Microbiological assaysAt the R1 gro

Microbiological assays
At the R1 growth stage (42 and 38 DAS for GR1 and GR2, respectively), shoots were clipped close to the ground, roots were carefully removed from soil and soil tightly adhering to the root surface (rhizoplane) was rigorously removed using a camel-hair brush and retained as ‘rhizosphere soil.’ A subsample of the cleaned roots was washed under running water and gently blotted on paper towels in preparation for microbiological assays. Roots were surface sterilized in 1Æ25% sodium hypochlorite for 2 min followed by rinsing three times in sterile water and blotted dry on sterile paper towels. Fusarium colonization of the surface-sterilized soybean root segments (8, 2-cm segments per agar plate) was assessed by the root-plating procedure of Le´vesque et al. (1993) on Fusarium-selective agar medium (Nash and Snyder 1962). After 5-day incubation at 25C, the number of fungal colonies developing on root segments was recorded.
A Fusarium colony that developed on a root segment was counted as a single colony-forming unit (CFU) of rhizoplane Fusarium. Total numbers of Fusarium colonies per plate were converted to Fusarium CFU per 100 cm of root. Fusarium colonies were randomly selected, subcultured on potato dextrose agar and tentatively identified using descriptions of cultural and microscopic morphologies (Nelson et al. 1983). Identification of isolates was confirmed by the USDA-ARS Microbial Genomics Unit, Peoria, Illinois, by molecular analysis using partial translation elongation factor sequences (Skovgaard et al. 2001).
A 1-g portion of rhizosphere soil from each sample was suspended in 0Æ01 mol l)1 MgSO4 buffer, and appropriate 10-fold dilutions were plated on S1 agar medium selective for fluorescent pseudomonads (Gould et al.1985) and on Gerretsen’s agar medium for detecting Mn-oxidizing and Mn-reducing micro-organisms (Huber and Graham 1992). After incubation at 25C (48 h for pseudomonads; 7 day for Mn-transforming bacteria), colonies developing on agar medium were recorded as colony-forming units in the rhizosphere. Mn-oxidizing colonies are brown to black on Gerretsen’s medium, and Mn-reducing bacteria are white to opaque within a cleared halo. Mn-transforming bacterial components were further expressed as ratios of Mn reducers to Mn oxidizers to detect potential effects of microbial activity on plant-available Mn (Rengel 1997).
Rhizosphere soils were screened for ı´ndoleacetic acid–producing (IAA) bacteriaby plating on S1 agar medium supplemented with 5 mmol l) 1 l-tryptophan. A nitrocellulose membrane(90 mm diameter) was placed directly on the agar surfaceafter plating prior to incubation (Bric et al. 1991). After 48 h, the nitrocellulose membrane was removed from each plate and placed on filter paper (Whatman 42) saturated with Salkowski reagent (2% 0 Æ 5 mol l)1 FeCl3 in 35% HClO4) in a clean petri plate for up to 4 h (Gordon and Weber 1951). Colonies that developed a pink colourwere scored positive for IAA production and were considered ‘IAA-producing rhizobacteria.’ Representative bacterial colonies from the pseudomonad, Mn transformer and IAA-producing assays were selected and subcultured on S1 and tryptic soy agars to obtain pure, single-colonyisolates. Isolates were characterized for colony morphology and fluorescent pigment production; gram stain and oxidase reactions; and classified taxonomically by cellular fatty acid profiles using gas chromatography-fatty acidmethyl ester analysis (Kennedy 1994).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจทางจุลชีววิทยาในระยะการเจริญเติบโต R1 (42 และ 38 DAS สำหรับ GR1 และ GR2 ตามลำดับ) หน่อถูกตัดใกล้กับพื้นดินที่รากถูกลบออกอย่างระมัดระวังจากดินและดินแน่นยึดมั่นในพื้นผิวราก (rhizoplane) จะถูกลบออกอย่างจริงจังโดยใช้ แปรงอูฐผมและเก็บไว้เป็น 'ดินบริเวณราก.
subsample ของรากล้างทำความสะอาดได้ภายใต้การใช้น้ำและเปื้อนเบา ๆ บนผ้าขนหนูกระดาษในการเตรียมตัวสำหรับการตรวจทางจุลชีววิทยา รากถูกฆ่าเชื้อพื้นผิวในโซเดียมไฮโปคลอไรต์1Æ25% เป็นเวลา 2 นาทีตามด้วยการล้างสามครั้งในน้ำหมันและเปื้อนแห้งบนผ้าขนหนูกระดาษผ่านการฆ่าเชื้อ การล่าอาณานิคมของเชื้อรา Fusarium ถั่วเหลืองพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อกลุ่มราก (8 ส่วน 2 ซม. ต่อจานเลี้ยงเชื้อ) ได้รับการประเมินโดยขั้นตอนรากชุบ Le'vesque et al, (1993) ในสื่อวุ้นเชื้อรา Fusarium-เลือก (แนชไนเดอร์และ 1962) หลังจากการบ่ม 5 วันที่25Cจำนวนโคโลนีของเชื้อราการพัฒนาในส่วนรากที่ถูกบันทึกไว้.
