Western blotting. Eap in the biofilm

Western blotting. Eap in the biofilm matrix fraction of S. aureus MR23 was detected by Western blotting. Anti-Eap polyclonal antibody (primary antibody; Abcam) and goat anti-rabbit IgG-horseradish peroxidase (HRP; secondary antibody; Bio-Rad) were diluted 1,000- and 200,000-fold, respectively, in Tris-buffered saline (TBS)–Tween (TBS-T; 20mMTris-HCl, pH7.6, 137mMNaCl, 0.1%[vol/vol] Tween 20). Samples were separated by SDS-PAGE and transferred to an Immobilon-P membrane (Millipore Corp.). To block unspecific interactions with IgG-binding proteins, the membrane was incubated for 1 h with 5% (vol/vol) goat serum (Sigma) dissolved in TBS buffer containing 0.3% (wt/vol) bovine serum albumin (BSA; Sigma) as previously described (26). Spa in S. aureus MR23 biofilm matrix and cell wall fractions was detected using rabbit IgG(Sigma) and goat anti-rabbit IgG-HRP (Bio-Rad). The primary
antibody and secondary antibody were diluted 20,000-fold in TBS-T. Samples were separated and transferred as mentioned above. The membranes were incubated for 1 h with 3%BSA (Sigma) in TBS-T. Themembrane was treated with the primary antibody at 25°C for 1 h and then washed twice with TBS-T. Subsequently, themembrane was incubated in TBS-T containing the secondary antibody. After washing three times with TBS-T, the immunoreactive signals were detected with an ECL-plus detection kit (GE Healthcare).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Blotting วิธีเวสเทิร์น Eap ในเศษส่วนเมทริกซ์ biofilm ของหมอเทศข้างลาย S. MR23 พบ โดย blotting วิธีตะวันตก ป้องกัน Eap polyclonal แอนติบอดี (แอนติบอดีหลัก Abcam) และแพะกระต่ายป้องกัน IgG horseradish peroxidase (HRP แอนติบอดีรอง Bio-Rad) ได้แตกออก 1000 - และ 200,000-fold ตามลำดับ ในทริสเรทติ้ง buffered น้ำเกลือ (TBS) – Tween (TBS-T; 20mMTris-HCl, pH7.6, 137mMNaCl, 0.1%[vol/vol] Tween 20) ตัวอย่างถูกคั่น ด้วย SDS หน้า และโอนย้ายไป Immobilon P เมมเบรน (corp.มาก) บล็อก unspecific โต้ตอบกับ IgG รวมโปรตีน เมมเบรนมี incubated สำหรับ h 1 กับ 5% (vol/vol) ครีมซีรั่ม (ซิก) ละลายในบัฟเฟอร์ TBS ประกอบด้วย 0.3% (wt/vol) วัว serum albumin (บีเอสเอ ซิก) อธิบายไว้ว่า ก่อนหน้านี้ (26) หมอเทศข้างลาย S. MR23 biofilm เมตริกซ์และผนังเซลล์ส่วนสปาพบกระต่าย IgG(Sigma) และป้องกันกระต่ายแพะ IgG-HRP (ไบ-Rad) หลักแอนติบอดีและแอนติบอดีรองถูกผสม 20,000-fold ในต. TBS ตัวอย่างถูกแบ่ง และถ่ายโอนดังกล่าวข้างต้น สารถูก incubated สำหรับ h 1 กับ 3% บีเอสเอ (ซิกมา) ในต. TBS รับการรักษา ด้วยแอนติบอดีหลักที่ 25° C สำหรับ 1 h และล้างแล้ว สองครั้งกับ TBS ต. Themembrane ในเวลาต่อมา themembrane ถูก incubated ใน TBS-T ที่ประกอบด้วยแอนติบอดีรอง หลังจากซักสามครั้งกับ TBS-T สัญญาณ immunoreactive ตรวจพบกับชุดอุปกรณ์ตรวจสอบ ECL-พลัส (GE สุขภาพ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ซับตะวันตก EAP