อบปี้และการเชื่อมโยง: B-GalNAc H-1 / b-GalNAc B C-3, B-B GalNAc H-1 / Gal-C C-3, C-Gal H-1 / b-D GlcA C-3 และ B-D GlcA H-1 / B- GalNAc E C-3 d 4.47 / 80.1, 4.61 / 80.0, 5.35 / 82.1, และ 4.67 / 82.3, . ตามลำดับรองรับหลายภาษาของซีรีนที่กลุ่ม carboxyl ของ GlcA ได้รับการยืนยันจากการทดลอง ROESY ในการแก้ปัญหาของ O- deacetylated polysaccharide ใน 9: 1 ผสม H2O / D2O. (รูปที่ 3) ซึ่งแสดงให้เห็นข้าม ยอด Ser NH กับ GlcA H-4 และ H-5 d 3.84 / 8.09 และ 3.97 / 8.09 ตามลำดับ. เมื่อเทียบกับข้อมูลของ polysaccharide O-acetylated, H, 13C HSQC spec- trum ของเริ่มต้น O-polysaccharide ขยับอย่างมีนัยสำคัญส่วนหนึ่งของ H-4 / C-4 ข้ามจุดสูงสุดของ GlcA ใน 2D 1 ร่นใน 1 (ตารางที่ 1 และ 2) การเคลื่อนที่นี้เห็นได้ชัดเนื่องจากผล deshielding ของกลุ่ม O-acetyl และกำหนด O-acetylation ของ GlcA ที่ตำแหน่ง 4. ข้อสรุปนี้ได้รับการยืนยันโดย upfield เปลี่ยนแปลงของสัญญาณในการก๊อบปี้ใกล้เคียง GlcA C-3 และC-5 จาก d 82.1 และ 75.8 จะ d 80.1 และ 72.8 ตามลำดับ (ตารางที่ 2). ในฐานะที่ตัดสินโดยอัตราส่วนของความเข้มของสัญญาณหนึ่งสำหรับ H-2 ของ GlcA และ GlcA4Ac งที่ 3.47 และ 3.55 ตามลำดับระดับของO -acetylation เป็น ~ 60%. ดังนั้น O-polysaccharide พี penneri Br 114 มีโครงสร้างที่แสดงในรูป 4. O-polysaccharide การศึกษาที่มีการจัด chemotype ใหม่ที่รู้จักกันในหมู่ Proteus โครงสร้าง O-แอนติเจน มันมีตัว L ซีรีน, H, ทดลอง 13C-HMBC ซึ่งมิติ H จาก 3.84 d / 73.0 เพื่อ d 5.08 / 73.2