The heme domain of Chlamydomonas eu

The heme domain of Chlamydomonas eugametos LI637, CtrHb, was
chosen as a validation protein for several reasons. (1) CtrHb has been
the focus of spectroscopic [23,29,30] and structural [31] studies. TheWTprotein is therefore alreadywell characterized. (2) Sequence identity
with Synechococcus and Synechocystis GlbNs (Fig. 2) is a modest ~46%
with differences distributed throughout the structure, including the
heme cavity. (3) In GlbN, the WT reactive histidine is in the H helix
(His117, at helical position “H16”) and the engineered reactive histidine
is in the FG corner (His79). A superimposition of the three-dimensional
structures of cyanomet (ferric state with cyanide bound) CtrHb and
post-translationally modified cyanomet Synechocystis GlbN (hereafter
GlbN-A) (Fig. 2) reveals that CtrHb has two-residue deletions near the
79 and 117 sites of GlbN. (4) Unlike both GlbNs, CtrHb does not have a
histidine that can reversibly coordinate the iron on the distal side. At
neutral pH and in the ferrous state, CtrHb is primarily a 5-coordinate
species [29]. Thus, CtrHb has distinct heme pocket composition, local
backbone geometry, and iron coordination that render it a rigorous test
case for the histidine–heme modification of the type depicted in Fig. 1b.
In this report, we inspected the reactivity of CtrHb variants with a
histidine facing either the heme 2- or 4-vinyl group on the proximal
side of the heme. We demonstrate that the histidine–heme modification
can be successfully implanted in CtrHb. Although spontaneous
crosslinking does not occur upon reduction to the ferrous state, the
addition of cyanide prior to reduction promotes the reaction. The results
support that histidine alkylationmay be a generalizable reaction for the
production of proteins containing a non-dissociable heme.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีโดเมน heme Chlamydomonas eugametos LI637, CtrHbเลือกเป็นโปรตีนตรวจสอบจากหลายสาเหตุ (1) CtrHb ได้จุดเน้นของการศึกษาโครงสร้าง [31] และด้าน [23,29,30] TheWTprotein เป็นลักษณะ alreadywell ดังนั้น (2) ลำดับรหัสประจำตัวSynechococcus Synechocystis GlbNs กิน 2) เป็นแบบเจียมเนื้อเจียมตัว ~ 46%มีความแตกต่างที่กระจายทั่วทั้งโครงสร้าง รวมถึงการheme โพรง (3) ใน GlbN, histidine ปฏิกิริยา WT เป็นเกลียว H(His117, helical ตำแหน่ง "H16" ที่) และ histidine ปฏิกิริยาออกแบบอยู่ในมุมของ FG (His79) Superimposition ของแบบสามมิติโครงสร้างของ cyanomet (เฟอร์สภาพกับไซยาไนด์ที่ผูก) CtrHb และแก้ไข post-translationally cyanomet Synechocystis GlbN (โดยGlbN-A) (Fig. 2) พบว่า CtrHb มีสารตกค้างสองลบใกล้79 และ 117 ไซต์ของ GlbN (4) แตกต่างจากทั้ง GlbNs, CtrHb ไม่มีการhistidine ซึ่ง reversibly สามารถประสานเหล็กทางด้านกระดูก ที่ค่า pH เป็นกลาง และรัฐ เหล็ก CtrHb เป็นหลัก 5 พิกัดสายพันธ์ [29] ดังนั้น CtrHb มี heme หมดกระเป๋าเขียน ท้องถิ่นแกนหลักเรขาคณิต และประสานงานเหล็กที่แสดงผลการทดสอบอย่างเข้มงวดกรณีปรับเปลี่ยน histidine – heme ชนิดนี้แสดงใน Fig. 1bในรายงานนี้ เราตรวจสอบการเกิดปฏิกิริยาของตัวแปร CtrHb มีการhistidine หันทั้ง heme 2 - หรือ 4-ไวนิลกลุ่ม proximalด้านของ heme เราแสดงให้เห็นถึงที่แก้ไข histidine – hemecan be successfully implanted in CtrHb. Although spontaneouscrosslinking does not occur upon reduction to the ferrous state, theaddition of cyanide prior to reduction promotes the reaction. The resultssupport that histidine alkylationmay be a generalizable reaction for theproduction of proteins containing a non-dissociable heme.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โดเมน heme ของ Chlamydomonas eugametos LI637, CtrHb ได้รับการ
เลือกให้เป็นโปรตีนการตรวจสอบด้วยเหตุผลหลายประการ (1) CtrHb ได้รับ
จุดเน้นของสเปกโทรสโก [23,29,30] และโครงสร้าง [31] การศึกษา TheWTprotein จึงโดดเด่น alreadywell (2) ตัวตนลำดับ
ด้วย Synechococcus และ Synechocystis GlbNs (รูปที่ 2). เป็นเจียมเนื้อเจียมตัว ~ 46%
มีความแตกต่างกระจายไปทั่วโครงสร้างรวมทั้ง
ช่อง heme (3) ใน GlbN, ฮิสติดีนปฏิกิริยา WT อยู่ในส่วนที่เป็นเกลียว H
(His117, ขดลวดที่ตำแหน่ง "H16") และฮิสติดีนปฏิกิริยาการออกแบบ
เป็นในมุม FG (His79) เชิงซ้อนของสามมิติ
โครงสร้างของ cyanomet (รัฐ ferric กับไซยาไนด์ผูกพัน) CtrHb และ
การโพสต์ translationally แก้ไข cyanomet Synechocystis GlbN (ต่อ
GlbN-) (รูปที่ 2). แสดงให้เห็นว่ามีการลบ CtrHb สองตกค้างใกล้
79 และ 117 เว็บไซต์ของ GlbN (4) ซึ่งแตกต่างจาก GlbNs ทั้งสอง CtrHb ไม่มี
ฮิสติดีนที่พลิกกลับสามารถประสานงานเหล็กที่ด้านปลาย ที่
มีค่า pH เป็นกลางและอยู่ในสภาพเหล็ก CtrHb เป็นหลัก 5 พิกัด
สายพันธุ์ [29] ดังนั้น CtrHb มีองค์ประกอบที่แตกต่างกระเป๋า heme ท้องถิ่น
เรขาคณิตกระดูกสันหลังและการประสานงานเหล็กที่ทำให้มันมีการทดสอบอย่างเข้มงวด
กรณีการปรับเปลี่ยนฮิสติดีน-heme ประเภทที่ปรากฎในรูป 1b.