ในไบโอเมทริกซ์ Fi ส่วน LM ของเชื้อ S. aureus MR23 ถูกตรวจพบโดยวิธี western blotting ต่อต้าน Eap แอนติบอดีโพลี (หลักแอนติบอดี; Abcam) และแพะป้องกันกระต่าย IgG-มะรุม peroxidase (HRP; แอนติบอดีมัธยมศึกษาชีวภาพ -Rad) ได้รับการปรับลด 1,000 และ 200,000 พับน้ำเกลือตามลำดับในทริบัฟเฟอร์ (TBS) - ทวี (TBS-T; 20mMTris-HCl, pH7.6, 137mMNaCl 0.1% [ฉบับที่ / ฉบับ] Tween 20) ตัวอย่างถูกแยกออกโดยวิธี SDS-PAGE และโอนไปยังเมมเบรน Immobilon-P (คคอร์ป) เพื่อป้องกัน unspeci ปฏิสัมพันธ์ Fi คกับโปรตีน IgG ผูกพัน, เมมเบรนถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง 5% (ฉบับ / ปริมาตร) แพะซีรั่ม (Sigma) ที่ละลายในบัฟเฟอร์ TBS ที่มี 0.3% (น้ำหนัก / ปริมาตร) วัว serum albumin (BSA; Sigma) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (26) สปาเชื้อ S. aureus MR23 LM Fi ไบโอเมทริกซ์และผนังเซลล์ส่วนที่ตรวจพบโดยใช้กระต่าย IgG (Sigma) และแพะป้องกันกระต่าย IgG-HRP (ชีวภาพ -Rad) หลัก
แอนติบอดีและแอนติบอดีรองถูกปรับลด 20,000 เท่าใน TBS-T ตัวอย่างถูกแยกออกและโอนดังกล่าวข้างต้น เยื่อถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับ 3% BSA (Sigma) ใน TBS-T Themembrane รับการรักษาด้วยแอนติบอดีหลักที่ 25 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมงจากนั้นล้างสองครั้งกับ TBS-T ต่อมา themembrane ถูกบ่มใน TBS-T ที่มีแอนติบอดี้ที่สอง หลังจากล้างสามครั้งกับ TBS-T สัญญาณ immunoreactive ถูกตรวจพบด้วยชุดตรวจสอบ ECL บวก (GE Healthcare)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Western blotting . ในไบโอเมตริกซ์จึงถูก LM เศษส่วนของ S . aureus mr23 ที่ตรวจพบโดย Western blotting . ต่อต้าน EAP แอนติบอดีโพลี ( หลัก ) ; ABCAM ) และ IgG anti กระต่ายแพะมะรุมเปอร์ออกซิเดส ( HRP ; ระดับแอนติบอดี ; ไบแรด ) ลด 1000 - และ 200000 พับตามลำดับโดยในน้ำเกลือ ( TBS ) –ทวี ( tbs-t ; 20mmtris HCl , ph7.6 137mmnacl , 0.1% Tween 20 [ Vol / Vol ] )ตัวอย่างแยกได้ถูกย้ายไป immobilon-p เมมเบรน ( มิลลิ Corp . ) เพื่อป้องกัน unspeci จึง C ปฏิสัมพันธ์กับ IgG ผูกพันโปรตีนเมมเบรนถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับ 5 เปอร์เซ็นต์ ( ปริมาตร / ปริมาตร ) เซรั่มแพะ ( Sigma ) ละลายใน TBS buffer ที่มี 0.3 % ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) อัลบูมิน ( BSA ; Sigma ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 26 ) สปาในเกาหลีใต้( ไบโอ จึง mr23 LM เมทริกซ์และเซลล์ผนังที่ถูกตรวจพบการใช้เศษส่วนกระต่าย IgG ( Sigma ) และ IgG anti กระต่ายแพะช ( ไบโอ ราด ) ประถมศึกษา มัธยมศึกษา และ แอนติบอดี แอนติบอดี
ลด 20 , 000 พับในตัวอย่าง tbs-t. แยกและโอนดังกล่าวข้างต้น เยื่อถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง กับ 3 % BSA ( Sigma ) ใน tbs-t.themembrane ถูกปฏิบัติด้วยแอนติบอดีหลักที่ 25 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง แล้วล้างซ้ำด้วย tbs-t. ต่อมา themembrane ถูกบ่มใน tbs-t ที่มีแอนติบอดีทุติยภูมิ หลังจากล้างสามครั้งกับ tbs-t , สัญญาณ immunoreactive ถูกตรวจพบโดยการทดสอบบวกชุดตรวจจับ ( GE Healthcare )