อาณานิคม Fusarium ที่พัฒนาในส่วนรากนับเป็นหน่วยอาณานิคมขึ้นรูปเดียว (CFU) ของเชื้อรา Fusarium rhizoplane ตัวเลขรวมของอาณานิคมของเชื้อรา Fusarium ต่อแผ่นถูกแปลงให้ Fusarium CFU ต่อ 100 เซนติเมตรราก อาณานิคมของเชื้อรา Fusarium ถูกเลือกสุ่มเลี้ยงบนอาหารเลี้ยงเชื้อเดกซ์โทรสมันฝรั่งและระบุไม่แน่นอนโดยใช้รายละเอียดของรูปร่างลักษณะทางวัฒนธรรมและกล้องจุลทรรศน์ (เนลสัน et al. 1983) บัตรประจำตัวของสายพันธุ์ได้รับการยืนยันโดย USDA-ARS จุลินทรีย์ฟังก์ชั่นหน่วยพีโอเรียอิลลินอยส์โดยการวิเคราะห์โมเลกุลโดยใช้ลำดับปัจจัยการยืดตัวแปลบางส่วน (Skovgaard et al. 2001).
ส่วน 1 กรัมของดินบริเวณรากจากแต่ละตัวอย่างถูกระงับใน0Æ01 โมลลิตร) 1 MgSO4 บัฟเฟอร์และเหมาะสมเจือจาง 10 เท่าถูกชุบวุ้นใน S1 กลางเลือกสำหรับ pseudomonads เรืองแสง (โกลด์ et al.1985) และในสื่อวุ้น Gerretsen สำหรับการตรวจสอบ Mn-ออกซิไดซ์และแมงกานีสลดจุลินทรีย์ (ฮิวและ เกรแฮม 1992) หลังจากการบ่มที่25C (48 ชั่วโมงสำหรับ pseudomonads 7 วัน Mn-เปลี่ยนแบคทีเรีย) อาณานิคมพัฒนาในสื่อวุ้นบันทึกเป็นหน่วยอาณานิคมขึ้นรูปบริเวณราก อาณานิคม Mn ออกซิไดซ์เป็นสีน้ำตาลเป็นสีดำในสื่อ Gerretsen และ Mn ลดแบคทีเรียที่เป็นสีขาวขุ่นจะอยู่ภายในรัศมีล้าง Mn-เปลี่ยนส่วนประกอบแบคทีเรียถูกแสดงต่อไปเป็นอัตราส่วน reducers Mn การออกซิไดเซอร์ Mn ในการตรวจสอบผลกระทบที่อาจเกิดขึ้นจากกิจกรรมของจุลินทรีย์ในโรงงานที่มีอยู่ Mn (Rengel 1997).
ดินบริเวณรากถูกคัดกรองı'ndoleaceticผลิตกรด (IAA) bacteriaby ชุบบน S1 กลางวุ้นเสริมด้วย 5 มิลลิโมลต่อลิตร) 1 ลิตรโพรไบโอ เมมเบรนไนโตรเซลลูโลส (90 มิลลิเมตร) ถูกนำมาวางบนอาหารเลี้ยงเชื้อชุบ surfaceafter ก่อนที่จะมีการบ่ม (Bric et al. 1991) หลังจาก 48 ชั่วโมง, เมมเบรน nitrocellulose จะถูกลบออกจากแต่ละแผ่นและวางไว้บนกระดาษกรอง (เบอร์ 42) อิ่มตัวกับสาร Salkowski (2% 0 Æ 5 โมลลิตร) 1 FeCl3 ใน 35% HClO4) ในจานเพาะเชื้อทำความสะอาดได้ถึง 4 h (กอร์ดอนและเวเบอร์ 1951) อาณานิคมที่พัฒนา colourwere สีชมพูคะแนนในเชิงบวกสำหรับการผลิต IAA และได้รับการพิจารณา 'IAA ผลิตแบคทีเรีย. แบคทีเรียที่ตัวแทนจาก pseudomonad ที่หม้อแปลง Mn และตรวจ IAA ผลิตได้รับการคัดเลือกและการเลี้ยงใน S1 และสาหร่ายถั่วเหลือง tryptic ที่จะได้รับบริสุทธิ์ colonyisolates เดียว แยกมีลักษณะสัณฐานสำหรับอาณานิคมและการผลิตเม็ดสีเรืองแสง; คราบกรัมและปฏิกิริยาออกซิเดส; และจัด taxonomically โดยกรดไขมันที่โทรศัพท์มือถือโดยใช้การวิเคราะห์เอสเตอร์ acidmethyl โคไขมันก๊าซ (เคนเนดี 1994)