ในรายงานฉบับนี้เราตรวจสอบการเกิดปฏิกิริยาของพันธุ์ CtrHb กับ
ฮิสติดีนหันหน้าไปทางทั้ง heme 2 หรือกลุ่ม 4 ไวนิลที่ใกล้เคียง
ด้านข้างของ heme เราแสดงให้เห็นว่าการปรับเปลี่ยนฮิสติดีน-heme
สามารถประสบความสำเร็จได้รับการปลูกฝังใน CtrHb แม้ว่าธรรมชาติ
เชื่อมขวางไม่ได้เกิดขึ้นเมื่อมีการลดลงของรัฐเหล็ก
นอกจากไซยาไนด์ก่อนที่จะมีการลดส่งเสริมปฏิกิริยา ผลการ
สนับสนุนที่ฮิสติดีน alkylationmay เป็นปฏิกิริยา generalizable สำหรับ
การผลิตโปรตีนที่มี heme ที่ไม่ dissociable

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ส่วนฮีมโดเมนของคลาไมโดโมแนส eugametos li637 ctrhb , ,
เลือกเป็นการตรวจสอบโปรตีนสำหรับหลายสาเหตุ ( 1 ) ctrhb ได้รับ
เน้นทาง [ 23,29,30 ] และโครงสร้าง [ 31 ] การศึกษา thewtprotein จึง alreadywell ลักษณะ . ( 2 ) ลําดับและเอกลักษณ์
กับซินโคคอคคัส synechocystis glbns ( รูปที่ 2 ) เป็นเจียมเนื้อเจียมตัว ~ 46 %
กับกระจายทั่วโครงสร้างของความแตกต่างรวมทั้ง
ฮีมในโพรง ( 3 ) ใน glbn , WT เชิงรับีนอยู่ใน H เกลียว
( his117 ในตำแหน่ง " ลานี่ " ) และวิศวกรรมปฏิกิริยาีน
อยู่ในมุม FG ( his79 ) เป็นประสิทธิภาพเยี่ยมด้านของโครงสร้างสามมิติของ cyanomet
( เฟอร์รัฐที่มีไซยาไนด์และผูก ) ctrhb
โพสต์ translationally แก้ไข cyanomet synechocystis glbn ( ต่อ
glbn-a ) ( ภาพประกอบ2 ) พบว่ามีสารตกค้างลบสอง ctrhb ใกล้
79 และ 117 เว็บไซต์ของ glbn . ( 4 ) ไม่เหมือนทั้ง glbns ctrhb , ไม่มี
โล่งอกที่สามารถซึ่งพลิกกลับได้ประสานงานเหล็กด้านปลาย . ที่ pH เป็นกลาง และในรัฐ
เหล็ก , ctrhb เป็นหลัก 5-coordinate
ชนิด [ 29 ] ดังนั้น ctrhb ได้ชัดเจนมากกว่ากระเป๋าองค์ประกอบหลักเรขาคณิตท้องถิ่น
,และ การประสานงานที่แสดงเป็นกรณีทดสอบที่เข้มงวดสำหรับฮีมีน
และปรับเปลี่ยนประเภทของภาพในรูป 1B .
ในรายงานนี้ เราตรวจสอบค่าของตัวแปรด้วย
ctrhb ีนซึ่งทั้ง 2 กลุ่มหรือมากกว่า 4-vinyl ด้านการทำงาน
ของท่าน เราแสดงให้เห็นว่า เมื่อท่านได้สำเร็จและปรับเปลี่ยน
ที่ฝังอยู่ใน ctrhb . แม้ว่าโดยธรรมชาติ
อย่างไรก็ตามไม่ได้เกิดขึ้นเมื่อลดสถานะเหล็ก ,
1 ไซยาไนด์ก่อนการส่งเสริมการ ผลลัพธ์
สนับสนุนเมื่อ alkylationmay เป็นปฏิกิริยา generalizable สำหรับการผลิตของโปรตีนที่มี
ไม่ dissociable มากกว่า